Detecção de Anticorpos Anti-Membrana Basal Glomerular (Anti-GBM): um Biomarcador Promissor para Nefrite Lúpica (LN)? (GOODLUPUS)

Introdução e contexto:

Glomerulonefrite e doenças auto-imunes são frequentemente associadas. A nefrite lúpica (NL) é uma das principais manifestações clínicas do lúpus eritematoso sistêmico (LES) e tem grande impacto no prognóstico. Esta complicação é um verdadeiro desafio para os médicos devido ao início insidioso e sem recaídas previsíveis. O uso de biomarcadores é, portanto, essencial, mas biomarcadores convencionais, como proteinúria, taxa de filtração glomerular, sedimentos urinários, anticorpos anti-dsDNA e níveis de complemento, têm baixa sensibilidade e baixa especificidade para prever a ocorrência de NL, e novos biomarcadores mais confiáveis ​​(como genética, epigenética ou biomarcadores de proteínas) são difíceis de usar na prática médica diária , .

A doença anti-membrana basal glomerular (doença anti-GBM) é uma doença rara (0,5 a 1/milhões de habitantes, ) e grave , caracterizada por glomerulonefrite rapidamente progressiva, hemorragia pulmonar e presença de anticorpos anti-GBM, que são altamente sensível (100%) e específico (92-100%) desta condição.

No nosso departamento de medicina interna, foi relatado um caso de glomerulonefrite de Goodpasture associado a um LES ativo, e depois de pesquisar dados na literatura, observamos os seguintes estudos:

• alguns casos semelhantes foram relatados, como um caso de hemorragia pulmonar e anti-GBM positivo no LES, ou um caso de doença anti-GBM e NL apresentando-se como síndrome pulmonar-renal.
• Em 2006, um estudo de coorte chinês destacou uma prevalência elevada de anticorpos anti-GBM, em amostras de soro de pacientes com LES (14 positivos/157 pacientes (8,9%) com o método ELISA). Além disso, todos os pacientes com anticorpos anti-GMB positivos tinham NL e um LES mais grave (com mais anemias, hemorragia pulmonar). Eles também sofriam de uma doença renal mais importante. De fato, em critérios histológicos, 10/14 apresentavam lesões de glomerulonefrite crescêntica necrotizante e 5/14 apresentavam diagnóstico real de doença de Goodpasture.

• Notamos também que alguns autores já estudaram a patogênese dessa associação (sejam explicações imunológicas , ligações genéticas , ).

  3. Hipótese principal: Com base nesses achados, suspeitamos que a detecção de anticorpos anti-GBM circulantes positivos pode ser mais frequentemente positiva em pacientes com LES acompanhados (do que na população em geral) e que pode ser um biomarcador de triagem interessante para NL.

  4. Objetivos Primeiro objetivo: com base em 2 grupos de pacientes com LES (um com nefrite lúpica e outro sem nefrite lúpica), gostaríamos de comparar a proporção de anticorpos anti-GBM positivos em cada grupo, esperando uma taxa maior em pacientes com LES com NL.

Segundo objetivo: estudar pacientes anti-GBM positivos em seus aspectos clínicos, sorológicos e renais, nesta população com LES.

5. Materiais e métodos Sugerimos um estudo retrospectivo analítico transversal controlado, baseado em amostras de soro do Lupus Biobank of Upper Rhine (projeto LBBR) e em amostras de soro de doadores de sangue voluntários saudáveis ​​(grupo controle).

Com relação ao uso do LBBR Lupus Biobank, nosso projeto já foi aceito pelo comitê científico.

Após a randomização dos grupos, as amostras de soro de LES crioconservadas serão transferidas por serviço de transporte especializado, do biobanco de Strasbourg, para o departamento de laboratório de imunologia do Reims University Hospital center, para realização de testes anti-GBM.

No que diz respeito ao recrutamento de amostras de soro saudável, o Centro Regional de Sangue de Reims irá sistematicamente sugerir a participação de doadores de sangue voluntários. Se concordarem, receberão uma ampla informação sobre o estudo e, após consentimento por escrito, uma amostra de tubo será coletada.

6. População O cálculo estatístico levou à necessidade de 200 soros de LES (100 pacientes em cada grupo). Assim, usaremos: 100 amostras de soro provenientes de pacientes LBBR do biobanco lúpico sem nefrite lúpica e 100 amostras de soro de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico e nefrite lúpica.

Também usaremos 100 amostras de soro de doadores voluntários de sangue.

7. Projeto experimental A detecção de anticorpos anti-GBM em soros será realizada por um método quimioluminescente automatizado, utilizando um kit de teste comercial. Em caso de positividade, o mesmo soro será testado uma segunda vez para confirmar o resultado, e então controlado por outro método usando imunofluorescência indireta (IFI) em cortes congelados de rim de primata, cobrindo as áreas de reação de uma lâmina BIOCHIP (método de referência).

De acordo com nosso departamento de laboratório de imunologia, precisamos de 600μl de soro por paciente para poder realizar todos os testes. De acordo com as instruções do fabricante, o valor de corte ideal para positividade no método de quimioluminescência será fixado em 20CU/mL.

8. Análise dos dados Endpoint primário: proporção de anticorpos anti-MBG positivos, será estimada em cada grupo (com e sem nefrite lúpica) por um teste Chi-2 ou um teste exato de Fisher (dependendo das condições de validade do teste).

Endpoint secundário: características clínicas, sorológicas e renais de pacientes anti-GBM positivos serão comparadas com negativas, por meio de testes adaptados à distribuição de cada variável.

9. Resultados esperados e perspectivas futuras

• Esperamos uma frequência maior de anticorpos anti-GBM circulantes positivos em pacientes com NL em comparação com o grupo controle com LES e com o grupo controle saudável.
• Se esta pesquisa foi positiva, outro estudo maior poderia mostrar o interesse dos anticorpos anti-GBM como um biomarcador preditivo de NL e como um biomarcador prognóstico de LES.