Consumptie van appelsap bij hemodialysepatiënten

Onderwerpen en studieontwerp

In deze pre-post pilot-haalbaarheidsstudie dienden proefpersonen als hun eigen controles. Deelnemers werden gerekruteerd uit een hemodialysekliniek, gelegen in het grootstedelijk gebied van Florianópolis, in de staat Santa Catarina (Zuid-Brazilië), van juni tot augustus 2015 met de volgende inclusiecriteria: hemodialysebehandeling ≥ 3 maanden, leeftijd ≥ 20 jaar en body mass index ( BMI) ≥ 23 kg/m2. Uitsluitingscriteria waren allergie voor appel, aanwezigheid van kanker of verworven immunodeficiëntiesyndroom, niertransplantatie minder dan 6 maanden voor deelname aan het onderzoek, inname van antioxidanten of voedingssupplementen gedurende de 30 dagen vóór deelname aan het onderzoek, opname in het ziekenhuis binnen 6 weken voor aanvang van de studie. studeren of aan een acute ziekte lijden.

De proefpersonen kregen de instructie om hun gebruikelijke voedingsgewoonten gedurende het onderzoek aan te houden, met uitzondering van het vermijden van de inname van polyfenolrijk voedsel (d.w.z. groenten, fruit en fruitbevattende producten, chocolade, thee, koffie, honing en alle alcoholische dranken). binnen 2 dagen voor en tijdens interventie. Op twee verschillende dagen consumeerde elke vrijwilliger 300 ml Fuji AJ, direct na een dialysesectie. Na een uitwasperiode van 3 weken dronken de vrijwilligers 150 ml Fuji AJ op dezelfde manier als hierboven beschreven. Voor en na 30 en 60 minuten AJ-consumptie werden bloedmonsters afgenomen voor biochemische analyse. Dit protocol is gekozen rekening houdend met de eerdere gunstige effecten van AJ-consumptie op serum OS-biomarkers beschreven voor gezonde vrijwilligers.

Baseline klinische en biochemische gegevens werden verkregen uit medische dossiers. Deze studie werd goedgekeurd door de ethische commissie voor menselijk onderzoek van de Federale Universiteit van Santa Catarina (UFSC) (protocolnummer 37090614.6.0000.0118) en alle deelnemers gaven schriftelijke en geïnformeerde toestemming.

Appelsap en analyse

Fuji-appelen werden verkregen van de Experimental Seasonal Fields op het Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina' Station in de stad São Joaquin, Santa Catarina, Brazilië (breedtegraad 28º 17' 39", lengtegraad 49º 55' 56" en hoogte 1.415 m), geoogst in hun commerciële rijpingsfase tijdens de oogst van 2015. Na de oogst werden de appels bewaard bij 4 ± 1°C. Om een ​​snelle en gemakkelijke appelinname in grote hoeveelheden mogelijk te maken, werd 300 ml AJ, gelijk aan 3,5 appels, en 150 ml AJ, gelijk aan 1,5 appels gebruikt. Voordat het sap werd bereid, werden de vruchten ontsmet in natriumhypochloriet. Appels met schil en zonder pitten werden gemengd in een centrifugale sapcentrifuge zonder toevoeging van water. Elke dosis AJ werd onmiddellijk bereid en geconsumeerd.

Het gehalte aan droge stof, de totale hoeveelheid oplosbare vaste stoffen, het waterstofpotentieel (pH) en de titreerbare zuurgraad van AJ werden gemeten volgens officiële methoden. Het totale fenolgehalte van de AJ-extracten werd gemeten met behulp van de Folin-Ciocalteu-methode colorimetrisch. Het totale flavanolgehalte werd geschat met behulp van de p-dimethylaminocinnamaldehyde (DMACA)-methode. De totale antioxidantcapaciteit werd bepaald met behulp van de DPPH-methode (2,2-difenyl-1-picrylhydrazylhydraat). Voor totaal monomeer anthocyanine werd een spectrofotometrische pH-verschilmethode gebruikt. Analyses werden uitgevoerd met elke AJ die in de twee interventiedagen werd gebruikt, in drievoud.

Bloedafname en laboratoriummethoden

Op elke experimentdag werden op drie verschillende momenten bloedmonsters van deelnemers afgenomen. Veneuze bloedmonsters werden verzameld met behulp van een vacuümsysteem (Vacutainer Becton Dickinson BD®, São Paulo, Brazilië) in buizen met heparine, ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) of buizen zonder additieven. Plasma en serum werden onmiddellijk verkregen door centrifugatie (3.000 omwentelingen per minuut (RPM), 10 min, kamertemperatuur) voor de meting van urinezuur, fosfor, glucose, kalium, Total Antioxidant Status (TAS) en Total Oxidant Status (TOS). Om de endogene antioxidant-enzymen te kwantificeren, werd een hoeveelheid volbloed gelyseerd. Om gereduceerd glutathion (GSH) te meten, werd een hoeveelheid volbloed bewaard in N-ethylmaleïmide (NEM). Alle monsters werden onmiddellijk opgeslagen bij -80°C voor latere analyse in tweevoud.

Serum urinezuur-, fosfor- en glucoseconcentraties werden bepaald met behulp van in de handel verkrijgbare kits (Labtest Diagnóstica SA, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brazilië) in een geautomatiseerde multi-biochemische analysator (Cobas Miras Plus, Roche®, Duitsland). Serumkaliumspiegels werden gemeten in een geautomatiseerd Dimension Max-systeem (Siemens Healthcare Diagnostics Products®, Duitsland), volgens de instructies van de fabrikant.

TAS- en TOS-assays werden spectrofotometrisch gemeten volgens de methoden van Erel. Ascorbinezuur en GSH werden bepaald met behulp van krachtige vloeistofchromatografie (HPLC), zoals eerder beschreven. De activiteit van superoxidedismutase (SOD) werd geëvalueerd met behulp van SOD Assay Kit (Sigma Aldrich®, St. Louis, Missouri, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Catalase (CAT) activiteit werd spectrofotometrisch bepaald volgens de eerder beschreven methode. De activiteit van glutathionperoxidase (GPx) werd bepaald met behulp van de NADPH-oxidatiesnelheidsmethode.