Charakterystyka sztywności tkanki mięśniaków macicy

Cele i cele Celem tego projektu jest zrozumienie, czy iw jaki sposób sztywność mięśniaków macicy mierzona za pomocą SWE może być wykorzystana do przewidywania i monitorowania odpowiedzi na leczenie zachowawcze u pacjentek z objawowymi mięśniakami macicy.

Cel 1: Ocena możliwości zastosowania SWE do pomiaru sztywności nienowotworowej mięśniówki macicy i tkanki mięśniaków macicy u kobiet przed menopauzą Cel 1.1: Ocena wiarygodności międzysesyjnej i śródsesyjnej pomiaru sztywności tkanki macicy za pomocą SWE u 60 kobiet z mięśniaków macicy i 60 zdrowych, dopasowanych uczestników kontroli.

Cel 1.2: Korzystając z danych uzyskanych od 60 kobiet z mięśniakami macicy, ważność SWE zostanie oceniona poprzez porównanie sztywności tkanki macicy mierzonej in vivo za pomocą SWE ze sztywnością chirurgicznie wyciętych próbek tkanki macicy mierzonych ex vivo za pomocą testera mechanicznego.

Cel 1.3: Ocena zakłócającego wpływu wieku, rodności, stosowania środków antykoncepcyjnych i obecności mięśniaków na sztywność mięśnia sercowego mierzoną metodą SWE u 60 kobiet z mięśniakami macicy i 60 zdrowych kobiet z grupy kontrolnej.

Cel 2: Ocena przydatności klinicznej wykorzystania sztywności tkanek mierzonej metodą SWE do klasyfikacji i monitorowania mięśniaków macicy u kobiet przed menopauzą.

Cel 2.1: Określenie, czy SWE jest wystarczająco czuły, aby zidentyfikować różnice w sztywności tkanek między mięśniakami niezwyrodnieniowymi i zwyrodnieniowymi, co zostało potwierdzone histologicznie na próbkach tkanek wyciętych chirurgicznie od 60 kobiet.

Cel 2.2: Określenie, czy SWE jest wystarczająco czuły, aby zidentyfikować różnice w sztywności tkanki mięśniaków u 60 kobiet z mięśniakami macicy przed i po dwóch 3-miesięcznych kursach terapii SPRM oraz ocenić, czy reakcja medyczna (tj. złagodzenie objawów) jest związane z podstawowymi pomiarami SWE.

Projekt badania: Będzie to prospektywne badanie kliniczno-kontrolne, w którym wykorzystany zostanie model mieszany (w ramach i między podmiotami) (Rysunek 1). Kobiety z mięśniakami macicy i zdrowe, dopasowane uczestniczki kontroli zostaną zrekrutowane i wezmą udział w dwóch lub trzech sesjach obrazowania USG (w zależności od przydziału do grupy). Uczestnicy z mięśniakami będą mieli mierzoną zarówno ich mięśniówkę macicy, jak i sztywność mięśniaków za pomocą SWE. Zdrowo dopasowane grupy kontrolne będą miały mierzony tylko mięsień macicy. Uczestnicy z mięśniakami poddanymi interwencji chirurgicznej zostaną poddani histerektomii lub miomektomii, a próbki tkanek zostaną pobrane i przetestowane w przyrządzie, który mierzy sztywność pod wpływem naprężeń mechanicznych. Uczestnicy z mięśniakami, którzy będą potrzebować pomocy medycznej, zostaną poddani badaniu obrazowemu USG przed i po dwóch 3-miesięcznych kursach octanu uliprystalu (UPA; SPRM przepisywany w Kanadzie20).

Uczestnicy: Zrekrutowane zostaną trzy grupy 60 kobiet przed menopauzą powyżej 18 roku życia:

1. Pacjenci poszukujący leczenia chirurgicznego mięśniaków macicy (FIB-Sx) będą rekrutowani z listy pacjentek, które wyraziły zgodę na operację (histerektomia lub miomektomia z pierwotnym wskazaniem na mięśniaki macicy) przez członka Grupy Ginekologii Minimalnie Inwazyjnej Szpitala Ottawa (kierowanej przez nominowanego głównego wnioskodawcę) , S. Singh). FIB-Sx zostanie wykluczony, jeśli mają > 5 mięśniaków zidentyfikowanych w badaniu USG lub podejrzenie mięśniakomięsaka gładkokomórkowego na podstawie badania klinicznego, chirurgicznego lub makroskopowego badania histopatologicznego.
2. Pacjenci szukający pomocy medycznej w przypadku mięśniaków macicy (FIB-Mx) zostaną przeszukani z listy skierowań do Centrum Zdrowia Kobiet Shirley E. Greenberg (SEGWHC) w szpitalu w Ottawie i będą rekrutowani w czasie konsultacji, jeśli przepisano im kurs UPA przez lekarza prowadzącego. FIB-Mx zostanie wykluczony, jeśli w ciągu 3 miesięcy od rekrutacji zostaną wykryte > 5 mięśniaków macicy lub poprzedni cykl analogów SPRM/GnRH.
3. Zdrowi uczestnicy kontrolni (CON) (dopasowani do FIB pod względem wieku, liczby porodów i BMI) będą rekrutowani ze społeczności Ottawy za pośrednictwem plakatów reklamowych, ustnie i mediów społecznościowych. CON zostaną wykluczone, jeśli mają historię patologii macicy (np. adenomioza, hiperplazja, endometrioza), mają nieregularne cykle miesiączkowe, są obecnie w ciąży lub były w ciąży w ciągu ostatnich sześciu miesięcy przed rekrutacją.

