血液透析患者饮用苹果汁

受试者和研究设计

在这项事前事后试点可行性研究中，受试者充当了他们自己的对照。 参与者于 2015 年 6 月至 8 月从位于圣卡塔琳娜州（巴西南部）弗洛里亚诺波利斯都会区的一家血液透析诊所招募，纳入标准如下：血液透析治疗 ≥ 3 个月，年龄 ≥ 20 岁，体重指数（ BMI) ≥ 23 公斤/平方米。 排除标准为对苹果过敏、存在癌症或获得性免疫缺陷综合征、在参加研究前不到 6 个月进行肾移植、在参加研究前 30 天内服用抗氧化剂或营养补充剂、在研究开始前 6 周内住院读书，或患急病。

受试者被指示在研究期间保持他们通常的饮食习惯，除了避免摄入富含多酚的食物（即蔬菜、水果和含水果的产品、巧克力、茶、咖啡、蜂蜜和任何酒精饮料）干预前 2 天内和干预期间。 在不同的两天，每位志愿者在透析后立即饮用 300 mL Fuji AJ。 经过 3 周的清除期后，志愿者以与上述类似的方式饮用 150 mL Fuji AJ。 在服用 AJ 30 分钟和 60 分钟前后，抽取血样进行生化分析。 选择该协议是考虑到之前 AJ 消费对健康志愿者所描述的血清 OS 生物标志物的有利影响。

从医疗记录中获得基线临床和生化数据。 本研究经圣卡塔琳娜联邦大学 (UFSC) 人类研究伦理委员会批准（方案编号 37090614.6.0000.0118） 所有参与者都给出了书面知情同意书。

苹果汁和分析

富士苹果来自巴西圣卡塔琳娜州圣华金市 Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina' Station 的季节性试验田（纬度 28º 17' 39"，经度 49º 55' 56"，海拔高度） 1.415 m），在 2015 年收获期间在商业成熟阶段收获。 收获后，苹果储存在 4 ± 1°C。 为了快速轻松地大量摄入苹果，使用了 300 mL AJ，相当于 3.5 个苹果，以及 150 mL AJ，相当于 1.5 个苹果。 在制备果汁之前，水果在次氯酸钠中消毒。 在不加水的情况下，将带皮且无籽的苹果在离心式榨汁机中混合。 准备好每剂 AJ 并立即服用。

按照官方方法测量AJ的干物质、总可溶性固体、氢电位(pH)和可滴定酸度的含量。 使用 Folin-Ciocalteu 法比色法测量 AJ 提取物的总酚含量。 使用对二甲基氨基肉桂醛（DMACA）方法估算总黄烷醇含量。 使用 DPPH（2,2-二苯基-1-苦基-肼基-水合物）方法测定总抗氧化能力。 对于总单体花青素，使用分光光度法 pH 差分法。 对两个干预日中使用的每个 AJ 进行了分析，一式三份。

采血和实验室方法

在每个实验日，参与者的血液样本在三个不同的时刻被采集。 使用真空系统（Vacutainer Becton Dickinson BD®，巴西圣保罗）将静脉血样采集到肝素、乙二胺四乙酸 (EDTA) 试管或无添加剂试管中。 立即通过离心（3,000转/分钟（RPM），10分钟，室温）获得血浆和血清，用于测定尿酸、磷、葡萄糖、钾、总抗氧化状态（TAS）和总氧化状态（TOS）。 为了量化内源性抗氧化酶，裂解了等份的全血。 为了测量还原型谷胱甘肽 (GSH)，将等份的全血保存在 N-乙基马来酰亚胺 (NEM) 中。 所有样品均立即储存在 -80°C 下，用于以后一式两份的分析。

使用市售试剂盒（Labtest Diagnóstica SA, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brazil）在自动多生化分析仪（Cobas Miras Plus, Roche®, Germany）中测定血清尿酸、磷和葡萄糖浓度。 根据制造商的说明，在自动 Dimension Max 系统（Siemens Healthcare Diagnostics Products®，德国）中测量血清钾水平。

根据 Erel 的方法，通过分光光度法测量 TAS 和 TOS 测定。 如前所述，使用高效液相色谱 (HPLC) 测定抗坏血酸和 GSH。 根据制造商的说明，使用 SOD 测定试剂盒（Sigma Aldrich®, St. Louis, Missouri, USA）评估超氧化物歧化酶 (SOD) 活性。 根据先前描述的方法，通过分光光度法测定过氧化氢酶 (CAT) 活性。 使用 NADPH 氧化速率法测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) 活性。