Detektering av anti-glomerulära basalmembranantikroppar (Anti-GBM): en lovande biomarkör för lupus nefrit (LN)? (GOODLUPUS)

Inledning och sammanhang:

Glomerulonefrit och autoimmuna sjukdomar är ofta associerade. Lupus nefrit (LN) är en av de viktigaste kliniska manifestationerna av systemisk lupus erythematosus (SLE) som har en allvarlig inverkan på prognosen. Denna komplikation är en verklig utmaning för läkare på grund av smygande debut och inga förutsägbara återfall. Användning av biomarkörer är därför väsentlig, men konventionella biomarkörer som proteinuri, glomerulär filtrationshastighet, urinsediment, anti-dsDNA-antikroppar och komplementnivåer, har dålig känslighet och låg specificitet för att förutsäga LN-förekomst, och nya mer pålitliga biomarkörer (som genetiska, epigenetiska) eller proteinbiomarkörer) är svåra att använda för daglig medicinsk praxis.

Anti-glomerulär membranbasal sjukdom (anti-GBM-sjukdom) är en sällsynt (0,5 till 1/miljoner invånare) och allvarlig sjukdom, kännetecknad av snabbt progressiv glomerulonefrit, lungblödning och förekomsten av anti-GBM-antikroppar, som är mycket högst förnuftig (100%) och specifik (92-100%) av detta tillstånd.

På vår avdelning för internmedicin har ett fall av Goodpasture glomerulonefrit associerat med en aktiv SLE rapporterats, och efter att ha sökt data i litteraturen noterar vi följande studier:

• några liknande fall rapporterades såsom ett fall av lungblödning och positiv anti-GBM vid SLE, eller ett fall av anti-GBM-sjukdom och LN som presenterades som pulmonellt-renalt syndrom.
• 2006 visade en kinesisk kohortstudie en förhöjd prevalens av anti-GBM-antikroppar, i serumprover från patienter med SLE (14 positiva/157 patienter (8,9%) med ELISA-metoden). Dessutom hade varje patient med positiva anti-GMB-antikroppar LN och en svårare SLE (med mer anemier, lungblödning). De led också av en viktigare njursjukdom. Faktum är att i histologiska kriterier hade 10/14 nekrotiserande halvmåneglomerulonefritskador och 5/14 hade en riktig diagnos av Goodpasture-sjukdomen.

• Vi noterar också att vissa författare redan har studerat patogenesen av denna förening (oavsett om immunologiska förklaringar, genetiska länkar, ).

  3. Huvudhypotes: Baserat på dessa fynd misstänker vi att detektion av positiva cirkulerande anti-GBM-antikroppar kan vara mer frekvent positiva hos SLE-följda patienter (än i den allmänna befolkningen) och att det kan vara en intressant screeningbiomarkör för LN.

  4. Mål Första målet: baserat på 2 SLE-patientgrupper (en med lupusnefrit och en annan utan) skulle vi vilja jämföra förhållandet mellan positiva anti-GBM-antikroppar i varje grupp, och förväntar oss en högre frekvens hos SLE-patienter med LN.

Andra mål: att studera positiva anti-GBM-patienter i deras kliniska aspekter, serologiska egenskaper och njuregenskaper, i denna SLE-population.

5. Material och metoder Vi föreslår en retrospektiv analytisk transversal kontrollerad studie, baserad på serumprover från Lupus Biobank of Upper Rhen (LBBR-projektet), och på serumprover från friska frivilliga blodgivare (kontrollgrupp).

När det gäller användningen av LBBR Lupus Biobank har vårt projekt redan godkänts av den vetenskapliga kommittén.

Efter grupprandomisering kommer Cryo-konserverade SLE-serumprover att överföras av specialiserad transportörstjänst, från Strasbourgs biobank, till immunologiska laboratorieavdelningen i Reims universitetssjukhuscenter, för att utföra anti-GBM-tester.

När det gäller rekrytering av friska serumprover kommer det regionala blodcentret i Reims systematiskt att föreslå frivilliga blodgivare att delta. Om de samtycker kommer de att få en utökad information om studien och efter skriftligt medgivande kommer ett rörprov att samlas in.

6. Population Den statistiska beräkningen ledde till behovet av 200 SLE-sera (100 patienter i varje grupp). Således kommer vi att använda: 100 serumprover från lupus biobank LBBR patienter utan lupus nefrit, och 100 serumprover från patienter med systemisk lupus erythematosus och lupus nefrit.

Vi kommer också att använda 100 serumprover från frivilliga blodgivare.

7. Experimentprojekt Detektering av anti-GBM-antikroppar i serum kommer att utföras med en automatiserad kemiluminescensmetod, med användning av ett kommersiellt testkit. I händelse av positivitet kommer samma serum att testas andra gången för att bekräfta resultatet och kontrolleras sedan med en annan metod med indirekt immunfluorescens (IIF) i frusna sektioner av primatens njure, som täcker reaktionsområdena på ett BIOCHIP-objektglas (referensmetod).

Enligt vår immunologiska laboratorieavdelning behöver vi 600μl serum per patient för att kunna utföra alla tester. Enligt tillverkarens instruktioner kommer det optimala gränsvärdet för positivitet i kemiluminescensmetoden att sättas till 20CU/ml.

8. Dataanalys Primärt effektmått: andel positiva anti-MBG-antikroppar kommer att uppskattas i varje grupp (med och utan lupusnefrit) genom ett Chi-2-test eller ett exakt test av Fisher (beroende på testets validitetsförhållanden).

Sekundärt effektmått: kliniska, serologiska och renala egenskaper hos patienter med anti-GBM-positiva, kommer att jämföras med negativa, med hjälp av tester anpassade till fördelningen av varje variabel.

9. Förväntade resultat och framtidsutsikter

• Vi förväntar oss en högre frekvens av positiva cirkulerande anti-GBM-antikroppar hos patienter med LN jämfört med SLE-kontrollgruppen och frisk kontrollgrupp.
• Huruvida denna forskning var positiv, kan en annan större studie visa intresset för anti-GBM-antikroppar som en prediktiv biomarkör för LN och som en prognostisk biomarkör för SLE.