Effet de la rapamycine sur les biomarqueurs liés à la tolérance chez les receveurs de greffe de foie stables

Objectif : Tester chez des greffés hépatiques identifiés comme non tolérants si l'arrêt des inhibiteurs de la calcineurine suivi d'un traitement de 6 mois par sirolimus modifie le schéma d'expression de l'ensemble des gènes associés à la tolérance

Contexte : Le sirolimus est un médicament immunosuppresseur utilisé pour contrer l'auto-immunité et pour prévenir le rejet aigu de greffe chez l'homme et possède des propriétés remarquables de promotion de la tolérance dans les modèles de transplantation animale.

Hypothèse/Objectifs spécifiques : Nous émettons l'hypothèse que le sirolimus favorise les voies tolérogéniques dans la transplantation hépatique humaine.

1. Tester chez les greffés hépatiques identifiés comme non tolérants si l'arrêt des inhibiteurs de la calcineurine suivi d'un traitement de 6 mois par le sirolimus modifie le schéma d'expression de l'ensemble des gènes associés à la tolérance
2. Tester chez les greffés du foie identifiés comme non tolérants si la conversion des inhibiteurs de la calcineurine en sirolimus modifie les réponses immunitaires de type mémoire.
3. Tester chez les receveurs de greffe de foie identifiés comme non tolérants si la conversion de la monothérapie par inhibiteur de la calcineurine au sirolimus affecte la fréquence, le phénotype et la fonction des sous-ensembles de lymphocytes du sang périphérique potentiellement immunorégulateurs
4. Tester chez les receveurs de greffe de foie identifiés comme non tolérants si la conversion des inhibiteurs de la calcineurine en sirolimus favorise les changements épigénétiques liés à l'immunorégulation et au développement/progression du cancer

Méthodes proposées :Expériences d'expression génique : nous quantifierons l'expression dans le sang périphérique d'un ensemble de gènes précédemment identifiés comme prédictifs d'un sevrage réussi de l'immunosuppression chez des receveurs de greffe de foie stables. Des échantillons de sang seront obtenus avant et 6 mois après la conversion au traitement au sirolimus. La mesure des niveaux d'expression génique sera effectuée à l'aide de la PCR TaqMan en temps réel. La classification des patients dans les catégories tolérantes/non tolérantes sera effectuée à l'aide de seuils et d'algorithmes prédictifs développés dans notre laboratoire.

Etudes d'immunophénotypage : nous quantifierons dans le sang périphérique différents sous-ensembles de cellules mononucléaires impliquées dans les voies immunorégulatrices avant et 6 mois après passage au sirolimus. Les mesures seront effectuées par cytométrie en flux.

Tests fonctionnels : nous isolerons les cellules T régulatrices CD4+CD25+ (Treg) du sang périphérique par Sorter avant et 6 mois après la conversion au sirolimus. Des expériences de dilution en série seront menées dans un test non spécifique d'antigène pour évaluer les propriétés suppressives relatives des Tregs. Des tests IFNg ELISpot seront menés en parallèle en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique comme cellules répondeuses pour mesurer les réponses allo-immunes spécifiques au donneur.

Mesure de la méthylation de l'ADN : l'ADN du receveur sera extrait d'échantillons de sang périphérique avant et après un traitement de 6 mois au sirolimus et utilisé pour mener des études de méthylation du génome entier à l'aide de la plateforme de puces ILLUMINA.

Résultats attendus : Nous prévoyons de définir avec précision les effets du sirolimus sur les voies tolérogènes précédemment identifiées chez l'homme et d'évaluer la capacité de ce médicament à augmenter la proportion de receveurs hépatiques subissant un sevrage immunosuppresseur réussi.