Caratterizzazione della rigidità del tessuto fibroma uterino

Finalità e obiettivi L'obiettivo di questo progetto è capire se e come la rigidità del tessuto del fibroma uterino, misurata mediante SWE, possa essere utilizzata per predire e monitorare la risposta alla terapia medica in pazienti con fibromi uterini sintomatici.

Obiettivo 1: valutare la fattibilità dell'utilizzo della SWE per misurare la rigidità del miometrio non neoplastico e del tessuto del fibroma uterino nelle donne in pre-menopausa fibromi uterini e 60 partecipanti di controllo abbinati sani.

Obiettivo 1.2: Utilizzando i dati acquisiti dalle 60 donne con fibromi uterini, la validità di SWE sarà valutata confrontando la rigidità del tessuto uterino in vivo misurata da SWE con la rigidità dei campioni di tessuto uterino asportato chirurgicamente misurata ex vivo da un tester meccanico.

Obiettivo 1.3: valutare l'effetto confondente di età, parità, uso di contraccettivi e presenza di fibromi sulla rigidità miometriale misurata mediante SWE in 60 donne con fibromi uterini e 60 partecipanti sani di controllo abbinati.

Obiettivo 2: valutare l'applicabilità clinica dell'utilizzo della rigidità tissutale misurata mediante SWE per la classificazione e il monitoraggio dei fibromi uterini nelle donne in pre-menopausa.

Obiettivo 2.1: Determinare se SWE è abbastanza sensibile da identificare differenze nella rigidità dei tessuti tra fibromi non degenerativi e degenerativi, come convalidato dall'istologia da campioni di tessuto asportati chirurgicamente di 60 donne.

Obiettivo 2.2: Determinare se SWE è sufficientemente sensibile per identificare le differenze nella rigidità del tessuto fibroma in 60 donne con fibromi uterini prima e dopo due cicli di 3 mesi di terapia SPRM e valutare se la risposta medica (es. sollievo dai sintomi) è correlato alle misure SWE di base.

Disegno dello studio: si tratterà di uno studio caso-controllo prospettico che utilizzerà un disegno dello studio con modello misto (all'interno e tra i soggetti) (Figura 1). Verranno reclutate donne con fibromi uterini e partecipanti di controllo abbinati sani e parteciperanno a due o tre sessioni di imaging degli Stati Uniti (a seconda dell'assegnazione del gruppo). I partecipanti con fibromi avranno sia il loro miometrio che la rigidità del fibroma misurati usando SWE. Ai controlli sani abbinati verrà misurato solo il miometrio. I partecipanti con fibromi sottoposti a intervento chirurgico saranno sottoposti a isterectomia o miomectomia e i campioni di tessuto verranno raccolti e testati in una maschera che misura la rigidità sotto tensione meccanica. I partecipanti con fibromi che richiedono una gestione medica avranno una sessione di imaging degli Stati Uniti prima e dopo due cicli di 3 mesi di ulipristal acetato (UPA; un SPRM prescritto in Canada20).

Partecipanti: Verranno reclutati tre gruppi di 60 donne in premenopausa di età superiore ai 18 anni:

1. I pazienti che cercano la gestione chirurgica dei fibromi uterini (FIB-Sx) saranno reclutati da un elenco di pazienti acconsentiti all'intervento chirurgico (isterectomia o miomectomia con indicazione primaria di fibromi) da un membro del gruppo di ginecologia minimamente invasiva dell'ospedale di Ottawa (guidato dal candidato principale nominato , S. Singh). FIB-Sx sarà escluso se hanno> 5 fibromi identificati su US o sospetto di leiomiosarcoma basato su esame clinico, chirurgico o patologico grossolano.
2. I pazienti che richiedono una gestione medica per i fibromi uterini (FIB-Mx) verranno selezionati da un elenco di rinvii al Shirley E. Greenberg Women's Health Center (SEGWHC) presso l'Ottawa Hospital e reclutati al momento della consultazione se è stato loro prescritto un corso dell'UPA dal proprio medico curante. FIB-Mx sarà escluso se hanno> 5 fibromi identificati su US o precedente corso di analoghi SPRM / GnRH entro 3 mesi dal reclutamento.
3. I partecipanti al controllo sano (CON) (corrispondenti a FIB per età, parità e indice di massa corporea) saranno reclutati dalla comunità di Ottawa attraverso manifesti pubblicitari, passaparola e social media. La CON sarà esclusa se hanno una storia di patologia uterina (ad es. adenomiosi, iperplasia, endometriosi), hanno cicli mestruali irregolari, sono attualmente in stato di gravidanza o lo sono stati negli ultimi sei mesi prima dell'assunzione.

