Aimmune Längsschnitt-Kooperationsstudie (FIBER-IMPACT)

Die Teilnehmer werden entweder aus einem Pool zuvor überprüfter und identifizierter Kandidaten ausgewählt oder haben Interesse an einer Teilnahme an der Forschung über das von Aimmune durchgeführte GoodNature-Programm bekundet. Es dürfen keine Teilnehmer teilnehmen, die bereits große Mengen eines fertigen Produkts hergestellt haben oder das Potenzial dazu haben. Diejenigen, die der Teilnahme zustimmen, werden über ein elektronisches Formular oder einen Telefonanruf eine Umfrage zur Gesundheitsvoruntersuchung durchführen und das Formular zur Einwilligung nach Aufklärung (ICF) ausfüllen. Nach Abschluss des ICF wird den Teilnehmern eine eindeutige, anonyme Teilnehmer-ID zugewiesen. Nur wenige ausgewählte Mitglieder des Studiensponsors haben Zugriff auf die Identifikationscodes. Anonymisierungscodes werden nicht an Mitarbeiter weitergegeben. Anschließend erhalten die Teilnehmer allgemeine Informationen zu Ernährungspraktiken, Ballaststoffvorteilen und Details zur Studie, einschließlich Probenentnahme und -kennzeichnung, Ernährungsverfolgung mittels Umfragen, Fotos von eingereichten Mahlzeiten usw.

Die Teilnehmer treffen sich an einem Studienort und erhalten Chiasamen, das manuelle Stuhlprobenentnahmegerät und vorbeschriftete Probenbehälter, wenn sie ihre Proben zu Hause sammeln. Zu diesem Zeitpunkt können die Teilnehmer auch Blutproben abgeben.

Sobald die Materialien vor der Intervention fertiggestellt sind, beginnt für die Teilnehmer (60) eine 16-wöchige Interventionsphase; Die Hälfte der Teilnehmer wird in den ersten 8 Wochen der Studie täglich 2,5 EL Chiasamen hinzufügen und in den zweiten 8 Wochen zu ihrer normalen Ernährung zurückkehren. Die andere Hälfte der Teilnehmer wird in den ersten 8 Wochen ihre normale Ernährung beibehalten und in den zweiten 8 Wochen täglich 2,5 EL Chiasamen als Crossover-Design hinzufügen. Es können mehrere Personen im Haushalt teilnehmen, aber weil wir die Übertragbarkeit von SCFU- und/oder IgA-Werten verstehen wollen.

Die Teilnehmer werden nach dem Zufallsprinzip in zwei Gruppen eingeteilt, Mitglieder desselben Haushalts werden jedoch in entgegengesetzte Gruppen eingeteilt.

Alle Teilnehmer werden gebeten, eine kurze elektronische Umfrage zum täglichen Stress auszufüllen und täglich Fotos von den Mahlzeiten bereitzustellen. Die tägliche Umfrage umfasst den Patientengesundheitsfragebogen (PHQ-4), einen kurzen validierten Screening-Fragebogen, der aus einer 2-Punkte-Depressionsskala (PHQ-2) und einer 2-Punkte-Angstskala (GAD-2)2 besteht. Die PHQ-4-Daten werden zur Stressverfolgung verwendet. Tägliche Fotos von Mahlzeiten werden verwendet, um die Ernährungsdaten während der gesamten Studie zu verfolgen.

Die PHQ-4-Gesamtpunktzahl reicht von 0 bis 12, wobei die Kategorien psychischer Belastungen2 sind:

• Keine 0-2
• Mild 3-5
• Mäßig 6-8
• Schwer 9-12

Unterskala „Angst“ = Summe der Punkte 2 und 3 im täglichen Umfrageformular (Bewertungsbereich 0 bis 6) Unterskala „Depression“ = Summe der Punkte 4 und 5 im täglichen Umfrageformular (Bewertungsbereich 0 bis 6) Auf jeder Unterskala gilt ein Wert von 3 oder höher für Screeningzwecke als positiv.

