Rilevazione di anticorpi anti-membrana basale glomerulare (Anti-GBM): un biomarcatore promettente per la nefrite lupica (LN)? (GOODLUPUS)

Introduzione e contesto:

La glomerulonefrite e le malattie autoimmuni sono spesso associate. La nefrite da lupus (LN) è una delle principali manifestazioni cliniche del lupus eritematoso sistemico (LES) che ha un grave impatto sulla prognosi. Questa complicanza è una vera sfida per i medici a causa dell'insorgenza insidiosa e dell'assenza di ricadute prevedibili. L'uso di biomarcatori è quindi essenziale, ma i biomarcatori convenzionali come proteinuria, velocità di filtrazione glomerulare, sedimenti urinari, anticorpi anti-dsDNA e livelli di complemento, hanno scarsa sensibilità e bassa specificità per prevedere la presenza di LN e nuovi biomarcatori più affidabili (come genetico, epigenetico o biomarcatori proteici) sono difficili da usare per la pratica medica quotidiana , .

La malattia basale della membrana anti-glomerulare (malattia anti-GBM) è una malattia rara (da 0,5 a 1/milione di abitanti) e grave, caratterizzata da glomerulonefrite rapidamente progressiva, emorragia polmonare e presenza di anticorpi anti-GBM, che sono altamente sensibile (100%) e specifico (92-100%) di questa condizione.

Nel nostro dipartimento di medicina interna è stato segnalato un caso di glomerulonefrite di Goodpasture associato a un LES attivo e, dopo aver cercato i dati in letteratura, segnaliamo i seguenti studi:

• sono stati segnalati alcuni casi simili come un caso di emorragia polmonare e anti-GBM positivo nel LES, o un caso di malattia anti-GBM e LN che si presenta come sindrome polmonare-renale.
• Nel 2006, uno studio di coorte cinese ha evidenziato un'elevata prevalenza di anticorpi anti-GBM, in campioni di siero di pazienti affetti da LES (14 positivi/157 pazienti (8,9%) con metodo ELISA). Inoltre, ogni paziente con anticorpi anti-GMB positivi presentava LN e un LES più grave (con più anemie, emorragie polmonari). Soffrivano anche di malattie renali più importanti. Infatti, secondo i criteri istologici, 10/14 presentavano lesioni da glomerulonefrite necrotizzante a mezzaluna e 5/14 avevano una diagnosi reale di malattia di Goodpasture.

• Notiamo anche che alcuni autori hanno già studiato la patogenesi di questa associazione (se spiegazioni immunologiche, collegamenti genetici,).

  3. Ipotesi principale: sulla base di questi risultati, sospettiamo che il rilevamento di anticorpi anti-GBM circolanti positivi possa essere più frequentemente positivo nei pazienti seguiti da LES (rispetto alla popolazione generale) e che potrebbe essere un interessante biomarcatore di screening per LN.

  4. Obiettivi Primo obiettivo: sulla base di 2 gruppi di pazienti con LES (uno con nefrite lupica e un altro senza) vorremmo confrontare il rapporto di anticorpi anti-GBM positivi in ​​ciascun gruppo, prevedendo un tasso più elevato nei pazienti con LES con LN.

Secondo obiettivo: studiare i pazienti anti-GBM positivi nei loro aspetti clinici, sierologici e renali, in questa popolazione di LES.

5. Materiali e metodi Si suggerisce uno studio retrospettivo analitico trasversale controllato, basato su campioni di siero della Lupus Biobank of Upper Rhine (progetto LBBR) e su campioni di siero di donatori di sangue volontari sani (gruppo di controllo).

Per quanto riguarda l'utilizzo di LBBR Lupus Biobank, il nostro progetto è già stato accettato dal comitato scientifico.

Dopo la randomizzazione di gruppo, i campioni di siero SLE crioconservati saranno trasferiti da un servizio di trasporto specializzato, dalla biobanca di Strasburgo, al dipartimento di laboratorio di immunologia nel centro ospedaliero universitario di Reims, per eseguire test anti-GBM.

Per quanto riguarda il reclutamento di campioni di siero sano, il Centro regionale del sangue di Reims suggerirà sistematicamente ai donatori di sangue volontari di partecipare. Se sono d'accordo, riceveranno un'informativa estesa sullo studio e, dopo il consenso scritto, verrà prelevato un campione di provetta.

6. Popolazione Il calcolo statistico ha portato alla necessità di 200 sieri SLE (100 pazienti in ciascun gruppo). Pertanto, utilizzeremo: 100 campioni di siero provenienti dalla biobanca del lupus pazienti LBBR senza nefrite lupica e 100 campioni di siero di pazienti con lupus eritematoso sistemico e nefrite lupica.

Utilizzeremo anche 100 campioni di siero di donatori volontari di sangue.

7. Progetto sperimentale La determinazione degli anticorpi anti-GBM nei sieri sarà effettuata mediante un metodo automatizzato chemiluminescente, utilizzando un test kit commerciale. In caso di positività, lo stesso siero verrà testato una seconda volta per confermare il risultato, e quindi controllato con un altro metodo utilizzando l'immunofluorescenza indiretta (IIF) in sezioni congelate di rene di primate, coprendo le aree di reazione di un vetrino BIOCHIP (metodo di riferimento).

Secondo il nostro dipartimento di laboratorio di immunologia, abbiamo bisogno di 600μl di siero per paziente per poter eseguire tutti i test. Secondo le istruzioni del produttore, il valore di cut-off ottimale per la positività nel metodo della chemiluminescenza sarà fissato a 20CU/mL.

8. Analisi dei dati Endpoint primario: proporzione di anticorpi anti-MBG positivi, sarà stimata in ciascun gruppo (con e senza nefrite lupica) mediante un test Chi-2 o un test esatto di Fisher (a seconda delle condizioni di validità del test).

Endpoint secondario: le caratteristiche cliniche, sierologiche e renali dei pazienti anti-GBM positivi, saranno confrontate con quelle negative, utilizzando test adattati alla distribuzione di ciascuna variabile.

9. Risultati attesi e prospettive future

• Ci aspettiamo una maggiore frequenza di anticorpi circolanti positivi anti-GBM nei pazienti con LN rispetto al gruppo di controllo SLE e al gruppo di controllo sano.
• Se questa ricerca fosse positiva, un altro studio più ampio potrebbe mostrare l'interesse degli anticorpi anti-GBM come biomarcatore predittivo di LN e come biomarcatore prognostico di LES.