Wirkung von Rapamycin auf toleranzbezogene Biomarker bei stabilen Lebertransplantationsempfängern

Ziel: Test bei Empfängern von Lebertransplantaten, die als nicht tolerant identifiziert wurden, ob das Absetzen von Calcineurin-Inhibitoren, gefolgt von einer 6-monatigen Behandlung mit Sirolimus, das Expressionsmuster des Satzes von Genen verändert, die mit Toleranz assoziiert sind

Hintergrund: Sirolimus ist ein immunsuppressives Medikament, das verwendet wird, um Autoimmunität entgegenzuwirken und eine akute Transplantatabstoßung beim Menschen zu verhindern, und hat bemerkenswerte toleranzfördernde Eigenschaften in Tiertransplantationsmodellen.

Hypothese/Spezifische Ziele: Wir gehen davon aus, dass Sirolimus tolerogene Signalwege bei Lebertransplantationen beim Menschen fördert.

1. Um bei Empfängern von Lebertransplantaten, die als nicht tolerant identifiziert wurden, zu testen, ob das Absetzen von Calcineurin-Inhibitoren, gefolgt von einer 6-monatigen Behandlung mit Sirolimus, das Expressionsmuster des Satzes von Genen verändert, der mit Toleranz assoziiert ist
2. Um bei Empfängern von Lebertransplantaten, die als nicht tolerant identifiziert wurden, zu testen, ob die Umstellung von Calcineurin-Inhibitoren auf Sirolimus die gedächtnisartigen Immunantworten modifiziert.
3. Um bei Empfängern von Lebertransplantaten, die als nicht tolerant identifiziert wurden, zu testen, ob die Umstellung von einer Calcineurin-Inhibitor-Monotherapie auf Sirolimus die Häufigkeit, den Phänotyp und die Funktion potenziell immunregulatorischer Untergruppen von Lymphozyten im peripheren Blut beeinflusst
4. Um bei Empfängern von Lebertransplantaten, die als nicht tolerant identifiziert wurden, zu testen, ob die Umstellung von Calcineurin-Inhibitoren auf Sirolimus epigenetische Veränderungen im Zusammenhang mit der Immunregulation und der Krebsentwicklung/-progression fördert

Vorgeschlagene Methoden: Genexpressionsexperimente: Wir werden die Expression einer Reihe von Genen, die zuvor als prädiktiv für einen erfolgreichen Entzug der Immunsuppression bei stabilen Lebertransplantatempfängern identifiziert wurden, im peripheren Blut quantifizieren. Blutproben werden vor und 6 Monate nach der Umstellung auf die Sirolimus-Behandlung entnommen. Die Messung der Genexpressionsniveaus wird unter Verwendung von Echtzeit-TaqMan-PCR durchgeführt. Die Einstufung der Patienten in die toleranten/nicht toleranten Kategorien wird unter Verwendung von Schwellenwerten und prädiktiven Algorithmen durchgeführt, die in unserem Labor entwickelt wurden.

Immunphänotypisierungsstudien: Wir werden im peripheren Blut verschiedene Untergruppen mononukleärer Zellen quantifizieren, die an immunregulatorischen Signalwegen beteiligt sind, vor und 6 Monate nach der Umstellung auf die Behandlung mit Sirolimus. Die Messungen werden mittels Durchflusszytometrie durchgeführt.

Funktionelle Assays: Wir isolieren CD4+CD25+ regulatorische T-Zellen (Treg) aus peripherem Blut durch Sorter vor und 6 Monate nach der Umstellung auf die Sirolimus-Behandlung. Reihenverdünnungsexperimente werden in einem Antigen-unspezifischen Assay durchgeführt, um die relativen unterdrückenden Eigenschaften von Tregs zu bewerten. IFNg-ELISpot-Assays werden parallel durchgeführt, wobei periphere mononukleäre Blutzellen als Responderzellen verwendet werden, um spenderspezifische Alloimmunantworten zu messen.

Messung der DNA-Methylierung: Die Empfänger-DNA wird vor und nach einer 6-monatigen Sirolimus-Behandlung aus peripheren Blutproben extrahiert und zur Durchführung von Methylierungsstudien des gesamten Genoms unter Verwendung der ILLUMINA-Array-Plattform verwendet.

Erwartete Ergebnisse: Wir erwarten, die Wirkungen von Sirolimus auf zuvor identifizierte tolerogene Signalwege beim Menschen genau zu definieren und die Fähigkeit dieses Medikaments zu bewerten, den Anteil der Leberempfänger zu erhöhen, die sich einer erfolgreichen Immunsuppressionsentwöhnung unterziehen.