Modifica delle basi per la riparazione delle mutazioni nelle cellule staminali emopoietiche e progenitrici per la malattia granulomatosa cronica legata all'X

Descrizione dello studio:

Studio di fase 1/2 in aperto per determinare la sicurezza e l'efficacia di una singola infusione di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche autologhe (BE) base-modificate (BE) per il trattamento della malattia granulomatosa cronica legata all'X (X-CGD). . La modifica della base viene eseguita per riparare le mutazioni del gene missenso CYBB (ad esempio, CYBB c.676C>T). Le ipotesi dello studio sono che 1) l'editing di base può riparare in modo efficiente le mutazioni genetiche negli HSPC; e 2) gli HSPC BE possono attecchire e differenziarsi in fagociti funzionali con attività ossidasi di nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) ripristinata.

Durante la fase di sviluppo iniziale ciascun partecipante allo studio sarà sottoposto ad aferesi per la raccolta di CD34+ HSPC per lo sviluppo e la validazione di un sistema BE specifico per la mutazione.

Durante la fase di trattamento, i partecipanti riceveranno un'infusione una tantum del prodotto medicinale sperimentale (IMP) autologo HSPC dopo il condizionamento con busulfan (totale 12 mg / kg).

I partecipanti avranno valutazioni di follow-up ai mesi 3, 6, 12, 18 e 24 e successivamente ogni anno fino a 5 anni dopo il trattamento. Le valutazioni chiave dello studio includono la valutazione degli eventi avversi (AE), le valutazioni di laboratorio del sangue della proteina funzionale prodotta dal gene bersaglio (CYBB, codifica per gp91^phox) e il sequenziamento dell'acido desossiribonucleico (DNA) per identificare i tassi di riparazione del gene e la mutazione fuori bersaglio .

Il follow-up finale dello studio nell'ambito di questo protocollo sarà di 5 anni, ma il follow-up a lungo termine nell'ambito di un protocollo NIH separato continuerà ogni anno fino a 15 anni dopo il trattamento.

Obiettivi:

Obiettivi primari:

• Valutare la sicurezza delle cellule CD34+ autologhe BE.
• Valutare l'efficacia delle cellule CD34+ autologhe BE.

Obiettivi secondari:

-Valutare:

• Efficienza dell'editing di base (percentuali di conversione del nucleotide target).
• Capacità di attecchimento degli HSPC BE.
• Efficienza nel ripristinare l'espressione gp91^phox
• Efficacia nel ripristinare la funzione della NADPH ossidasi.
• Efficacia clinica.
• Stabilità della correzione genetica.

Obiettivi esplorativi:

-Valutare:

• Specificità della modifica di base valutando i tassi di modifiche fuori target nei principali siti previsti.
• Modifiche casuali fuori bersaglio mediante sequenziamento dell'intero genoma (WGS).

Endpoint:

Endpoint primari:

• Sicurezza della terapia genica utilizzando HSPC autologhi BE misurata dagli eventi avversi correlati all'agente in studio e dagli eventi avversi gravi (SAE) fino a 2 anni dopo il trattamento.
• Efficacia della terapia genica determinata come percentuale di soggetti che hanno >= 10% di granulociti ossidasi-positivi a 12 mesi dopo l'infusione.

Endpoint secondari:

• Determinare la frequenza degli alleli nucleotidici target convertiti.
• Valutare la frequenza degli alleli geneticamente modificati rispetto al prodotto infuso nel sangue periferico a 12 mesi.
• Valutare l'efficacia del ripristino dell'espressione gp91^phox.
• Valutare l'efficacia del ripristino funzionale della NADPH ossidasi misurata mediante il test della citometria a flusso ossidasi con diidrorodamina (DHR) a 12 mesi dopo il trattamento (>= 10% di neutrofili ossidasi-positivi) o mediante misurazione quantitativa delle specie reattive dell'ossigeno (ROS) utilizzando il ferricitocromo C analisi sui granulociti del sangue periferico.
• Valutare il beneficio clinico attraverso il miglioramento dei problemi clinici di base come infezioni ricorrenti, ritardo della crescita, malnutrizione, malattia infiammatoria intestinale o uso di antibiotici.
• Valutare la stabilità della correzione genetica mediante misurazione seriale della percentuale di alleli convertiti in nucleotidi.

Endpoint esplorativi:

• Valutare la specificità valutando le modifiche fuori target nei siti previsti con sequenziamento ad alto rendimento dei 5 siti fuori target candidati più comuni identificati da uno screening completo in vitro, Circolarizzazione per l'analisi ad alto rendimento degli effetti dell'intero genoma della nucleasi mediante sequenziamento ( CHANGE-seq), nelle cellule del sangue periferico.
• Determinare il tasso di modifiche casuali fuori target WGS.