Редактирование базы для восстановления мутаций в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках при Х-сцепленной хронической гранулематозной болезни

Описание исследования:

Открытое исследование фазы 1/2 для определения безопасности и эффективности однократной инфузии аутологичных гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников с отредактированными основаниями (BE) для лечения Х-сцепленной хронической гранулематозной болезни (X-CGD) . Редактирование оснований выполняется для устранения миссенс-мутаций гена CYBB (например, CYBB c.676C>T). Гипотезы исследования заключаются в том, что 1) редактирование оснований может эффективно восстанавливать генные мутации в HSPC; и 2) BE HSPC могут приживляться и дифференцироваться в функциональные фагоциты с восстановленной активностью никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН)-оксидазы.

На начальном этапе разработки каждый участник исследования пройдет аферез для сбора CD34+ HSPC для разработки и проверки мутационно-специфичной системы BE.

На этапе лечения участники получат однократную инфузию аутологичного исследуемого лекарственного препарата (IMP) BE HSPC после кондиционирования бусульфаном (всего 12 мг/кг).

Участники будут проходить последующие осмотры через 3, 6, 12, 18 и 24 месяца, а затем ежегодно в течение 5 лет после лечения. Ключевые оценки исследования включают оценку нежелательных явлений (AE), лабораторные оценки функционального белка, полученного из целевого гена (CYBB, кодирует gp91^phox), и секвенирование дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) для определения скорости восстановления гена и нецелевых мутаций. .

Окончательное наблюдение в рамках этого протокола продлится 5 лет, но долгосрочное наблюдение в рамках отдельного протокола NIH будет продолжаться ежегодно в течение 15 лет после лечения.

Цели:

Основные цели:

• Оценить безопасность аутологичных CD34+ клеток BE.
• Оценить эффективность аутологичных CD34+ клеток BE.

Второстепенные цели:

-Оценить:

• Эффективность редактирования оснований (процент конверсии целевых нуклеотидов).
• Способность к приживлению BE HSPC.
• Эффективность восстановления экспрессии gp91^phox
• Эффективность восстановления функции НАДФН-оксидазы.
• Клиническая эффективность.
• Стабильность генной коррекции.

Исследовательские цели:

-Оценить:

• Специфика базового редактирования путем оценки количества нецелевых изменений на наиболее прогнозируемых сайтах.
• Случайные нецелевые изменения с помощью полногеномного секвенирования (WGS).

Конечные точки:

Первичные конечные точки:

• Безопасность генной терапии с использованием аутологичных HSPC BE, измеренная по НЯ, связанным с исследуемым агентом, и серьезным НЯ (СНЯ) в течение 2 лет после лечения.
• Эффективность генной терапии определяли как процент субъектов, у которых было >= 10% оксидазо-положительных гранулоцитов через 12 месяцев после инфузии.

Вторичные конечные точки:

• Определите частоту преобразованных аллелей целевых нуклеотидов.
• Оцените частоту генно-модифицированных аллелей по сравнению с инфузионным продуктом в периферической крови через 12 месяцев.
• Оценить эффективность восстановления экспрессии gp91^phox.
• Оценить эффективность восстановления функции НАДФН-оксидазы, измеренную с помощью анализа оксидазы с помощью проточной цитометрии дигидрородамина (DHR) через 12 месяцев после лечения (> = 10% оксидазо-положительных нейтрофилов) или путем количественного измерения активных форм кислорода (АФК) с использованием феррицитохрома C. анализ гранулоцитов периферической крови.
• Оцените клиническую пользу путем улучшения исходных клинических проблем, таких как рецидивирующие инфекции, задержка роста, недостаточность питания, воспалительные заболевания кишечника или использование антибиотиков.
• Оцените стабильность коррекции гена путем серийного измерения процента аллелей, преобразованных в нуклеотиды.

Исследовательские конечные точки:

• Оцените специфичность путем оценки нецелевых изменений в прогнозируемых сайтах с помощью высокопроизводительного секвенирования 5 наиболее распространенных кандидатов нецелевых сайтов, выявленных с помощью комплексного скрининга in vitro, Циркуляризация для высокопроизводительного анализа общегеномных эффектов нуклеазы путем секвенирования ( CHANGE-seq), в клетках периферической крови.
• Определите частоту случайных нецелевых изменений WGS.