Édition de base pour la réparation des mutations dans les cellules souches et progénitrices hématopoïétiques pour la maladie granulomateuse chronique liée à l'X

Description de l'étude :

Essai ouvert de phase 1/2 visant à déterminer l'innocuité et l'efficacité d'une perfusion unique de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques (HSPC) autologues éditées par base (BE) pour le traitement de la maladie granulomateuse chronique liée à l'X (X-CGD) . L'édition de base est effectuée pour réparer les mutations du gène faux-sens CYBB (par exemple, CYBB c.676C>T). Les hypothèses de l'étude sont les suivantes : 1) l'édition de bases peut réparer efficacement les mutations génétiques dans les HSPC ; et 2) Les HSPC BE peuvent se greffer et se différencier en phagocytes fonctionnels avec une activité oxydase de nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) restaurée.

Au cours de la phase de développement initiale, chaque participant à l'étude subira une aphérèse pour la collecte CD34+ HSPC pour le développement et la validation d'un système BE spécifique à la mutation.

Pendant la phase de traitement, les participants recevront une perfusion unique du médicament expérimental (IMP) autologue HSPC BE après conditionnement au busulfan (total 12 mg/kg).

Les participants subiront des évaluations de suivi aux mois 3, 6, 12, 18 et 24, et chaque année par la suite jusqu'à 5 ans après le traitement. Les principales évaluations de l'étude comprennent l'évaluation des événements indésirables (EI), les évaluations en laboratoire sanguin de la protéine fonctionnelle fabriquée à partir du gène cible (CYBB, code pour gp91^phox) et le séquençage de l'acide désoxyribonucléique (ADN) pour identifier les taux de réparation génique et de mutation hors cible. .

Le suivi final de l'étude dans le cadre de ce protocole sera de 5 ans, mais le suivi à long terme dans le cadre d'un protocole NIH distinct se poursuivra chaque année jusqu'à 15 ans après le traitement.

Objectifs:

Objectifs principaux:

• Évaluer la sécurité des cellules CD34+ autologues BE.
• Évaluer l'efficacité des cellules CD34+ autologues BE.

Objectifs secondaires :

-Évaluer:

• Efficacité de l'édition de bases (pourcentages de conversion des nucléotides cibles).
• Capacité de greffe des BE HSPC.
• Efficacité dans la restauration de l'expression gp91^phox
• Efficacité dans la restauration de la fonction NADPH oxydase.
• Efficacité clinique.
• Stabilité de la correction génétique.

Objectifs exploratoires :

-Évaluer:

• Spécificité de l'édition de base en évaluant les taux d'éditions hors cible sur les sites les plus prédits.
• Modifications aléatoires hors cible par séquençage du génome entier (WGS).

Points finaux :

Critères d'évaluation principaux :

• Sécurité de la thérapie génique utilisant des HSPC autologues BE, telle que mesurée par les EI liés à l'agent de l'étude et les EI graves (EIG) jusqu'à 2 ans après le traitement.
• Efficacité de la thérapie génique déterminée en pourcentage de sujets ayant >= 10 % de granulocytes oxydase-positifs 12 mois après la perfusion.

Critères secondaires :

• Déterminer la fréquence des allèles nucléotidiques cibles convertis.
• Évaluer la fréquence des allèles génétiquement modifiés par rapport au produit de perfusion dans le sang périphérique à 12 mois.
• Évaluer l'efficacité de la restauration de l'expression de gp91^phox.
• Évaluer l'efficacité de la restauration fonctionnelle de la NADPH oxydase telle que mesurée par le test de cytométrie en flux de la dihydrorhodamine (DHR) oxydase 12 mois après le traitement (> = 10 % de neutrophiles oxydase-positifs), ou par mesure quantitative des espèces réactives de l'oxygène (ROS) à l'aide du ferricytochrome C dosage sur granulocytes du sang périphérique.
• Évaluer le bénéfice clinique en améliorant les problèmes cliniques de base tels que les infections récurrentes, le retard de croissance, la malnutrition, les maladies inflammatoires de l'intestin ou l'utilisation d'antibiotiques.
• Évaluer la stabilité de la correction génique par mesure en série du pourcentage d’allèles convertis en nucléotides.

Paramètres exploratoires :

• Évaluer la spécificité en évaluant les modifications hors cible sur les sites prévus avec un séquençage à haut débit des 5 sites candidats hors cible les plus courants identifiés par un criblage in vitro complet, Circularisation pour l'analyse à haut débit des effets de Nuclease Genome-wide par séquençage ( CHANGE-seq), dans les cellules du sang périphérique.
• Déterminez le taux de modifications aléatoires hors cible WGS.