Valutazione iniziale: le donne autorizzate nei flussi di controllo (CON) e chirurgico (FIB-Sx) parteciperanno a due valutazioni. Le donne autorizzate nel flusso medico (FIB-Mx) parteciperanno a una visita il prima possibile dopo l'assunzione, un'altra tre mesi dopo l'inizio del trattamento e la terza visita a 6 mesi dopo l'inizio del trattamento. Ad ogni visita, le donne saranno sottoposte a valutazioni dell'elastografia delle onde di taglio (SWE) e 3D US (Supersonic UltrafastTM Aixplorer®, Apexium Medical, Canada) del loro utero nel suo insieme, in 10 siti sani e fino a 5 siti di fibromi. SWE e volumi saranno registrati in serie di 10 frame clip. Verranno effettuate misurazioni morfologiche dell'utero e dei fibromi selezionati e ai fibromi verranno assegnati numeri di identificazione basati su una dimensione 3D e una mappa della posizione. SWE sarà utilizzato per prendere misure rilevanti della rigidità tissutale in tutti i siti di interesse. Verranno eseguite tre ripetizioni di ciascuna misurazione. Le donne nei flussi CON e FIB-Sx riceveranno una seconda sessione di imaging identica durante la loro prima visita e una singola sessione di imaging durante la seconda visita. I partecipanti al flusso FIB-Mx riceveranno una singola sessione di imaging ad ogni visita.

Intervento chirurgico: verrà registrato l'approccio chirurgico (addominale vs laparoscopico) così come gli esiti secondari tra cui tempo operatorio, perdita di sangue, conversioni della tecnica chirurgica, escissioni fallite/incomplete e procedure aggiuntive eseguite. Questi dati saranno utilizzati per scopi descrittivi e contribuiranno allo sviluppo di un database per il nostro obiettivo di ricerca a lungo termine.

Campionamento tissutale: per i partecipanti al flusso FIB-Sx, l'approccio chirurgico (miomectomia o isterectomia + addominale o laparoscopica), il corso della resezione e gli esiti secondari tra cui tempo operatorio, perdita di sangue, tecnica chirurgica, escissioni fallite/incomplete, intra o post -le complicanze operatorie e le procedure aggiuntive saranno registrate a scopo descrittivo. I campioni di tessuto morcellato saranno esclusi. Tutto il tessuto asportato chirurgicamente verrà inviato alla patologia per l'ispezione grossolana e l'elaborazione seguendo le procedure standard. Per i casi di isterectomia, un assistente patologico (addestrato e sotto la supervisione del collaboratore S. Strickland) asporterà cinque campioni di 1 cm3 di tessuto non neoplastico dai siti miometriali di interesse e sezioni di 1 cm3 da ciascun fibroma di interesse. Per i casi di miomectomia, sezioni di 1 cm3 da ciascun fibroma di interesse saranno analogamente asportate. Nei casi chirurgici con >3 fibromi asportati, il chirurgo partecipante includerà il numero di identificazione del fibroma specifico dello studio fornito durante la sessione di imaging degli Stati Uniti nella richiesta di patologia. Un membro del gruppo di ricerca incontrerà l'assistente di patologia al momento della dissezione per garantire che ogni campione sia posto in singoli flaconi con soluzione salina isotonica ed etichettato con il suo numero di identificazione univoco dello studio. I campioni saranno trasportati al laboratorio di M. Labrosse (collaboratore) presso l'Ottawa Heart Institute per i test meccanici.

Intervento medico: il trattamento medico verrà registrato così come gli esiti secondari relativi ai sintomi del paziente e alla qualità della vita. Questi dati saranno utilizzati a scopo descrittivo e contribuiranno allo sviluppo di un database per il nostro obiettivo di ricerca a lungo termine.

