Estudo de colaboração longitudinal Aimmune (FIBER-IMPACT)

Os participantes serão selecionados a partir de um grupo de candidatos previamente selecionados e identificados ou que tenham comunicado interesse em participar de pesquisas por meio do Programa GoodNature, administrado pela Aimmune. Nenhum participante que tenha feito ou tenha potencial para fazer muito produto acabado poderá participar. Aqueles que concordarem em participar preencherão uma pesquisa de pré-triagem de saúde por meio de formulário eletrônico ou telefone e preencherão o formulário de consentimento informado (CIF). Após a conclusão do TCLE, os participantes receberão um ID de participante exclusivo e anônimo. Apenas alguns membros selecionados do Patrocinador do Estudo terão acesso aos códigos de identificação; códigos de desidentificação não serão compartilhados com colaboradores. Em seguida, os participantes receberão informações gerais sobre práticas alimentares, benefícios das fibras e detalhes sobre o estudo, incluindo coleta e rotulagem de amostras, rastreamento da dieta por meio de pesquisas, fotos de envios de refeições, etc.

Os participantes se reunirão em um local de estudo e receberão sementes de chia, a ferramenta manual de amostragem de fezes e recipientes de amostras pré-rotulados, se estiverem coletando suas amostras em casa. Neste momento, os participantes também podem fornecer amostras de sangue.

Assim que os materiais de pré-intervenção forem concluídos, os participantes (60) iniciarão um período de intervenção de 16 semanas; metade dos participantes adicionará diariamente 2,5 colheres de sopa de sementes de chia durante as primeiras 8 semanas do estudo e retornará à sua dieta normal nas segundas 8 semanas, metade dos participantes manterá sua dieta normal durante as primeiras 8 semanas e adicionará diariamente 2,5 colheres de sopa de sementes de chia durante as segundas 8 semanas como um design cruzado. Várias pessoas no agregado familiar podem participar, mas porque queremos compreender a transmissibilidade dos níveis de SCFU e/ou IgA.

Os participantes serão randomizados em dois grupos, mas os membros da mesma família serão distribuídos em grupos opostos.

Todos os participantes serão solicitados a preencher uma breve pesquisa eletrônica de estresse diário, incluindo o fornecimento de fotos diárias das refeições. A pesquisa diária incluirá o Questionário de Saúde do Paciente (PHQ-4), um breve questionário de triagem validado que consiste em uma escala de depressão de 2 itens (PHQ-2) e uma escala de ansiedade de 2 itens (GAD-2)2. Os dados do PHQ-4 serão usados ​​para rastrear o estresse. Fotos diárias das refeições serão usadas para rastrear os dados da dieta ao longo do estudo.

A pontuação total do PHQ-4 varia de 0 a 12, sendo as categorias de sofrimento psíquico2:

• Nenhum 0-2
• Leve 3-5
• Moderado 6-8
• Grave 9-12

Subescala de ansiedade = soma dos itens 2 e 3 do Formulário de Pesquisa Diária (faixa de pontuação de 0 a 6) Subescala de depressão = soma dos itens 4 e 5 do Formulário de Pesquisa Diária (faixa de pontuação de 0 a 6) Em cada subescala, uma pontuação de 3 ou mais é considerada positiva para fins de triagem.

Os participantes também deverão coletar um mínimo de 3 amostras de fezes por semana durante o estudo. Os participantes que coletam amostras de fezes em casa armazenarão as amostras em seus freezers em um recipiente de armazenamento de risco biológico fornecido e as amostras serão recolhidas semanalmente pela equipe do estudo ou por um mensageiro. Todos os participantes irão escanear o código QR no recipiente para registrar a data e hora da coleta da amostra e escreverão a data da coleta no recipiente.

Nas semanas 1, 8 e 16, os participantes serão solicitados a coletar dados detalhados da dieta por meio de pesquisa eletrônica, usando a ferramenta automatizada de avaliação dietética autoadministrada de 24 horas do NIH. Amostras de fezes serão preparadas e aliquotadas pelo patrocinador do estudo e enviadas para UCI e Cleveland Clinic para PCR bacteriano, análise metabolômica, sequenciamento metagenômico Shotgun, avaliação de título de esporos bacterianos e teste de IgA. Todas as amostras, incluindo amostras de sangue, serão retidas indefinidamente em um freezer a -80C na Aimmune Therapeutics para pesquisa de acordo com o Protocolo Biobank existente nº 20234092. Pesquisas intermediárias e pós-intervenção serão enviadas aos participantes para avaliar experiências com o estudo e sementes de chia, bem como para identificar quaisquer efeitos colaterais ou queixas.

Pesquisas desidentificadas serão fornecidas e analisadas pelo Patrocinador do Estudo.

Indivíduos com baixo IgA ao longo do estudo. Para descobrir as bactérias desconhecidas que degradam IgA, os pesquisadores espalharão amostras fecais de indivíduos com baixo teor de IgA em placas de ágar sangue anaeróbico do CDC para formar colônias únicas. Em seguida, os pesquisadores irão subcultivar todas as colônias em novo ágar sangue CDC por meio de estrias. Os pesquisadores irão raspar cada colônia de subcultura em tampão PBS estéril e reunir ~15 colônias individuais para a incubação in vitro com IgA e Pigr. Após incubação durante a noite a 37 °C, a análise WB será utilizada para avaliação da degradação de IgA e Pigr. Colônias do pool bacteriano com atividade de clivagem de IgA/Pigr serão incubadas individualmente com os substratos novamente e analisadas por imunotransferência.

Avalie a complexidade das bactérias degradadoras de IgA. Os pesquisadores determinarão a sensibilidade aos antibióticos das bactérias candidatas in vitro. Devido aos desafios com a imunofilia de T. (degradador de IgA em camundongos), os pesquisadores avaliarão a complexidade das colônias (elas são facilmente cultivadas em cultura pura versus a presença de bactérias companheiras dentro da colônia isolada). Se o candidato a degradador de IgA crescer lentamente em cultura, os pesquisadores avaliarão a bactéria quanto à auxotrofia, assim como para T. imunophila. Os pesquisadores usarão ferramentas genômicas e metabólicas em combinação para testar a auxotrofia.

Indivíduos com alto teor de IgA no final do estudo. Os pesquisadores inocularão camundongos livres de germes com amostras de fezes desses doadores e avaliarão os níveis de IgA após duas semanas nesses camundongos (vamos amostras com baixo teor de IgA como controle). Para camundongos com altos níveis de IgA, os pesquisadores isolarão os esporos por meio de vários métodos e testarão em camundongos livres de germes. Os pesquisadores irão refinar a comunidade estimulante de IgA tanto quanto possível e testar se ela é cultivável. O objetivo é identificar micróbios intestinais humanos que respondem às fibras da dieta e alteram os níveis de IgA em todos os micróbios intestinais.