BIFI-OBESE: Ensaio Clínico em Obesidade Pediátrica (BIFI-OBESE)

Desenho do estudo: Um ensaio clínico randomizado, piloto, aberto, de centro único. População: O estudo será composto por um total de 100 indivíduos de ambos os sexos, entre 6 e 18 anos de idade, obesos, segundo os critérios da IOTF e com adiposidade visceral, como circunferência da cintura ≥ percentil 90, estágio puberal ≥ 2 segundo o Tanner estágio, HOMA-IR > 2,5 ou insulina > 15 µU/ml, sem dieta ou com falha na perda de peso (definido como -1 kg/m2 de IMC em 1 ano).

Critérios de inclusão/exclusão (ver Critérios de Elegibilidade). Intervenção: Na primeira parte do estudo (Estudo 1, V0-V1) os pacientes serão randomizados de forma aberta, em dois grupos homogêneos para número e sexo dos sujeitos. Um grupo receberá uma suplementação de probiótico contendo Bifidobacterium breve B632 e Bifidobacterium breve BR03, 15 gtt/die (3x108 CFU/die) e um grupo receberá um placebo por um total de 2 meses de tratamento. Ambos os grupos recebem uma Dieta Padrão de acordo com os cuidados e práticas de rotina. Para os pacientes que desejam continuar o estudo, haverá um estudo cruzado (estudo 2, V2-V3) após um mês de wash-out.

Restrição alimentar: A dieta padrão será distribuída com 55-60% de carboidratos (45-50% complexos e não mais que 10% de açúcares refinados e processados), 25-30% de lipídios e 15% de proteínas, e será realizada de acordo com as calorias de uma dieta balanceada isocalórica calculada de acordo com as Diretrizes italianas do LARN para idade e sexo.

Atividade física: todos os sujeitos receberão recomendações gerais sobre a realização de atividade física. O exercício será realizado diariamente e consistirá em 30 minutos de atividade física aeróbica.

Randomização: Os participantes serão designados aleatoriamente em um grupo de intervenção probiótica 1:1 ou grupo placebo.

Cronograma: Os pacientes serão avaliados primeiro no momento da inscrição (V0) e, ao final da primeira parte do estudo (Estudo 1, V1), as avaliações bioquímicas serão concluídas. Em seguida, haverá um mês de wash-out quando os pacientes não tomarem nenhum probiótico ou placebo. Na segunda parte do estudo 2, os pacientes serão avaliados em V2 e, após 2 meses de tratamento (Estudo 2, V3). Serão obtidas as seguintes medidas antropométricas, avaliações bioquímicas e ultrassonográficas e questionários:

1. Medidas antropométricas:

   • estatura (V0, V1, V2, V3);
   • peso (V0, V1, V2, V3);
   • índice de massa corporal (IMC; Kg/m2) (V0, V1, V2, V3);
   • circunferências da cintura e do quadril (V0, V1, V2, V3) para o cálculo das seguintes relações: cintura/quadril, cintura/altura;
   • estágio de Tanner (V0, V1, V2, V3);
   • pressão arterial e frequência cardíaca (V0, V1, V2, V3). Avaliações bioquímicas (após jejum noturno de 12 horas): hemograma com fórmula, fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF1, ng/mL) sérico, 25-hidroxi (OH) vitamina D (ng/mL), ácido úrico (mg/ dL), fosfatase alcalina (U/L), ACTH (pg/mL), cortisol (microg/dL), TSH (uuI/mL), fT4 (ng/dL) (V0, V1, V2, V3); aspartato aminotransferase (AST, UI/L), alanina aminotransferase (ALT, UI/L); A razão AST-ALT será calculada como a razão entre AST (IU/L) e ALT(IU/L) (V0, V1, V2, V3); a concentração de creatinina sérica (mg/dL) será medida pelo método enzimático; de acordo com as Diretrizes NKF-K/DOQI para DRC em crianças e adolescentes, a eGFR será calculada usando a fórmula de Schwartz atualizada: eGFR (mL/min/1,73 m2) = [0,413 x altura do paciente (cm)] / creatinina sérica (mg/dL) (V0, V1, V2, V3); glicose (mg/dL), insulina (μUI/mL); a resistência à insulina (IR) será calculada usando a fórmula de Homeostasis Model Assessment (HOMA)-IR: (insulina [mU/L] x glicose [mmol/lL) / 22,5) (V0, V1, V2, V3); perfil lipídico: colesterol total (mg/dL), lipoproteína de alta densidade (HDL)-colesterol (mg/dL), triglicerídeos (mg/dL); O colesterol de lipoproteína de baixa densidade (LDL) será calculado pela fórmula de Friedwald e o colesterol não HDL (nHDL) também será calculado (V0, V1, V2, V3); teste oral de tolerância à glicose (TOTG: 1,75 g de solução de glicose por kg, máximo de 75 g) e amostras serão coletadas para dosagem de glicose e insulina a cada 30 min. A área sob a curva (AUC) para parâmetros após OGTT será calculada de acordo com a regra trapezoidal. A sensibilidade à insulina em jejum e durante o OGTT será calculada como a fórmula do Índice Quantitativo de Verificação de Sensibilidade à Insulina (QUICKI) e índice de Matsuda (ISI). O estímulo para a secreção de insulina no incremento da glicose plasmática como índice insulinogênico será calculado como a razão das mudanças na concentração de insulina e glicose de 0 a 30 min (InsI). A capacidade compensatória das células Βeta será avaliada pelo índice de disposição definido como o produto do ISI e InsI (DI) (V0, V1, V2, V3); uma coleta em repouso da primeira urina da manhã. Exame de urina físico e químico; a albumina urinária (mg/L) será determinada por um ensaio imunoturbidimétrico avançado e a creatinina urinária (mg/dL) será medida pelo método enzimático. A relação entre albumina urinária e creatinina (u-ACR - mg/g) será calculada usando a seguinte fórmula: [albumina urinária (mg/dL) / creatinina urinária (mg/dL)] x 1000. Para esses cálculos, tanto a albumina quanto a creatinina estarão na mesma unidade. Os sujeitos cuja urina for positiva, eles serão submetidos à coleta de mais duas amostras e será considerado o valor médio do u-ACR destas (V0, V1, V2, V3). Uma amostra de fezes será coletada para contagem microbiana (V0, V1, V2, V3). LPS (V0, V1, V2, V3). O LPS será medido com kits comerciais (Limulus amoebocyte lisate assay) com procedimentos padrão. Serão avaliadas as citocinas IL1, IL1β, IL6, IL10, TNFα (V0, V1, V2, V3) (kit ELISA).
2. Um diário de saúde será feito durante os 2 meses de tratamento: cada paciente preencherá o diário com efeitos colaterais ou tratamento com antibióticos etc.
3. NGS (Next Generation Sequencing) será analisado para análise fecal (V0, V1, V2, V3)
4. A análise metabolômica será feita com espectrometria de massa em amostras fecais (V0, V1, V2, V3)
5. Análise de SCFA em amostras fecais (V0, V1, V2, V3).

Resultados (ver Medidas de Resultados). Recuperação de informações: Um formulário de relato de caso (CRF) será preenchido para cada sujeito incluído no estudo. Os documentos de origem serão os prontuários do hospital ou do médico.

Estatística e tamanho da amostra: Uma amostra de 16 indivíduos foi estimada como suficiente para demonstrar uma diferença de 10 mg/dl na concentração basal de glicose com poder de 90% e nível de significância de 95% e taxa de abandono de 10% na 8ª semana de tratamento. Uma amostra de 34 indivíduos em cada grupo foi estimada como suficiente para demonstrar uma diferença de 1,4 ponto no índice HOMA-IR com poder de 90% e nível de significância de 95% e taxa de abandono de 10% em 8 semanas de tratamento. A significância estatística será assumida em P < 0,05. A análise estatística será realizada com SPSS para Windows versão 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).

Características da organização: O estudo será realizado no Serviço de Pediatria Endocrinológica da Divisão de Pediatria.

Todas as amostras de sangue serão medidas e avaliadas por métodos padronizados no Laboratório de Química do Hospital, no hospital Maggiore della Carità, em Novara, descrito anteriormente. A análise fecal será medida no Departamento de Ciências e Tecnologias da Universidade de Bolonha, em Bolonha.

Boas Práticas Clínicas: O protocolo será conduzido de acordo com a declaração de Helsinque. O consentimento informado será obtido de todos os pais antes das avaliações, após explicações cuidadosas para cada paciente.