Edição de base para reparo de mutação em células-tronco hematopoiéticas e células progenitoras para doença granulomatosa crônica ligada ao X

Descrição do estudo:

Ensaio aberto de fase 1/2 para determinar a segurança e eficácia de uma única infusão de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras (HSPCs) autólogas editadas em base (BE) para tratamento de doença granulomatosa crônica ligada ao X (X-CGD) . A edição de base é realizada para reparar mutações do gene missense CYBB (por exemplo, CYBB c.676C>T). As hipóteses do estudo são que 1) a edição de base pode reparar com eficiência mutações genéticas em HSPCs; e 2) BE HSPCs podem enxertar e diferenciar-se em fagócitos funcionais com atividade restaurada da nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) oxidase.

Durante a fase inicial de desenvolvimento, cada participante do estudo será submetido a aférese para coleta de CD34+ HSPC para o desenvolvimento e validação de um sistema BE específico para mutação.

Durante a fase de tratamento, os participantes receberão uma infusão única do Produto Medicinal Investigacional (IMP) autólogo de BE HSPC após o condicionamento com bussulfano (total de 12 mg/kg).

Os participantes terão avaliações de acompanhamento nos meses 3, 6, 12, 18 e 24, e anualmente até 5 anos após o tratamento. As principais avaliações do estudo incluem avaliação de eventos adversos (EA), avaliações laboratoriais de sangue da proteína funcional feita a partir do gene alvo (CYBB, codifica para gp91 ^ phox) e sequenciamento de ácido desoxirribonucléico (DNA) para identificar taxas de reparo genético e mutação fora do alvo .

O acompanhamento final do estudo sob este protocolo será de 5 anos, mas o acompanhamento de longo prazo sob um protocolo separado do NIH continuará anualmente até 15 anos após o tratamento.

Objetivos.

Objetivos primários:

• Avaliar a segurança de células CD34+ autólogas BE.
• Avaliar a eficácia de células CD34+ autólogas BE.

Objetivos Secundários:

-Avaliar:

• Eficiência de edição de base (porcentagens de conversão de nucleotídeos alvo).
• Capacidade de enxerto de BE HSPCs.
• Eficiência na restauração da expressão gp91^phox
• Eficiência na restauração da função da NADPH oxidase.
• Eficácia clínica.
• Estabilidade da correção genética.

Objetivos Exploratórios:

-Avaliar:

• Especificidade da edição básica avaliando taxas de edições fora do alvo nos principais sites previstos.
• Edições aleatórias fora do alvo por sequenciamento do genoma completo (WGS).

Pontos finais:

Pontos finais primários:

• Segurança da terapia genética usando HSPCs autólogos BE, conforme medido por EAs relacionados ao agente do estudo e EAs graves (SAEs) até 2 anos após o tratamento.
• Eficácia da terapia genética determinada como porcentagens de indivíduos que apresentam> = 10% de granulócitos positivos para oxidase 12 meses após a infusão.

Pontos finais secundários:

• Determine a frequência dos alelos de nucleotídeos alvo convertidos.
• Avalie a frequência de alelos modificados por genes em comparação com o produto de infusão no sangue periférico aos 12 meses.
• Avalie a eficácia da restauração da expressão gp91^phox.
• Avaliar a eficácia da restauração funcional da NADPH oxidase medida pelo ensaio de citometria de fluxo de diidrorodamina (DHR) oxidase 12 meses após o tratamento (> = 10% de neutrófilos positivos para oxidase) ou por medição quantitativa de espécies reativas de oxigênio (ROS) usando o ferricitocromo C ensaio em granulócitos do sangue periférico.
• Avalie o benefício clínico através da melhoria dos problemas clínicos iniciais, como infecções recorrentes, falha de crescimento, desnutrição, doença inflamatória intestinal ou uso de antibióticos.
• Avalie a estabilidade da correção genética por medição serial da porcentagem de alelos convertidos em nucleotídeos.

Pontos finais exploratórios:

• Avalie a especificidade avaliando edições fora do alvo em locais previstos com sequenciamento de alto rendimento dos 5 locais candidatos mais comuns fora do alvo identificados por uma tela in vitro abrangente, Circularização para análise de alto rendimento de efeitos em todo o genoma da Nuclease por sequenciamento ( CHANGE-seq), em células do sangue periférico.
• Determine a taxa de edições aleatórias fora do alvo WGS.