Consumo di succo di mela nei pazienti in emodialisi

Materie e disegno dello studio

In questo studio di fattibilità pre-post pilota, i soggetti fungevano da propri controlli. I partecipanti sono stati reclutati da una clinica di emodialisi, situata nell'area metropolitana di Florianópolis, nello stato di Santa Catarina (Brasile meridionale), da giugno ad agosto 2015 con i seguenti criteri di inclusione: trattamento di emodialisi ≥ 3 mesi, età ≥ 20 anni e indice di massa corporea ( BMI) ≥ 23 kg/m2. I criteri di esclusione erano allergia alla mela, presenza di cancro o sindrome da immunodeficienza acquisita, trapianto di rene meno di 6 mesi prima dell'arruolamento nello studio, assunzione di integratori antiossidanti o nutrizionali nei 30 giorni precedenti l'arruolamento, essere stati ricoverati in ospedale entro 6 settimane prima dell'inizio del studiare o soffrire di una malattia acuta.

I soggetti sono stati istruiti a mantenere le loro abitudini alimentari abituali per tutta la durata dello studio, ad eccezione dell'evitare l'assunzione di cibi ricchi di polifenoli (cioè verdure, frutta e prodotti contenenti frutta, cioccolato, tè, caffè, miele e qualsiasi bevanda alcolica). entro 2 giorni prima e durante l'intervento. In due giorni diversi, ogni volontario ha consumato 300 ml di Fuji AJ, subito dopo una sezione di dialisi. Dopo un periodo di washout di 3 settimane, i volontari hanno bevuto 150 ml di Fuji AJ in modo simile a quello descritto sopra. Prima e dopo 30 e 60 minuti di consumo di AJ, i campioni di sangue sono stati prelevati per l'analisi biochimica. Questo protocollo è stato scelto tenendo conto dei precedenti effetti favorevoli del consumo di AJ sui biomarcatori sierici di OS descritti per volontari sani.

I dati clinici e biochimici di riferimento sono stati ottenuti dalle cartelle cliniche. Questo studio è stato approvato dal comitato etico della ricerca umana dell'Università Federale di Santa Catarina (UFSC) (numero di protocollo 37090614.6.0000.0118) e tutti i partecipanti hanno dato il consenso scritto e informato.

Succo di mela e analisi

Le mele Fuji sono state ottenute dai Campi Sperimentali Stagionali della Stazione Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina nella città di São Joaquin, Santa Catarina, Brasile (latitudine 28º 17' 39", longitudine 49º 55' 56" e altitudine 1.415 m), raccolte nella loro fase di maturazione commerciale durante la vendemmia 2015. Dopo la raccolta, le mele sono state conservate a 4 ± 1°C. Per consentire un'assunzione facile e veloce di mele in grandi quantità, sono stati utilizzati 300 ml di AJ, equivalenti a 3,5 mele, e 150 ml di AJ, equivalenti a 1,5 mele. Prima di preparare il succo, i frutti venivano sanificati in ipoclorito di sodio. Le mele con buccia e senza semi sono state frullate in un estrattore di succo centrifugo senza aggiunta di acqua. Ogni dose di AJ è stata preparata e consumata immediatamente.

Il contenuto di sostanza secca, i solidi solubili totali, il potenziale di idrogeno (pH) e l'acidità titolabile di AJ sono stati misurati secondo metodi ufficiali. Il contenuto fenolico totale degli estratti AJ è stato misurato utilizzando il metodo colorimetrico di Folin-Ciocalteu. Il contenuto totale di flavanoli è stato stimato utilizzando il metodo della p-dimetilamminocinnamaldeide (DMACA). La capacità antiossidante totale è stata determinata utilizzando il metodo DPPH (2,2-difenil-1-picryl-idrazil-idrato). Per l'antocianina monomerica totale, è stato utilizzato un metodo differenziale di pH spettrofotometrico. Le analisi sono state condotte con ogni AJ utilizzato nei due giorni di intervento, in triplice copia.

Prelievo di sangue e metodi di laboratorio

In ogni giorno dell'esperimento, i campioni di sangue dei partecipanti sono stati raccolti in tre diversi momenti. I campioni di sangue venoso sono stati raccolti utilizzando un sistema sottovuoto (Vacutainer Becton Dickinson BD®, San Paolo, Brasile) in provette contenenti eparina, acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) o provette prive di additivi. Il plasma e il siero sono stati immediatamente ottenuti mediante centrifugazione (3.000 giri al minuto (RPM), 10 min, temperatura ambiente) per la misurazione di acido urico, fosforo, glucosio, potassio, stato antiossidante totale (TAS) e stato ossidante totale (TOS). Per quantificare gli enzimi antiossidanti endogeni è stata lisata un'aliquota di sangue intero. Per misurare il glutatione ridotto (GSH), un'aliquota di sangue intero è stata conservata in N-etilmaleimmide (NEM). Tutti i campioni sono stati immediatamente conservati a -80°C per successive analisi in duplicato.

Le concentrazioni sieriche di acido urico, fosforo e glucosio sono state determinate utilizzando kit disponibili in commercio (Labtest Diagnóstica SA, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brasile) in un analizzatore multi-biochimico automatizzato (Cobas Miras Plus, Roche®, Germania). I livelli sierici di potassio sono stati misurati in un sistema automatico Dimension Max (Siemens Healthcare Diagnostics Products®, Germania), secondo le istruzioni del produttore.

I saggi TAS e TOS sono stati misurati spettrofotometricamente, secondo i metodi di Erel. L'acido ascorbico e il GSH sono stati determinati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), come descritto in precedenza. L'attività della superossido dismutasi (SOD) è stata valutata utilizzando il SOD Assay Kit (Sigma Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA) secondo le istruzioni del produttore. L'attività della catalasi (CAT) è stata determinata spettrofotometricamente secondo il metodo precedentemente descritto. L'attività della glutatione perossidasi (GPx) è stata determinata utilizzando il metodo del tasso di ossidazione del NADPH.