BIFI-OBESE：儿童肥胖症的临床试验 (BIFI-OBESE)

研究设计：单中心试点开放标签随机对照试验。 人群：该研究将包括总共 100 名男女受试者，年龄在 6 至 18 岁之间，肥胖，根据 IOTF 标准，内脏肥胖，腰围≥第 90 个百分位，根据 Tanner 的青春期阶段≥2分期，HOMA-IR > 2,5 或胰岛素 > 15 µU/ml，未接受饮食或体重减轻失败（定义为 1 年内 -1 kg/m2 BMI）。

纳入/排除标准（见资格标准）。 干预：在研究的第一部分（研究 1，V0-V1）中，患者将在开放标签中随机分为受试者数量和性别均相同的两组。 一组将接受含有短双歧杆菌 B632 和短双歧杆菌 BR03 的益生菌补充剂，15 gtt/die (3x108 CFU/die)，一组将接受安慰剂，总共治疗 2 个月。 两组均根据常规护理和实践接受标准饮食。 对于想要继续研究的患者，将在一个月的清除后进行交叉研究（研究 2，V2-V3）。

饮食限制：标准饮食将分配 55-60% 的碳水化合物（45-50% 复合糖和不超过 10% 的精制和加工糖）、25-30% 的脂质和 15% 的蛋白质，并按照等热量均衡饮食的卡路里在整个意大利 LARN 年龄和性别指南中计算得出。

体力活动：所有受试者都将收到有关进行体力活动的一般建议。 锻炼将每天进行，包括 30 分钟的有氧运动。

随机化：参与者将以 1:1 的比例随机分配到益生菌干预组或安慰剂组。

时间：患者将首先在入组时（V0）进行评估，在研究的第一部分（研究 1，V1）结束时，将完成生化评估。 接下来，当患者不服用任何益生菌或安慰剂时，将进行一个月的洗脱期。 在研究 2 的第二部分，将在 V2 和治疗 2 个月后（研究 2，V3）对患者进行评估。 将获得以下人体测量、生化和超声评估和问卷调查：

1. 人体测量：

   • 高度（V0、V1、V2、V3）；
   • 重量（V0、V1、V2、V3）；
   • 体重指数（BMI；Kg/m2）（V0、V1、V2、V3）；
   • 腰围和臀围（V0、V1、V2、V3）用于计算以下比例：腰围/臀围、腰围/身高；
   • 坦纳阶段（V0、V1、V2、V3）；
   • 血压和心率（V0、V1、V2、V3）。生化评估（禁食 12 小时后）：含配方的 CBC、血清胰岛素样生长因子 1（IGF1，ng/mL）、25-羟基 (OH) 维生素 D（ng/mL）、尿酸（mg/ dL)、碱性磷酸酶 (U/L)、ACTH (pg/mL)、皮质醇 (microg/dL)、TSH (uuI/mL)、fT4 (ng/dL) (V0、V1、V2、V3)；天冬氨酸转氨酶（AST，IU/L），丙氨酸转氨酶（ALT，IU/L）； AST 与 ALT 的比率将计算为 AST (IU/L) 和 ALT(IU/L)（V0、V1、V2、V3）的比率；血清肌酐浓度（mg / dL）将用酶法测量；根据儿童和青少年 CKD 的 NKF-K/DOQI 指南，将使用更新的 Schwartz 公式计算 eGFR：eGFR（mL/min/1.73 m2) = [0.413 x 患者身高 (cm)] / 血清肌酐 (mg/dL) (V0, V1, V2, V3);葡萄糖 (mg/dL)、胰岛素 (μUI/mL)；胰岛素抵抗 (IR) 将使用稳态模型评估 (HOMA)-IR 的公式计算：(胰岛素 [mU/L] x 葡萄糖 [mmol/lL) / 22.5) (V0, V1, V2, V3)；脂质谱：总胆固醇 (mg/dL)、高密度脂蛋白 (HDL)-胆固醇 (mg/dL)、甘油三酯 (mg/dL)；低密度脂蛋白（LDL）-胆固醇将通过弗里德瓦尔德公式计算，非高密度脂蛋白（nHDL）-胆固醇也将被计算（V0、V1、V2、V3）；口服葡萄糖耐量试验（OGTT：每公斤1.75克葡萄糖溶液，最大75克），每30分钟采集一次样品测定葡萄糖和胰岛素。 OGTT 后参数的曲线下面积 (AUC) 将根据梯形法则计算。 空腹和 OGTT 期间的胰岛素敏感性将作为定量胰岛素敏感性检查指数 (QUICKI) 和松田指数 (ISI) 的公式进行计算。 作为胰岛素生成指数的血浆葡萄糖增加中胰岛素分泌的刺激将计算为胰岛素和葡萄糖浓度从 0 到 30 分钟的变化比率 (InsI)。 β细胞代偿能力将通过定义为 ISI 和 InsI (DI)（V0、V1、V2、V3）乘积的处置指数进行评估；静息时采集的第一晨尿样本。 理化尿液分析；尿白蛋白 (mg/L) 将通过先进的免疫比浊法测定，尿肌酐 (mg/dL) 将使用酶法测定。 尿白蛋白与肌酐比率 (u-ACR - mg/g) 将使用以下公式计算：[尿白蛋白 (mg/dL) / 尿肌酐 (mg/dL)] x 1000。 对于这些计算，白蛋白和肌酐将使用相同的单位。 尿液呈阳性的受试者将接受另外两个样本的收集，并将被视为这些样本（V0、V1、V2、V3）的 u-ACR 平均值。 将采集粪便样本进行微生物计数（V0、V1、V2、V3）。 脂多糖（V0、V1、V2、V3）。 LPS 将通过标准程序使用商业试剂盒（鲎变形细胞裂解物测定）进行测量。 将评估细胞因子 IL1、IL1β、IL6、IL10、TNFα（V0、V1、V2、V3）（ELISA 试剂盒）。
2. 在治疗的 2 个月期间将记录健康日记：每位患者将完成日记，附带副作用或抗生素治疗等。
3. NGS（下一代测序）将用于粪便分析（V0、V1、V2、V3）
4. 代谢组学分析将通过粪便样本（V0、V1、V2、V3）的质谱法进行
5. 粪便样本（V0、V1、V2、V3）的 SCFA 分析。

结果（见结果测量）。 信息检索：将为研究中包含的每个受试者完成病例报告表 (CRF)。 源文件将是医院或医生的病历。

统计样本量：估计 16 个个体的样本足以证明基础葡萄糖浓度有 10 mg/dl 的差异，功率为 90%，显着性水平为 95%，退出率为 10%在治疗的第 8 周。 据估计，每组 34 人的样本足以证明 HOMA-IR 指数有 1.4 点的差异，功效为 90%，显着性水平为 95%，退出率为 10%治疗第8周。 假设 P<0.05 具有统计学意义。 将使用 SPSS for Windows 版本 17.0（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）进行统计分析。

组织特点：该研究将在儿科儿科内分泌科进行。

如前所述，将在诺瓦拉 Maggiore della Carità 医院的医院化学实验室使用标准化方法对所有血液样本进行测量和评估。 粪便分析将在博洛尼亚博洛尼亚大学科学技术系进行测量。

良好的临床实践：该协议将按照赫尔辛基的声明进行。 在向每位患者仔细解释后，在评估之前将获得所有父母的知情同意。