Keringő daganatsejtek a műtéti vérben

Kutatási terv:

A hasnyálmirigy-ductalis adenokarcinómában (PDAC) szenvedő intraoperatív alanyokat, akiket beleegyeztek és bevontak a vizsgálatba, a műtőbe (OR) viszik a korábban tervezett hasnyálmirigy-eltávolítási eljáráshoz. Az általános érzéstelenítés előidézése után univerzális óvintézkedések alkalmazásával vérmintát (10 ml) gyűjtenek egy heparin csőbe a keringő tumorsejtek (CTC) azonosítása céljából, és ez a két kontroll egyikeként szolgál a háttér CTC-számának értékelésére. Miután a résztvevő a terveknek megfelelően átesett a sebészeti feltáráson, és reszekcióra jelöltnek ítélték, normál sóoldatot használnak a hasüreg mosására, és a kezelő sebész szívótartályba gyűjti. A hasi mosás a műtéti eljárás szokásos része, jellemzően a műtét végén hajtják végre, hogy kimossák a vért a hasüregből, és a sebész belátásától függően változó mennyiségben hajtják végre. A vizsgálat ellenőrzése céljából ez a mosási lépés átkerül a művelet elejére. Az eset végén további mosásra/öntözésre lehet szükség a sebész belátása szerint. Az ebben a folyadékban összegyűjtött sejteket centrifugálják, és a laboratóriumban összegyűjtik a rosszindulatú sejtek jelenlétének meghatározására. Ez a két vezérlő közül a második lesz. A hasnyálmirigy-eltávolítási eljárás előrehaladtával az eljárás normális következményeként a vizsgált vér elveszik, és a műtéti területről egy új, jégre hűtött heparint tartalmazó tartályba szívják a sejtek életképességének megőrzése érdekében. Ezt a vért általában eldobják az eset végén, de a vér egy részét összegyűjtik és felhasználják a CTC-k kimutatására szolgáló, későbbi laboratóriumi kísérletekhez.

Laboratóriumi/utófeldolgozás A műtőben a fent leírtak szerint gyűjtött vért azonnal bevisszük a laboratóriumba, és centrifugáljuk a plazma, a buffy coat és az eritrociták elkülönítésére. A CTC-ket, fehérvérsejteket és vérlemezkéket tartalmazó buffy coat-ot eltávolítják, és a készlet protokollja szerint hozzáadják a kereskedelemben kapható koktélhoz. Ezután a CTC-k Ficoll-dúsítását és szétválasztását hajtják végre. Az izolált CTC-ket ezután további downstream jellemzéshez és kísérletezéshez használják fel, amely magában foglalja, de nem kizárólagosan: a CTC-szám azonosítását, a CTC-k növekedését in vitro és in vivo, valamint a CTC-adhéziós molekulák azonosítását/jellemzését, amelyek lehetővé teszik a humán hashártyához való kötődést. . Minden fel nem használt vérhez vagy vérkomponenshez, amelyet a kísérletben nem használtak fel, egyedi azonosítót rendelnek, és a jövőbeni kereszthivatkozás céljából eltávolítják a páciens azonosítását, és -80 Fahrenheit-fokon tárolják a Floridai Egyetemen esetleges jövőbeni kísérletek vagy ismételt CTC-izolálás céljából.

Résztvevői adatok gyűjtése Minden beiratkozott alanyról a következő, azonosítatlan információkat gyűjtik: a résztvevők demográfiai adatai, klinikai és patológiai adatok, valamint a rák kiújulására és az általános túlélésre vonatkozó adatok.