Die Teilnehmer werden außerdem gebeten, während der Studie mindestens 3 Stuhlproben pro Woche zu entnehmen. Teilnehmer, die zu Hause Stuhlproben sammeln, lagern die Proben in ihren Gefrierschränken in einem bereitgestellten Aufbewahrungsbehälter für biologische Gefahrenstoffe und die Proben werden wöchentlich vom Studienpersonal oder einem Kurier abgeholt. Alle Teilnehmer scannen den QR-Code auf dem Behälter, um Datum und Uhrzeit der Probenentnahme zu erfassen, und schreiben das Entnahmedatum auf den Behälter.

In den Wochen 1, 8 und 16 werden die Teilnehmer gebeten, detaillierte Ernährungsdaten per elektronischer Umfrage unter Verwendung des NIH Automated Self-Administered 24-Hour Dietary Assessment Tool zu sammeln. Stuhlproben werden vom Studiensponsor vorbereitet und aliquotiert und zur bakteriellen PCR, metabolomischen Analyse, Shotgun-Metagenomsequenzierung, Bewertung des Bakteriensporentiters und IgA-Tests an die UCI und die Cleveland Clinic geschickt. Alle Proben, einschließlich Blutproben, werden auf unbestimmte Zeit in einem Gefrierschrank bei -80 °C bei Aimmune Therapeutics für Forschungszwecke gemäß dem bestehenden Biobank-Protokoll Nr. 20234092 aufbewahrt. Während und nach der Intervention werden Umfragen an die Teilnehmer verschickt, um Erfahrungen mit der Studie und Chiasamen auszuwerten und etwaige Nebenwirkungen oder Beschwerden zu identifizieren.

Anonymisierte Umfragen werden dem Studiensponsor zur Verfügung gestellt und von diesem analysiert.

Probanden mit niedrigem IgA-Wert während der gesamten Studie. Um die unbekannten IgA-abbauenden Bakterien zu entdecken, werden Forscher Stuhlproben von Probanden mit niedrigem IgA-Gehalt auf anaeroben CDC-Blutagarplatten verteilen, um einzelne Kolonien zu bilden. Als nächstes werden die Forscher alle Kolonien durch Ausstreichen auf neuem CDC-Blutagar subkultivieren. Die Forscher werden jede Subkulturkolonie in sterilen PBS-Puffer abkratzen und etwa 15 einzelne Kolonien für die In-vitro-Inkubation mit IgA und Pigr bündeln. Nach einer Inkubation über Nacht bei 37 °C wird die WB-Analyse zur Bewertung des Abbaus von IgA und Pigr verwendet. Kolonien aus dem Bakterienpool mit IgA/Pigr-spaltender Aktivität werden einzeln erneut mit den Substraten inkubiert und per Immunoblot analysiert.

Bewerten Sie die Komplexität IgA-abbauender Bakterien. Forscher werden die Antibiotikaempfindlichkeit der Kandidatenbakterien in vitro bestimmen. Aufgrund der Herausforderungen mit T. immunophilia (IgA-Degrader bei Mäusen) werden Forscher die Komplexität von Kolonien bewerten (ob sie leicht in Reinkultur gezüchtet werden können im Vergleich zum Vorhandensein von Begleitbakterien in der isolierten Kolonie). Wenn der IgA-Degrader-Kandidat in der Kultur langsam wächst, werden die Forscher die Bakterien auf Auxotrophie wie bei T. immunophila untersuchen. Forscher werden genomische und metabolische Instrumente in Kombination verwenden, um Auxotrophie zu testen.

Probanden mit hohem IgA-Wert am Ende der Studie. Die Forscher werden keimfreie Mäuse mit Stuhlproben dieser Spender impfen und die IgA-Werte nach zwei Wochen bei diesen Mäusen bewerten (wir werden Proben mit niedrigem IgA-Gehalt als Kontrolle verwenden). Bei Mäusen mit hohen IgA-Werten werden die Forscher die Sporen mithilfe verschiedener Methoden isolieren und an keimfreien Mäusen testen. Forscher werden die IgA-stimulierende Gemeinschaft so weit wie möglich verfeinern und testen, ob sie kultivierbar ist. Ziel ist es, menschliche Darmmikroben zu identifizieren, die auf Ballaststoffe in der Nahrung reagieren und den IgA-Spiegel aller Darmmikroben verändern.