Verbrauch von Apfelsaft bei Hämodialysepatienten

Fächer und Studiendesign

In dieser Prä-Post-Pilot-Machbarkeitsstudie dienten die Probanden als ihre eigenen Kontrollen. Die Teilnehmer wurden von Juni bis August 2015 aus einer Hämodialyseklinik im Großraum Florianópolis im Bundesstaat Santa Catarina (Südbrasilien) mit den folgenden Einschlusskriterien rekrutiert: Hämodialysebehandlung ≥ 3 Monate, Alter ≥ 20 Jahre und Body-Mass-Index ( BMI) ≥ 23 kg/m2. Ausschlusskriterien waren Allergie gegen Apfel, Krebs oder erworbenes Immunschwächesyndrom, Nierentransplantation weniger als 6 Monate vor Aufnahme in die Studie, Einnahme von Antioxidantien oder Nahrungsergänzungsmitteln in den 30 Tagen vor Aufnahme, Krankenhausaufenthalt innerhalb von 6 Wochen vor Studienbeginn studieren oder an einer akuten Krankheit leiden.

Die Probanden wurden angewiesen, ihre üblichen Ernährungsgewohnheiten für die Dauer der Studie beizubehalten, mit Ausnahme der Vermeidung der Einnahme von polyphenolreichen Lebensmitteln (d. h. Gemüse, Obst und fruchthaltige Produkte, Schokolade, Tee, Kaffee, Honig und alkoholische Getränke). innerhalb von 2 Tagen vor und während des Eingriffs. An zwei verschiedenen Tagen konsumierte jeder Freiwillige 300 ml Fuji AJ unmittelbar nach einem Dialyseabschnitt. Nach einer Auswaschphase von 3 Wochen tranken die Freiwilligen 150 ml Fuji AJ in ähnlicher Weise wie oben beschrieben. Vor und nach 30 und 60 min AJ-Konsum wurden Blutproben zur biochemischen Analyse entnommen. Dieses Protokoll wurde unter Berücksichtigung der früheren günstigen Wirkungen des AJ-Konsums auf Serum-OS-Biomarker ausgewählt, die für gesunde Freiwillige beschrieben wurden.

Klinische und biochemische Grundliniendaten wurden aus Krankenakten erhalten. Diese Studie wurde von der Ethikkommission für Humanforschung der Federal University of Santa Catarina (UFSC) genehmigt (Protokollnummer 37090614.6.0000.0118) und alle Teilnehmer gaben eine schriftliche und informierte Zustimmung.

Apfelsaft und Analyse

Fuji-Äpfel wurden von den saisonalen Versuchsfeldern der Station Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina in der Stadt São Joaquin, Santa Catarina, Brasilien (Breite 28º 17' 39", Länge 49º 55' 56" und Höhe) bezogen 1.415 m), geerntet in ihrer kommerziellen Reifephase während der Ernte 2015. Nach der Ernte wurden die Äpfel bei 4 ± 1 °C gelagert. Um eine schnelle und einfache Apfelaufnahme in großen Mengen zu ermöglichen, wurden 300 ml AJ, entsprechend 3,5 Äpfeln, und 150 ml AJ, entsprechend 1,5 Äpfeln, verwendet. Vor der Saftzubereitung wurden die Früchte in Natriumhypochlorit desinfiziert. Äpfel mit Schale und ohne Kerne wurden in einem Zentrifugal-Entsafter ohne Wasserzugabe gemischt. Jede Dosis von AJ wurde zubereitet und sofort verbraucht.

Die Gehalte an Trockenmasse, löslichen Feststoffen, Wasserstoffpotential (pH) und titrierbarer Säure von AJ wurden nach offiziellen Methoden gemessen. Der Gesamtphenolgehalt der AJ-Extrakte wurde unter Verwendung des kolorimetrischen Folin-Ciocalteu-Verfahrens gemessen. Der Gesamtflavanolgehalt wurde unter Verwendung des p-Dimethylaminozimtaldehyd (DMACA)-Verfahrens geschätzt. Die gesamte antioxidative Kapazität wurde unter Verwendung der DPPH-Methode (2,2-Diphenyl-1-picryl-hydrazyl-hydrat) bestimmt. Für das gesamte monomere Anthocyanin wurde ein spektrophotometrisches pH-Differentialverfahren verwendet. Die Analysen wurden mit jedem AJ, das an den beiden Interventionstagen verwendet wurde, in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Blutentnahme und Labormethoden

An jedem Versuchstag wurden den Teilnehmern zu drei verschiedenen Zeitpunkten Blutproben entnommen. Venöse Blutproben wurden unter Verwendung eines Vakuumsystems (Vacutainer Becton Dickinson BD®, São Paulo, Brasilien) in Heparin, Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthaltende Röhrchen oder Röhrchen ohne Zusatzstoffe gesammelt. Plasma und Serum wurden sofort durch Zentrifugation (3.000 Umdrehungen pro Minute (RPM), 10 min, Raumtemperatur) für die Messung von Harnsäure, Phosphor, Glucose, Kalium, Gesamtantioxidansstatus (TAS) und Gesamtoxidansstatus (TOS) gewonnen. Um die endogenen antioxidativen Enzyme zu quantifizieren, wurde ein Aliquot Vollblut lysiert. Um reduziertes Glutathion (GSH) zu messen, wurde ein Aliquot Vollblut in N-Ethylmaleimid (NEM) konserviert. Alle Proben wurden sofort bei –80°C für eine spätere Analyse in zweifacher Ausfertigung gelagert.

Die Konzentrationen von Harnsäure, Phosphor und Glukose im Serum wurden unter Verwendung von im Handel erhältlichen Kits (Labtest Diagnóstica SA, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brasilien) in einem automatisierten multibiochemischen Analysegerät (Cobas Miras Plus, Roche®, Deutschland) bestimmt. Serumkaliumspiegel wurden in einem automatisierten Dimension Max System (Siemens Healthcare Diagnostics Products®, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen.

TAS- und TOS-Assays wurden spektrophotometrisch nach den Methoden von Erel gemessen. Ascorbinsäure und GSH wurden unter Verwendung von Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) wie zuvor beschrieben bestimmt. Die Aktivität der Superoxid-Dismutase (SOD) wurde unter Verwendung des SOD-Assay-Kits (Sigma Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet. Katalase (CAT)-Aktivität wurde spektrophotometrisch gemäß dem zuvor beschriebenen Verfahren bestimmt. Die Glutathionperoxidase (GPx)-Aktivität wurde unter Verwendung des NADPH-Oxidationsratenverfahrens bestimmt.