Test meccanici: tutti i campioni verranno conservati in soluzione salina e testati entro 24 ore dall'escissione. I campioni saranno ulteriormente sezionati in fette di 2x10mm e caricati in un jig meccanico (Biotester, CellScale, Waterloo, Canada) presso il laboratorio del collaboratore M. Labrosse e testati a 37°C, ciclicamente in tensione (1Hz, 2-3% strain) seguendo le procedure sviluppato in letteratura per i test meccanici sul tessuto uterino. Il modulo di elasticità (E, kPa), analogo alla rigidità, e il rapporto di contrasto della rigidità (E_fibroide/E_miometrio) saranno calcolati tre volte per ciascun campione e mediati. Il protocollo di test meccanico richiederà circa 2 ore per essere completato. Il carico meccanico sarà sotto controllo di spostamento (deformazione del 2-3%) per eliminare il rischio di danneggiare i tessuti, consentendo misurazioni ripetute e analisi istologiche. Tutti i campioni verranno collocati in formalina tamponata neutra al 10% immediatamente dopo il test e restituiti alla patologia per la diagnosi definitiva. I referti patologici e le diapositive saranno esaminati retrospettivamente per estrarre le caratteristiche descrittive del fibroma. I membri del gruppo di ricerca che acquisiscono le successive misurazioni SWE, le misurazioni della rigidità meccanica e la revisione dei rapporti patologici saranno all'oscuro dei risultati della misurazione iniziale SWE.

Analisi statistiche: tutti i dati saranno testati per la normalità e verranno utilizzati, se del caso, test non parametrici equivalenti a quelli descritti di seguito. Tutti i test verranno eseguiti utilizzando il software statistico SPSS (v25, IMB Corp., Armonk, USA) e la significatività sarà accettata come p<0,05. Verranno eseguiti opportuni confronti post-hoc. Si presume che le variabili dipendenti del picco SWE e della rigidità media siano correlate.

Obiettivo 1.1: Le analisi multivariate della varianza (MANOVA) a due vie (3x2) verificheranno differenze significative nella rigidità media e di picco (kPa) in relazione alla variabile indipendente del tempo di prova (ripetizione e sessione) per ciascun sito di misurazione. Analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) e test t dipendenti saranno utilizzati per la valutazione post-hoc corretta di Bonferroni degli effetti principali significativi. I t-test dipendenti determineranno se il piano di misurazione influisce in modo significativo sulle misure di rigidità SWE. I coefficienti di correlazione intra-classe e l'errore standard delle misurazioni valuteranno l'affidabilità intra- e inter-sessione e tra i piani delle misurazioni della rigidità SWE.

Obiettivo 1.2: le regressioni lineari univariate mapperanno la relazione tra la media SWE e la rigidità di picco e il modulo complesso di elasticità, con il modulo complesso di elasticità considerato lo standard di criterio. Per le relazioni non lineari verranno effettuate le opportune trasformazioni.

Obiettivo 1.3: analisi multivariate a due vie della covarianza testeranno l'effetto del sito (giunzione cervicale, istmo, fondo) e del gruppo (FIB vs CON) sulla rigidità miometriale di picco e media e gli effetti confondenti dell'età, della parità e dell'uso di contraccettivi sul differenza media di gruppo aggiustata. Test t indipendenti verranno utilizzati per la valutazione post-hoc se si osserva un effetto/interazione principale significativo. Le regressioni logistiche mapperanno la relazione tra età, parità e uso di contraccettivi con la rigidità miometriale in ciascun sito di misurazione. Regressioni accettabili spiegheranno >80% della varianza nei dati. Per le relazioni non lineari verranno effettuate le opportune trasformazioni.

Obiettivo 2.1: Sulla base del referto patologico, i fibromi saranno classificati come non degenerativi (es. normale) o degenerativo (incluse tutte le variazioni nella presentazione). I MANOVA unidirezionali valuteranno le differenze di gruppo nel tipo di fibroma (non degenerativo vs degenerativo) e il picco del tessuto uterino e la rigidità media misurata con SWE, mentre la valutazione post-hoc degli effetti principali significativi comporterà t-test indipendenti utilizzando appropriate correzioni di Bonferroni.

Obiettivo 2.2: le misurazioni SWE saranno mediate insieme tra le ripetizioni intra-sessione per ciascun sito. I MANOVA a due vie valuteranno le differenze di sito e tempo (pre, post-corso 1, post-corso 2) nella rigidità media e di picco misurate con SWE Gli ANOVA unidirezionali e i test t dipendenti saranno utilizzati per la valutazione post-hoc corretta di Bonferroni di effetti principali significativi.