항사구체 기저막 항체(Anti-GBM)의 검출: 루푸스 신염(LN)에 대한 유망한 바이오마커? (GOODLUPUS)

소개 및 컨텍스트:

사구체신염과 자가면역질환은 종종 관련이 있습니다. 루푸스 신염(LN)은 예후에 심각한 영향을 미치는 전신성 홍반성 루푸스(SLE)의 주요 임상 증상 중 하나입니다. 이 합병증은 교활한 발병과 예측 가능한 재발이 없기 때문에 임상의에게 진정한 도전입니다. 따라서 바이오마커 사용이 필수적이지만 단백뇨, 사구체 여과율, 소변 침전물, 항-dsDNA 항체 및 보체 수준과 같은 기존의 바이오마커는 LN 발생을 예측하기 위한 민감도가 낮고 특이성이 낮으며 보다 신뢰할 수 있는 새로운 바이오마커(예: 유전적, 후생유전학적 또는 단백질 바이오마커)는 일상적인 의료 행위에 사용하기 어렵습니다.

항사구체막 기저질환(항GBM 질환)은 드물고(인구 0.5~1/백만) 중증 질환으로 빠르게 진행하는 사구체신염, 폐출혈 및 항GBM 항체의 존재를 특징으로 하며, 이 조건의 합리적(100%) 및 특정(92-100%) .

우리 내과에서는 활성 SLE와 관련된 Goodpasture 사구체신염의 한 사례가 보고되었으며, 문헌에서 데이터를 검색한 후 다음 연구에 주목합니다.

• SLE에서 폐출혈 및 항 GBM 양성 사례 또는 폐-신장 증후군으로 제시된 항 GBM 질환 및 LN 사례와 같은 일부 유사한 사례가 보고되었습니다.
• 2006년 중국 코호트 연구에서는 SLE 환자의 혈청 샘플에서 항-GBM 항체의 증가된 유병률을 강조했습니다(ELISA 방법을 사용한 14명의 양성/157명의 환자(8.9%)). 더욱이 양성 항-GMB 항체를 가진 모든 환자는 LN과 더 심각한 SLE(더 많은 빈혈, 폐출혈 포함)를 가졌습니다. 그들은 또한 더 중요한 신장 질환을 앓았습니다. 사실, 조직학적 기준에서 10/14은 괴사성 초승달 모양의 사구체신염 병변이 있었고 5/14는 Goodpasture 질병의 실제 진단을 받았습니다.

• 우리는 또한 일부 저자가 이미 이 연관성의 병인을 연구했다는 점에 주목합니다(면역학적 설명, 유전학 링크 여부).

  3. 주요 가설: 이러한 결과에 기초하여 우리는 양성 순환 항-GBM 항체의 검출이 SLE 추적 환자에서 더 자주 양성일 수 있고(일반 인구보다) LN에 대한 흥미로운 스크리닝 바이오마커가 될 수 있다고 의심합니다.

  4. 목표 첫 번째 목표: 2개의 SLE 환자 그룹(루푸스 신염이 있는 그룹과 없는 그룹)을 기반으로 LN이 있는 SLE 환자에서 더 높은 비율을 기대하면서 각 그룹에서 양성 항-GBM 항체의 비율을 비교하고자 합니다.

두 번째 목표: 이 SLE 집단에서 임상적 측면, 혈청학적 특징 및 신장 특성에서 양성 항-GBM 환자를 연구합니다.

5. 재료 및 방법 우리는 Upper Rhine의 Lupus Biobank(LBBR 프로젝트)의 혈청 샘플과 건강한 자발적 헌혈자(대조군)의 혈청 샘플을 기반으로 한 후향적 분석 횡단 제어 연구를 제안합니다.

LBBR Lupus Biobank의 사용과 관련하여 우리 프로젝트는 이미 과학위원회에서 승인되었습니다.

그룹 무작위 배정 후 저온 보존된 SLE 혈청 샘플은 스트라스부르 바이오뱅크에서 항 GBM 테스트를 수행하기 위해 랭스 대학 병원 센터의 면역학 실험실 부서로 전문 운송 서비스를 통해 전송됩니다.

건강한 혈청 샘플 모집과 관련하여 랭스 지역 혈액 센터는 자발적인 헌혈자에게 참여를 체계적으로 제안합니다. 동의하는 경우 연구에 대한 확장된 정보를 받게 되며 서면 동의 후 튜브 샘플을 수집합니다.

6. 모집단 통계 계산 결과 200 SLE 혈청이 필요했습니다(각 그룹당 100명의 환자). 따라서, 우리는 루푸스 신염이 없는 루푸스 바이오뱅크 LBBR 환자의 혈청 샘플 100개와 전신성 홍반성 루푸스 및 루푸스 신염 환자의 혈청 샘플 100개를 사용할 것입니다.

또한 자발적 헌혈자의 혈청 샘플 100개를 사용할 것입니다.

7. 실험 프로젝트 혈청 내 Anti-GBM 항체 검출은 상용 테스트 키트를 사용하여 자동화된 화학발광 방법으로 수행됩니다. 양성인 경우 동일한 혈청을 두 번째로 검사하여 결과를 확인한 다음 BIOCHIP 슬라이드의 반응 영역을 포함하는 영장류 신장의 동결 절편에서 간접 면역 형광법(IIF)을 사용하는 다른 방법으로 제어합니다(참조 방법).

면역학 실험실 부서에 따르면 모든 테스트를 수행하려면 환자당 600μl의 혈청이 필요합니다. 제조자의 지시에 따르면, 화학발광 방법에서 양성에 대한 최적의 컷오프 값은 20CU/mL로 설정될 것입니다.

8. 데이터 분석 1차 종점: 양성 항-MBG 항체의 비율은 Chi-2 테스트 또는 Fisher의 정확한 테스트(테스트 유효성 조건에 따라 다름)에 의해 각 그룹(루푸스 신염 유무에 관계없이)에서 추정됩니다.

2차 종점: 항-GBM 양성 환자의 임상적, 혈청학적 및 신장 특징은 각 변수의 분포에 맞게 조정된 테스트를 사용하여 음성과 비교됩니다.

9. 기대효과 및 향후 전망

• 우리는 SLE 대조군과 건강한 대조군에 비해 LN 환자에서 양성 순환 항-GBM 항체의 빈도가 더 높을 것으로 예상합니다.
• 이 연구가 긍정적인지 여부에 관계없이 또 다른 대규모 연구는 LN의 예측 바이오마커 및 SLE의 예후 바이오마커로서 항-GBM 항체의 관심을 보여줄 수 있습니다.