Aimmune Longitudinal Collaboration Study (FIBER-IMPACT)

Účastníci budou vybráni buď ze skupiny dříve prověřených a identifikovaných kandidátů nebo těch, kteří projevili zájem o účast ve výzkumu prostřednictvím programu GoodNature, který provozuje Aimmune. Žádní účastníci, kteří vyrobili nebo mají potenciál vyrobit velké množství hotového produktu, se nebudou moci zúčastnit. Ti, kteří souhlasí s účastí, vyplní předběžný zdravotní průzkum prostřednictvím elektronického formuláře nebo telefonátu a vyplní formulář informovaného souhlasu (ICF). Po dokončení ICF bude účastníkům přiděleno jedinečné anonymní ID účastníka. Přístup k identifikačním kódům bude mít pouze několik vybraných členů sponzora studie; deidentifikační kódy nebudou sdíleny se spolupracovníky. Poté budou účastníkům poskytnuty obecné informace o dietních postupech, výhodách vlákniny a podrobnostech týkajících se studie, včetně odběru vzorků a označení vzorků, sledování stravy prostřednictvím průzkumů, fotografií předložených jídel atd.

Účastníci se setkají na místě studie a budou jim poskytnuta chia semínka, nástroj pro ruční odběr vzorků stolice a předem označené nádobky na vzorky, pokud si vzorky odebírají doma. V této době mohou účastníci také poskytnout vzorky krve.

Jakmile budou předintervenční materiály dokončeny, zahájí účastníci (60) 16týdenní intervenční období; polovina účastníků přidá denně 2,5 lžíce chia semínek po dobu prvních 8 týdnů studie a vrátí se ke své normální stravě po dobu druhých 8 týdnů, polovina účastníků bude prvních 8 týdnů udržovat svou normální stravu a přidá denně 2,5 lžíce chia semínek po dobu druhých 8 týdnů jako crossover design. Může se zúčastnit více lidí v domácnosti, ale protože chceme porozumět přenositelnosti SCFU a/nebo hladin IgA.

Účastníci budou náhodně rozděleni do dvou skupin, ale členové jedné domácnosti budou rozděleni do opačných skupin.

Všichni účastníci budou požádáni o vyplnění krátkého elektronického denního stresového průzkumu, včetně poskytnutí denních fotografií jídel. Denní průzkum bude zahrnovat dotazník o zdraví pacienta (PHQ-4), krátký validovaný screeningový dotazník sestávající z 2-položkové škály deprese (PHQ-2) a 2položkové škály úzkosti (GAD-2)2. Data PHQ-4 budou použita ke sledování stresu. Denní fotografie jídel budou použity ke sledování údajů o stravě v průběhu studie.

Celkové skóre PHQ-4 se pohybuje od 0 do 12, přičemž kategorie psychického stresu jsou 2:

• Žádný 0-2
• Mírné 3-5
• Střední 6-8
• Těžké 9-12

Úzkostná subškála = součet položek 2 a 3 na formuláři denního průzkumu (rozsah skóre 0 až 6) Subškála deprese = součet položek 4 ​​a 5 na formuláři denního průzkumu (rozsah skóre 0 až 6) Na každé subškále je skóre 3 nebo vyšší považováno za pozitivní pro účely screeningu.

Účastníci budou také požádáni, aby během studie odebírali minimálně 3 vzorky stolice týdně. Účastníci, kteří odebírají vzorky stolice doma, uloží vzorky ve svých mrazicích boxech v určeném kontejneru pro skladování biologického nebezpečí a vzorky budou každý týden vyzvedávat zaměstnanci studie nebo kurýr. Všichni účastníci naskenují QR kód na nádobě, aby zaznamenali datum a čas odběru vzorku a datum odběru zapíší na nádobu.

V 1., 8. a 16. týdnu budou účastníci požádáni, aby shromáždili podrobné údaje o stravě prostřednictvím elektronického průzkumu pomocí nástroje NIH Automated Self-Administrated 24-Hour Dietary Assessment Tool. Vzorky stolice budou připraveny a rozděleny na alikvoty sponzorem studie a zaslány na UCI a Cleveland Clinic pro bakteriální PCR, metabolomickou analýzu, metagenomické sekvenování Shotgun, vyhodnocení titru bakteriálních spor a testování IgA. Všechny vzorky, včetně vzorků krve, budou uchovávány na dobu neurčitou v mrazáku -80C v Aimmune Therapeutics pro účely výzkumu podle stávajícího protokolu Biobank č. 20234092. Účastníkům budou zaslány průzkumy v polovině a po intervenci, aby se vyhodnotily zkušenosti se studií a chia semínky a také aby se identifikovaly případné vedlejší účinky nebo stížnosti.

Neidentifikované průzkumy budou poskytnuty a analyzovány sponzorem studie.

Subjekty s nízkým IgA po celou dobu studie. Aby vědci objevili neznámé IgA-degradující bakterie, rozmístí vzorky stolice IgA-Low subjektů na CDC anaerobní krevní agarové plotny, aby vytvořily jednotlivé kolonie. Dále výzkumníci subkultivují všechny kolonie na novém krevním agaru CDC proužkováním. Výzkumníci seškrábnou každou subkulturní kolonii do sterilního PBS pufru a spojí ~15 jednotlivých kolonií pro in vitro inkubaci s IgA a Pigr. Po inkubaci přes noc při 37 °C bude WB analýza použita pro hodnocení degradace IgA a Pigr. Kolonie z bakteriálního poolu s IgA/Pigr-štěpící aktivitou budou znovu jednotlivě inkubovány se substráty a analyzovány imunoblotováním.

Zhodnoťte komplexitu bakterií degradujících IgA. Vědci určí citlivost kandidátních bakterií na antibiotika in vitro. Kvůli problémům s T. immunophilia (degradátor IgA u myší) budou výzkumníci hodnotit složitost kolonií (zda se snadno pěstují v čisté kultuře oproti přítomnosti doprovodných bakterií v izolované kolonii). Pokud kandidátní degradátor IgA roste v kultuře pomalu, výzkumníci vyhodnotí bakterie na auxotrofii jako u T. imunophila. Výzkumníci budou používat genomické a metabolické nástroje v kombinaci k testování auxotrofie.

Subjekty s vysokým IgA na konci studie. Výzkumníci naočkují bezmikrobní myši vzorky stolice od těchto dárců a po dvou týdnech u těchto myší vyhodnotí hladiny IgA (jako kontrolu použijeme vzorky s nízkým obsahem IgA). U myší, které mají vysoké hladiny IgA, budou vědci izolovat spory různými metodami a testovat je na myších bez mikrobů. Vědci co nejvíce zdokonalí komunitu stimulující IgA a otestují, zda je kultivovatelná. Cílem je identifikovat lidské střevní mikroby, které reagují na vlákninu ve stravě a mění hladiny IgA u všech střevních mikrobů.