Edición de bases para la reparación de mutaciones en células madre y progenitoras hematopoyéticas para la enfermedad granulomatosa crónica ligada al cromosoma X

Descripción del estudio:

Ensayo abierto de fase 1/2 para determinar la seguridad y eficacia de una única infusión de células madre y progenitoras hematopoyéticas (HSPC) autólogas editadas con base (BE) para el tratamiento de la enfermedad granulomatosa crónica ligada al cromosoma X (X-CGD) . La edición de bases se realiza para reparar mutaciones del gen sin sentido CYBB (p. ej., CYBB c.676C>T). Las hipótesis del estudio son que 1) la edición de bases puede reparar eficientemente mutaciones genéticas en HSPC; y 2) Las BE HSPC pueden injertarse y diferenciarse en fagocitos funcionales con actividad restaurada de la nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) oxidasa.

Durante la fase de desarrollo inicial, cada participante del estudio se someterá a una aféresis para la recolección de HSPC CD34+ para el desarrollo y validación de un sistema BE específico para mutaciones.

Durante la fase de tratamiento, los participantes recibirán una infusión única del producto medicinal en investigación (IMP) HSPC autólogo BE después del acondicionamiento con busulfán (12 mg/kg en total).

Los participantes tendrán evaluaciones de seguimiento en los meses 3, 6, 12, 18 y 24, y posteriormente anualmente hasta 5 años después del tratamiento. Las evaluaciones clave del estudio incluyen evaluación de eventos adversos (EA), evaluaciones de laboratorio de sangre de la proteína funcional elaborada a partir del gen objetivo (CYBB, codifica gp91^phox) y secuenciación del ácido desoxirribonucleico (ADN) para identificar tasas de reparación genética y mutaciones fuera del objetivo. .

El seguimiento final del estudio según este protocolo será a los 5 años, pero el seguimiento a largo plazo según un protocolo separado de los NIH continuará anualmente hasta 15 años después del tratamiento.

Objetivos:

Objetivos principales:

• Evaluar la seguridad de las células CD34 + autólogas BE.
• Evaluar la eficacia de las células CD34 + autólogas BE.

Objetivos secundarios:

-Para evaluar:

• Eficiencia de la edición de bases (porcentajes de conversión de nucleótidos objetivo).
• Capacidad de injerto de BE HSPC.
• Eficiencia en la restauración de la expresión de gp91^phox
• Eficiencia en la restauración de la función NADPH oxidasa.
• Eficacia clínica.
• Estabilidad de la corrección genética.

Objetivos exploratorios:

-Para evaluar:

• Especificidad de la edición base mediante la evaluación de tasas de ediciones fuera del objetivo en los principales sitios previstos.
• Ediciones aleatorias fuera del objetivo mediante secuenciación del genoma completo (WGS).

Puntos finales:

Criterios de valoración principales:

• Seguridad de la terapia génica utilizando HSPC autólogas de BE medida por los EA relacionados con el agente del estudio y los EA graves (AAG) durante 2 años después del tratamiento.
• La eficacia de la terapia génica se determinó como porcentajes de sujetos que tienen>= 10% de granulocitos oxidasa positivos 12 meses después de la infusión.

Criterios de valoración secundarios:

• Determinar la frecuencia de los alelos de nucleótidos objetivo convertidos.
• Evaluar la frecuencia de alelos modificados genéticamente en comparación con el producto de infusión en sangre periférica a los 12 meses.
• Evaluar la eficacia de restaurar la expresión de gp91^phox.
• Evaluar la eficacia de la restauración funcional de la NADPH oxidasa medida por el ensayo de citometría de flujo oxidasa de dihidrorodamina (DHR) a los 12 meses después del tratamiento (>=10 % de neutrófilos oxidasa positivos), o mediante la medición cuantitativa de especies reactivas de oxígeno (ROS) utilizando el ferricitocromo C. ensayo sobre granulocitos de sangre periférica.
• Evaluar el beneficio clínico mediante la mejora de los problemas clínicos iniciales, como infecciones recurrentes, retraso del crecimiento, desnutrición, enfermedad inflamatoria intestinal o uso de antibióticos.
• Evaluar la estabilidad de la corrección genética mediante mediciones en serie del porcentaje de alelos convertidos en nucleótidos.

Puntos finales exploratorios:

• Evalúe la especificidad mediante la evaluación de ediciones fuera del objetivo en sitios previstos con secuenciación de alto rendimiento de los 5 sitios candidatos fuera del objetivo más comunes identificados mediante una pantalla in vitro integral, Circularización para el análisis de alto rendimiento de los efectos de todo el genoma de la nucleasa mediante secuenciación ( CHANGE-seq), en células de sangre periférica.
• Determine la tasa de ediciones aleatorias fuera del objetivo WGS.