Az immunrendszer longitudinális együttműködési tanulmánya (FIBER-IMPACT)

A résztvevőket vagy a korábban átvizsgált és azonosított jelöltek csoportjából választják ki, vagy akik jelezték érdeklődésüket az Aimmune által működtetett GoodNature Programon keresztül a kutatásban való részvétel iránt. Azon résztvevők nem vehetnek részt, akik sok készterméket készítettek, vagy képesek arra, hogy készítsenek. Azok, akik hozzájárulnak a részvételhez, elektronikus formában vagy telefonon kitöltenek egy egészségügyi előszűrési felmérést, és kitöltik a tájékozott beleegyező nyilatkozatot (ICF). Az ICF befejezése után a résztvevők egyedi, névtelen résztvevői azonosítót kapnak. A Tanulmányi Szponzornak csak néhány kiválasztott tagja férhet hozzá az azonosító kódokhoz; az azonosító kódokat nem osztjuk meg az együttműködőkkel. Ezt követően a résztvevők általános információkat kapnak az étrendről, a rostok előnyeiről és a vizsgálat részleteiről, ideértve a mintavételt és a minták címkézését, az étrend követését felméréseken keresztül, az étkezésről készült fényképeket stb.

A résztvevők egy vizsgálati helyszínen találkoznak, és megkapják a chia magot, a kézi székletmintavevő eszközt és az előre felcímkézett mintatartókat, ha otthon gyűjtik a mintát. Ekkor a résztvevők vérmintákat is adhatnak.

Amint a beavatkozás előtti anyagok elkészültek, a résztvevők (60) megkezdik a 16 hetes beavatkozási időszakot; a résztvevők fele napi 2,5 evőkanál chia magot ad a vizsgálat első 8 hetében, és a második 8 hétben visszatér a normál étrendhez, a résztvevők fele az első 8 hétben fenntartja a szokásos étrendjét, és a második 8 hétben napi 2,5 evőkanál chia magot ad hozzá keresztezésként. A háztartásban többen is részt vehetnek, de azért, mert szeretnénk megérteni az SCFU és/vagy az IgA szintek átvitelét.

A résztvevőket véletlenszerűen két csoportba osztják, de az azonos háztartás tagjait ellentétes csoportokba sorolják.

Minden résztvevőnek egy rövid, elektronikus napi stressz-felmérést kell kitöltenie, beleértve az étkezésekről készült napi fényképeket. A napi felmérés tartalmazni fogja a Patient Health Questionnaire-t (PHQ-4), egy rövid validált szűrőkérdőívet, amely egy 2-tételes depressziós skálából (PHQ-2) és egy 2-tételes szorongásos skálából (GAD-2)2 áll. A PHQ-4 adatokat a stressz nyomon követésére fogják használni. Az étkezések napi fényképeit felhasználják az étrendi adatok nyomon követésére a vizsgálat során.

A PHQ-4 összpontszáma 0 és 12 között van, a pszichológiai szorongás kategóriái pedig 2:

• Nincs 0-2
• Enyhe 3-5
• Mérsékelt 6-8
• Súlyos 9-12

Szorongás alskála = a 2. és 3. item összege a napi felmérési űrlapon (pontszám 0 és 6 között) Depresszió alskála = a napi felmérési űrlap 4. és 5. pontjának összege (pontszám 0 és 6 között) Mindegyik alskálán a 3-as vagy annál nagyobb pontszám pozitívnak számít a szűrés szempontjából.

A résztvevőket arra is felkérjük, hogy a vizsgálat során hetente legalább 3 székletmintát vegyenek. Azok a résztvevők, akik otthon székletmintákat gyűjtenek, a mintákat a fagyasztószekrényükben tárolják a biológiailag veszélyes tárolóedényben, és a mintákat hetente a vizsgálati személyzet vagy egy futár veszi át. Minden résztvevő beszkenneli a tartályon található QR-kódot, hogy rögzítse a mintavétel dátumát és időpontját, és ráírja a gyűjtés dátumát a tartályra.

Az 1., 8. és 16. héten a résztvevőket arra kérik, hogy gyűjtsenek részletes étrend-adatokat elektronikus kérdőív segítségével, az NIH automatizált önadministrált 24 órás étrend-értékelő eszközével. A székletmintákat a vizsgálat szponzora készíti elő és osztja ki, majd elküldi az UCI-nek és a Cleveland Clinic-nek bakteriális PCR, metabolikus elemzés, Shotgun metagenomikus szekvenálás, bakteriális spóratiter értékelés és IgA tesztelés céljából. Az összes mintát, beleértve a vérmintákat is, határozatlan ideig az Aimmune Therapeutics -80 C-os fagyasztószekrényében tárolják kutatás céljából a meglévő Biobank #20234092 protokoll szerint. A beavatkozás közbeni és utáni felméréseket küldjük a résztvevőknek, hogy értékeljék a vizsgálattal és a chia magokkal kapcsolatos tapasztalatokat, valamint azonosítsák az esetleges mellékhatásokat vagy panaszokat.

Az azonosítatlan felméréseket a vizsgálat szponzora bocsátja rendelkezésre és elemzi.

alacsony IgA alanyok a vizsgálat során. Az ismeretlen IgA-bontó baktériumok felfedezése érdekében a kutatók az IgA-alacsony értékű alanyok székletmintáit CDC anaerob véragar lemezekre terjesztik, hogy egyedi kolóniákat hozzanak létre. Ezután a kutatók az összes telepet az új CDC véragaron csíkozással szubkultúrázzák. A kutatók minden szubkultúra telepet steril PBS-pufferbe kaparnak, és körülbelül 15 egyedi telepet egyesítenek az IgA-val és Pigr-rel végzett in vitro inkubációhoz. Egy éjszakán át 37 °C-on végzett inkubálás után WB-analízist használunk az IgA és a Pigr lebomlásának értékelésére. Az IgA/Pigr-hasító aktivitással rendelkező baktériumkészletből származó telepeket egyenként újra inkubáljuk a szubsztrátokkal, és immunblottal elemzik.

Értékelje az IgA-bontó baktériumok összetettségét. A kutatók in vitro meghatározzák a jelölt baktériumok antibiotikum érzékenységét. A T. immunophilia (egerekben IgA lebontó) okozta kihívások miatt a kutatók értékelni fogják a telepek összetettségét (könnyen szaporodnak-e tiszta tenyészetben, szemben a kísérő baktériumok jelenlétével az izolált telepen belül). Ha az IgA-lebontó-jelölt lassan növekszik a tenyészetben, a kutatók a T. immunophila-hoz hasonlóan értékelik a baktériumok auxotrófiáját. A kutatók genomikai és metabolikus eszközöket fognak használni az auxotrófia tesztelésére.

magas IgA alanyok a vizsgálat végén. A kutatók csíramentes egereket oltanak be ezektől a donoroktól származó székletmintákkal, és két hét elteltével értékelik az IgA-szintet ezekben az egerekben (kontrollként az alacsony IgA-mintákat vizsgáljuk). A magas IgA-szinttel rendelkező egerek esetében a kutatók különféle módszerekkel izolálják a spórákat, és csíramentes egereken tesztelik. A kutatók a lehető legjobban finomítják az IgA-stimuláló közösséget, és tesztelik, hogy kulturálható-e. A cél az emberi bélmikrobák azonosítása, amelyek reagálnak az étrendben lévő rostokra, és megváltoztatják az összes bélmikroba IgA szintjét.