Аиммунное продольное исследование сотрудничества (FIBER-IMPACT)

Участники будут выбраны либо из числа ранее проверенных и выявленных кандидатов, либо из тех, кто выразил заинтересованность в участии в исследовании в рамках программы GoodNature, проводимой Aimmune. К участию не допускаются участники, которые произвели или имеют потенциал для производства большого количества готового продукта. Те, кто соглашается участвовать, должны пройти предварительный медицинский осмотр в электронной форме или по телефону, а также заполнить форму информированного согласия (ICF). После завершения ICF участникам будет присвоен уникальный анонимный идентификатор участника. Только несколько избранных членов Спонсора исследования будут иметь доступ к идентификационным кодам; коды деидентификации не будут передаваться сотрудникам. После этого участникам будет предоставлена ​​общая информация о методах диеты, пользе клетчатки и подробности исследования, включая сбор образцов и маркировку образцов, отслеживание диеты с помощью опросов, фотографии представленных блюд и т. д.

Участники встретятся на месте проведения исследования, и им будут предоставлены семена чиа, ручной инструмент для взятия проб кала и предварительно маркированные контейнеры для образцов, если они собирают образцы дома. В это время участники также могут сдать образцы крови.

Как только материалы для подготовки к вмешательству будут готовы, участники (60) начнут 16-недельный период вмешательства; половина участников будет добавлять 2,5 столовые ложки семян чиа ежедневно в течение первых 8 недель исследования и возвращаться к своей обычной диете в течение вторых 8 недель, половина участников будет поддерживать свою обычную диету в течение первых 8 недель и добавлять ежедневно 2,5 столовые ложки семян чиа в течение вторых 8 недель в качестве перекрестного плана. В домохозяйстве могут участвовать несколько человек, но потому, что мы хотим понять возможность передачи уровней SCFU и/или IgA.

Участники будут рандомизированы на две группы, но члены одного домохозяйства будут распределены в противоположные группы.

Всем участникам будет предложено заполнить краткий электронный ежедневный опрос о стрессе, включая предоставление ежедневных фотографий еды. Ежедневный опрос будет включать в себя анкету о состоянии здоровья пациента (PHQ-4), краткую утвержденную скрининговую анкету, состоящую из двухпунктовой шкалы депрессии (PHQ-2) и двухпунктовой шкалы тревоги (GAD-2)2. Данные PHQ-4 будут использоваться для отслеживания стресса. Ежедневные фотографии еды будут использоваться для отслеживания данных о диете на протяжении всего исследования.

Общий балл PHQ-4 варьируется от 0 до 12, при этом категории психологического дистресса составляют 2:

• Нет 0-2
• Легкая 3-5
• Умеренный 6-8
• Тяжелая 9-12

Подшкала тревоги = сумма пунктов 2 и 3 в форме ежедневного опроса (диапазон оценок от 0 до 6). Подшкала депрессии = сумма пунктов 4 и 5 в форме ежедневного опроса (диапазон оценок от 0 до 6). По каждой подшкале оценка 3 или выше считается положительной для целей скрининга.

Участникам также будет предложено собирать как минимум 3 образца стула в неделю во время исследования. Участники, которые собирают образцы стула дома, будут хранить образцы в своих морозильных камерах в предоставленном контейнере для хранения биологически опасных веществ, а образцы будут забираться еженедельно сотрудниками исследования или курьером. Все участники отсканируют QR-код на контейнере, чтобы записать дату и время сбора образца, и напишут дату сбора на контейнере.

На 1-й, 8-й и 16-й неделях участникам будет предложено собрать подробные данные о рационе посредством электронного опроса с использованием автоматизированного инструмента 24-часовой самостоятельной оценки питания NIH. Образцы стула будут подготовлены и разделены на аликвоты спонсором исследования и отправлены в UCI и клинику Кливленда для бактериальной ПЦР, метаболомного анализа, метагеномного секвенирования методом дробовика, оценки титра бактериальных спор и тестирования IgA. Все образцы, включая образцы крови, будут храниться в течение неопределенного времени в морозильной камере при температуре -80C в Aimmune Therapeutics для проведения исследований в соответствии с существующим протоколом биобанка № 20234092. Участникам будут отправлены опросы в середине и после вмешательства для оценки опыта использования исследования и семян чиа, а также для выявления любых побочных эффектов или жалоб.

Обезличенные опросы будут предоставлены и проанализированы Спонсором исследования.

Субъекты с низким уровнем IgA на протяжении всего исследования. Чтобы обнаружить неизвестные бактерии, разлагающие IgA, исследователи распределят образцы фекалий пациентов с низким уровнем IgA на чашки с анаэробным кровяным агаром CDC, чтобы сформировать отдельные колонии. Затем исследователи субкультивируют все колонии на новом кровяном агаре CDC путем посева штрихов. Исследователи соскребут каждую субкультурную колонию в стерильный буфер PBS и объединят примерно 15 отдельных колоний для инкубации in vitro с IgA и Pigr. После инкубации в течение ночи при 37 °C анализ WB будет использоваться для оценки деградации IgA и Pigr. Колонии из бактериального пула с активностью расщепления IgA/Pigr будут индивидуально инкубированы с субстратами еще раз и проанализированы с помощью иммуноблоттинга.

Оцените сложность бактерий, разлагающих IgA. Исследователи определят чувствительность бактерий-кандидатов к антибиотикам in vitro. Из-за проблем, связанных с T.immunophilia (разрушитель IgA у мышей), исследователи будут оценивать сложность колоний (легко ли их выращивать в чистой культуре по сравнению с присутствием сопутствующих бактерий внутри изолированной колонии). Если кандидат на деградацию IgA медленно растет в культуре, исследователи оценят бактерии на ауксотрофность, как и T.immunophila. Исследователи будут использовать геномные и метаболические инструменты в сочетании для проверки ауксотрофии.

Субъекты с высоким уровнем IgA в конце исследования. Исследователи привят мышам, свободным от микробов, образцы стула от этих доноров и оценят уровни IgA у этих мышей через две недели (в качестве контроля мы возьмем образцы с низким содержанием IgA). Для мышей с высоким уровнем IgA исследователи изолируют споры различными методами и проверяют на стерильных мышах. Исследователи будут максимально уточнять сообщество, стимулирующее IgA, и проверять, можно ли его культивировать. Цель состоит в том, чтобы идентифицировать кишечные микробы человека, которые реагируют на клетчатку в рационе, и изменить уровни IgA ко всем кишечным микробам.