Wstępna ocena: Wyrażone kobiety w strumieniu kontrolnym (CON) i chirurgicznym (FIB-Sx) wezmą udział w dwóch ocenach. Wyrażone kobiety ze strumienia medycznego (FIB-Mx) wezmą udział w jednej wizycie w najbliższym dogodnym terminie po rekrutacji, kolejnej trzy miesiące po rozpoczęciu leczenia i trzeciej wizycie po 6 miesiącach od rozpoczęcia leczenia. Podczas każdej wizyty kobiety będą poddawane ocenie elastografii fali ścinającej (SWE) i USG 3D (Supersonic UltrafastTM Aixplorer®, Apexium Medical, Kanada) całej macicy, w 10 zdrowych miejscach i maksymalnie w 5 miejscach z mięśniakami. SWE i tomy będą nagrywane w seriach po 10 klatek. Wykonane zostaną pomiary morfologiczne macicy i wybranych mięśniaków, a mięśniakom zostaną nadane numery identyfikacyjne na podstawie trójwymiarowej mapy wielkości i położenia. SWE zostanie wykorzystany do podjęcia odpowiednich pomiarów sztywności tkanek we wszystkich interesujących miejscach. Wykonane zostaną trzy powtórzenia każdego pomiaru. Kobiety ze strumieni CON i FIB-Sx otrzymają drugą identyczną sesję obrazowania podczas pierwszej wizyty i pojedynczą sesję obrazowania podczas drugiej wizyty. Uczestnicy strumienia FIB-Mx otrzymają jedną sesję obrazowania podczas każdej wizyty.

Interwencja chirurgiczna: rejestrowane będzie podejście chirurgiczne (brzuszne vs laparoskopowe), a także drugorzędne wyniki, w tym czas operacji, utrata krwi, konwersje technik chirurgicznych, nieudane/niecałkowite wycięcia i wykonane dodatkowe procedury. Dane te zostaną wykorzystane do celów opisowych i przyczynią się do rozwoju bazy danych dla naszego długoterminowego celu badawczego.

Pobieranie próbek tkanek: dla uczestników strumienia FIB-Sx dostęp chirurgiczny (miomektomia lub histerektomia + brzuszna lub laparoskopowa), przebieg resekcji i drugorzędne wyniki, w tym czas operacji, utrata krwi, technika chirurgiczna, nieudane/niecałkowite wycięcie, śród- lub po - powikłania operacyjne i dodatkowe procedury zostaną odnotowane w celach opisowych. Próbki tkanek z morcelacją zostaną wykluczone. Cała chirurgicznie wycięta tkanka zostanie wysłana do patologii w celu dokładnej kontroli i przetworzenia zgodnie ze standardowymi procedurami. W przypadku histerektomii asystent patologa (przeszkolony i pod nadzorem współpracownika S. Stricklanda) pobierze pięć próbek tkanki nienowotworowej o objętości 1 cm3 z interesujących miejsc mięśniówki macicy i skrawki o objętości 1 cm3 z każdego interesującego mięśniaka. W przypadku miomektomii skrawki o objętości 1 cm3 z każdego mięśniaka będącego przedmiotem zainteresowania zostaną podobnie wycięte. W przypadkach chirurgicznych, w których usunięto > 3 mięśniaki, chirurg uczestniczący w zapotrzebowaniu na patologię umieści numer identyfikacyjny mięśniaka właściwy dla danego badania, podany podczas sesji obrazowania USG. Członek zespołu badawczego spotka się z asystentem patologa w czasie sekcji, aby upewnić się, że każda próbka jest umieszczona w osobnych butelkach z izotonicznym roztworem soli i oznaczona unikalnym numerem identyfikacyjnym badania. Próbki zostaną przetransportowane do laboratorium M. Labrosse (współpracownika) w Ottawa Heart Institute w celu przeprowadzenia badań mechanicznych.

Interwencja medyczna: Rejestrowane będzie leczenie medyczne, a także drugorzędne wyniki związane z objawami pacjenta i jakością życia. Dane te zostaną wykorzystane do celów opisowych i przyczynią się do rozwoju bazy danych dla naszego długoterminowego celu badawczego.

