Estudio de colaboración longitudinal Aimmune (FIBER-IMPACT)

Los participantes serán seleccionados de un grupo de candidatos previamente seleccionados e identificados o que hayan comunicado interés en participar en la investigación a través del Programa GoodNature, dirigido por Aimmune. No se permitirá participar a ningún participante que haya fabricado o tenga potencial para fabricar una gran cantidad de un producto terminado. Aquellos que acepten participar completarán una encuesta de preselección de salud mediante un formulario electrónico o una llamada telefónica y completarán el formulario de consentimiento informado (ICF). Una vez completado el ICF, a los participantes se les asignará una identificación de participante única y anónima. Sólo unos pocos miembros selectos del Patrocinador del Estudio tendrán acceso a los códigos de identificación; Los códigos de deidentificación no se compartirán con los colaboradores. Después de esto, los participantes recibirán información general sobre las prácticas dietéticas, los beneficios de la fibra y detalles sobre el estudio, incluida la recolección y etiquetado de muestras, el seguimiento de la dieta mediante encuestas, fotografías de las comidas enviadas, etc.

Los participantes se reunirán en un sitio de estudio y se les proporcionarán semillas de chía, la herramienta manual para tomar muestras de heces y recipientes para muestras preetiquetados si recolectan sus muestras en casa. En este momento, los participantes también pueden proporcionar muestras de sangre.

Una vez que se completen los materiales previos a la intervención, los participantes (60) comenzarán un período de intervención de 16 semanas; la mitad de los participantes agregarán 2,5 cucharadas diarias de semillas de chía durante las primeras 8 semanas del estudio y volverán a su dieta normal durante las segundas 8 semanas, la mitad de los participantes mantendrán su dieta normal durante las primeras 8 semanas y agregarán 2,5 cucharadas diarias de semillas de chía durante las segundas 8 semanas como un diseño cruzado. Pueden participar varias personas del hogar, pero porque queremos comprender la transmisibilidad de SCFU y/o niveles de IgA.

Los participantes serán distribuidos aleatoriamente en dos grupos, pero los miembros del mismo hogar serán asignados a grupos opuestos.

A todos los participantes se les pedirá que completen una breve encuesta electrónica sobre estrés diario, que incluye fotografías diarias de las comidas. La encuesta diaria incluirá el Cuestionario de salud del paciente (PHQ-4), un breve cuestionario de detección validado que consta de una escala de depresión de 2 ítems (PHQ-2) y una escala de ansiedad de 2 ítems (GAD-2)2. Los datos del PHQ-4 se utilizarán para realizar un seguimiento del estrés. Se utilizarán fotografías diarias de las comidas para realizar un seguimiento de los datos de la dieta durante todo el estudio.

La puntuación total del PHQ-4 varía de 0 a 12, siendo las categorías de malestar psicológico 2:

• Ninguno 0-2
• Leve 3-5
• Moderado 6-8
• Severo 9-12

Subescala de ansiedad = suma de los elementos 2 y 3 del formulario de encuesta diaria (rango de puntuación de 0 a 6) Subescala de depresión = suma de los elementos 4 y 5 del formulario de encuesta diaria (rango de puntuación de 0 a 6) En cada subescala, una puntuación de 3 o más se considera positiva para fines de detección.

También se pedirá a los participantes que recolecten un mínimo de 3 muestras de heces por semana durante el estudio. Los participantes que recolecten muestras de heces en casa almacenarán muestras en sus congeladores en un contenedor de almacenamiento de riesgo biológico provisto y el personal del estudio o un mensajero recogerán las muestras semanalmente. Todos los participantes escanearán el código QR en el contenedor para registrar la fecha y hora de recolección de la muestra y escribirán la fecha de recolección en el contenedor.

En las semanas 1, 8 y 16, se pedirá a los participantes que recopilen datos dietéticos detallados mediante una encuesta electrónica, utilizando la herramienta de evaluación dietética autoadministrada de 24 horas automatizada de los NIH. El patrocinador del estudio preparará y dividirá en alícuotas muestras de heces y las enviará a la UCI y a la Clínica Cleveland para PCR bacteriana, análisis metabolómico, secuenciación metagenómica de escopeta, evaluación de títulos de esporas bacterianas y pruebas de IgA. Todas las muestras, incluidas las muestras de sangre, se conservarán indefinidamente en un congelador de -80 °C en Aimmune Therapeutics para su investigación según el Protocolo de Biobanco n.º 20234092 existente. Se enviarán encuestas a mitad y después de la intervención a los participantes para evaluar las experiencias con el estudio y las semillas de chía, así como para identificar cualquier efecto secundario o queja.

El Patrocinador del estudio proporcionará y analizará encuestas no identificadas.

Sujetos con niveles bajos de IgA durante todo el estudio. Para descubrir las bacterias desconocidas que degradan la IgA, los investigadores esparcirán muestras fecales de sujetos con niveles bajos de IgA en placas de agar sangre anaeróbica de los CDC para formar colonias individuales. A continuación, los investigadores subcultivarán todas las colonias en agar sangre CDC nuevo mediante estrías. Los investigadores rasparán cada colonia de subcultivo en un tampón PBS estéril y agruparán aproximadamente 15 colonias individuales para la incubación in vitro con IgA y Pigr. Después de una incubación durante la noche a 37 °C, se utilizará el análisis WB para evaluar la degradación de IgA y Pigr. Las colonias del conjunto bacteriano con actividad de escisión de IgA/Pigr se incubarán individualmente con los sustratos nuevamente y se analizarán mediante inmunotransferencia.

Evaluar la complejidad de las bacterias degradantes de IgA. Los investigadores determinarán la sensibilidad a los antibióticos de las bacterias candidatas in vitro. Debido a los desafíos con T. inmunophilia (degradador de IgA en ratones), los investigadores evaluarán la complejidad de las colonias (si crecen fácilmente en cultivo puro versus la presencia de bacterias compañeras dentro de la colonia aislada). Si el degradador de IgA candidato crece lentamente en cultivo, los investigadores evaluarán la auxotrofia de la bacteria como la de T. inmunophila. Los investigadores utilizarán herramientas genómicas y metabólicas en combinación para evaluar la auxotrofia.

Sujetos con IgA alta al final del estudio. Los investigadores inocularán ratones libres de gérmenes con muestras de heces de estos donantes y evaluarán los niveles de IgA después de dos semanas en estos ratones (tomaremos muestras bajas de IgA como control). Para los ratones que tienen niveles altos de IgA, los investigadores aislarán las esporas mediante varios métodos y las probarán en ratones libres de gérmenes. Los investigadores refinarán la comunidad estimulante de IgA tanto como sea posible y probarán si es cultivable. El objetivo es identificar los microbios intestinales humanos que responden a la fibra en la dieta y alteran los niveles de IgA para todos los microbios intestinales.