Testy mechaniczne: Wszystkie próbki będą przechowywane w soli fizjologicznej i badane w ciągu 24 godzin od wycięcia. Próbki zostaną następnie pocięte na plastry 2x10 mm i załadowane do mechanicznego przyrządu (Biotester, CellScale, Waterloo, Kanada) w laboratorium współpracownika M. Labrosse i przetestowane w temperaturze 37°C, cyklicznie w napięciu (1 Hz, 2-3% naprężenia) zgodnie z procedurami opracowany w literaturze do badań mechanicznych na tkance macicy. Moduł sprężystości (E, kPa), analogiczny do sztywności, oraz współczynnik kontrastu sztywności (E_włókniak/E_myometrium) zostaną obliczone trzy razy dla każdej próbki i uśrednione. Protokół testów mechanicznych zajmie około 2 godzin. Obciążenie mechaniczne będzie kontrolowane przemieszczeniem (naprężenie 2-3%) w celu wyeliminowania ryzyka uszkodzenia tkanek, co pozwoli na wielokrotne pomiary i analizę histologiczną. Wszystkie próbki zostaną umieszczone w 10% obojętnej zbuforowanej formalinie natychmiast po badaniu i zwrócone do patologii w celu ostatecznej diagnozy. Raporty patologiczne i slajdy będą retrospektywnie przeglądane w celu wyodrębnienia opisowych cech mięśniaków. Członkowie zespołu badawczego uzyskujący kolejne pomiary SWE, pomiary sztywności mechanicznej i przeglądający raporty patologiczne będą ślepi na wyniki wstępnego pomiaru SWE.

Analizy statystyczne: Wszystkie dane zostaną przetestowane pod kątem normalności, aw stosownych przypadkach zostaną użyte równoważne testy nieparametryczne do tych opisanych poniżej. Wszystkie testy zostaną przeprowadzone przy użyciu oprogramowania statystycznego SPSS (v25, IMB Corp., Armonk, USA), a istotność zostanie przyjęta jako p<0,05. Zostaną przeprowadzone odpowiednie porównania post-hoc. Zakłada się, że zmienne zależne szczytowej sztywności SWE i średniej sztywności są ze sobą powiązane.

Cel 1.1: Dwukierunkowe (3x2) wielowymiarowe analizy wariancji (MANOVA) będą testować znaczące różnice w średniej i szczytowej sztywności (kPa) w odniesieniu do niezależnej zmiennej czasu testu (powtórzenie i sesja) dla każdego miejsca pomiaru. Jednokierunkowe analizy wariancji (ANOVA) i zależne testy t zostaną wykorzystane do oceny post-hoc skorygowanej metodą Bonferroniego znaczących efektów głównych. Zależne testy t określą, czy płaszczyzna pomiarowa znacząco wpływa na pomiary sztywności SWE. Współczynniki korelacji wewnątrzklasowej i błąd standardowy pomiarów pozwolą na ocenę wiarygodności wewnątrz- i międzysesyjnej oraz międzypłaszczyznowej pomiarów sztywności SWE.

Cel 1.2: Jednowymiarowa regresja liniowa odwzoruje związek między średnią i szczytową sztywnością SWE a złożonym modułem sprężystości, przy czym złożony moduł sprężystości uznawany jest za kryterium standardowe. Dla zależności nieliniowych zostaną wykonane odpowiednie przekształcenia.

Cel 1.3: Dwukierunkowe wieloczynnikowe analizy kowariancji zbadają wpływ miejsca (połączenie szyjki macicy, przesmyk, dno) i grupy (FIB vs CON) na szczytową i średnią sztywność mięśniówki macicy oraz zakłócający wpływ wieku, porodu i stosowania środków antykoncepcyjnych na skorygowana średnia różnica grupowa. Niezależne testy t zostaną wykorzystane do oceny post-hoc, jeśli zostanie zaobserwowany znaczący efekt główny/interakcja. Regresje logistyczne zmapują związek między wiekiem, liczbą porodów i stosowaniem środków antykoncepcyjnych a sztywnością mięśniówki macicy w każdym miejscu pomiaru. Akceptowalne regresje wyjaśnią >80% wariancji danych. Dla zależności nieliniowych zostaną wykonane odpowiednie przekształcenia.

Cel 2.1: Na podstawie raportu histopatologicznego mięśniaki zostaną sklasyfikowane jako niezwyrodnieniowe (tj. normalny) lub zwyrodnieniowy (w tym wszystkie różnice w prezentacji). Jednokierunkowe MANOVA będą oceniać między grupami różnice w typie mięśniaka (niezwyrodnieniowy vs. zwyrodnieniowy) oraz piku tkanki macicy i średniej sztywności mierzonej za pomocą SWE, podczas gdy ocena post-hoc znaczących efektów głównych będzie obejmowała niezależne testy t z wykorzystaniem odpowiednich poprawek Bonferroniego.

Cel 2.2: Pomiary SWE będą uśredniane zespołowo w powtórzeniach wewnątrz sesji dla każdego miejsca. Dwukierunkowe MANOVA ocenią teren i czas (przed, po kursie 1, po kursie 2) różnice w średniej i szczytowej sztywności mierzonej za pomocą SWE Jednokierunkowe ANOVA i zależne testy t zostaną wykorzystane do oceny post-hoc z poprawką Bonferroniego znaczących efektów głównych.