Detekce protilátek proti glomerulární bazální membráně (Anti-GBM): slibný biomarker lupusové nefritidy (LN)? (GOODLUPUS)

Úvod a kontext:

Glomerulonefritida a autoimunitní onemocnění jsou často spojeny. Lupusová nefritida (LN) je jedním z hlavních klinických projevů systémového lupus erythematodes (SLE), který má závažný dopad na prognózu. Tato komplikace je pro klinické lékaře skutečnou výzvou, protože má zákeřný začátek a žádné předvídatelné relapsy. Použití biomarkerů je proto nezbytné, ale konvenční biomarkery, jako je proteinurie, rychlost glomerulární filtrace, močové sedimenty, anti-dsDNA protilátky a hladiny komplementu, mají špatnou citlivost a nízkou specificitu pro predikci výskytu LN a nové spolehlivější biomarkery (jako jsou genetické, epigenetické nebo proteinové biomarkery) jsou obtížně použitelné pro každodenní lékařskou praxi, .

Antiglomerulární onemocnění bazální membrány (anti-GBM onemocnění) je vzácné (0,5 až 1/mil. obyvatel) a závažné onemocnění, charakterizované rychle progredující glomerulonefritidou, plicním krvácením a přítomností anti-GBM protilátek, které jsou vysoce senzitivní (100 %) a specifický (92-100 %) tohoto stavu.

Na našem interním oddělení byl hlášen jeden případ glomerulonefritidy Goodpasture související s aktivním SLE a po vyhledání údajů v literatuře jsme zaznamenali následující studie:

• byly hlášeny některé podobné případy, jako je případ plicního krvácení a pozitivní anti-GBM u SLE nebo případ onemocnění anti-GBM a LN projevující se jako plicně-renální syndrom.
• V roce 2006 čínská kohortová studie upozornila na zvýšenou prevalenci anti-GBM protilátek ve vzorcích séra pacientů se SLE (14 pozitivních/157 pacientů (8,9 %) metodou ELISA). Navíc každý pacient s pozitivními anti-GMB protilátkami měl LN a závažnější SLE (s více anémií, plicním krvácením). Trpěli také závažnějším onemocněním ledvin. Ve skutečnosti, v histologických kritériích, 10/14 mělo nekrotizující srpkovité glomerulonefritidy a 5/14 mělo skutečnou diagnózu Goodpastureovy choroby.

• Poznamenáváme také, že někteří autoři již studovali patogenezi této asociace (ať už imunologická vysvětlení , genetické vazby , ).

  3. Hlavní hypotéza: Na základě těchto zjištění máme podezření, že detekce pozitivních cirkulujících anti-GBM protilátek může být častěji pozitivní u pacientů se SLE (než v běžné populaci) a že by mohla být zajímavým screeningovým biomarkerem LN.

  4. Cíle První cíl: na základě 2 skupin pacientů se SLE (jedna s lupusovou nefritidou a druhá bez ní) bychom rádi porovnali poměr pozitivních anti-GBM protilátek v každé skupině, přičemž očekáváme vyšší míru u pacientů se SLE s LN.

Druhý cíl: studovat pozitivní anti-GBM pacienty z hlediska jejich klinických aspektů, sérologických vlastností a renálních charakteristik v této populaci SLE.

5. Materiály a metody Navrhujeme retrospektivní analytickou transverzální kontrolovanou studii založenou na vzorcích séra z Lupus Biobank of Upper Rhine (projekt LBBR) a na vzorcích séra od zdravých dobrovolných dárců krve (kontrolní skupina).

Co se týče využití LBBR Lupus Biobank, náš projekt již byl přijat vědeckou komisí.

Po skupinové randomizaci budou vzorky kryokonzervovaného séra SLE přeneseny specializovanou přepravní službou ze Štrasburské biobanky do oddělení imunologické laboratoře v centru Fakultní nemocnice v Remeši k provedení anti-GBM testů.

Pokud jde o nábor zdravých vzorků séra, Regionální krevní centrum v Remeši bude dobrovolným dárcům krve systematicky navrhovat účast. Pokud budou souhlasit, obdrží rozšířenou informaci o studii a po písemném souhlasu bude odebrán vzorek zkumavky.

6. Populace Statistický výpočet vedl k potřebě 200 sér SLE (100 pacientů v každé skupině). Použijeme tedy: 100 vzorků séra od pacientů s lupusovou biobankou LBBR bez lupusové nefritidy a 100 vzorků séra pacientů se systémovým lupus erythematodes a lupus nefritidou.

Využijeme také 100 vzorků séra dobrovolných dárců krve.

7. Experimentální projekt Detekce anti-GBM protilátek v séru bude provedena automatizovanou chemiluminiscenční metodou za použití komerční testovací soupravy. V případě pozitivity bude stejné sérum testováno podruhé, aby se potvrdil výsledek, a poté kontrolováno jinou metodou využívající nepřímou imunofluorescenci (IIF) ve zmrazených řezech ledvin primátů, pokrývajících reakční oblasti sklíčka BIOCHIP (referenční metoda).

Podle našeho oddělení imunologické laboratoře potřebujeme 600μl séra na pacienta, abychom mohli provést všechna vyšetření. Optimální cut-off hodnota pro pozitivitu v chemiluminiscenční metodě bude dle návodu výrobce nastavena na 20CU/ml.

8. Analýza dat Primární cílový bod: podíl pozitivních anti-MBG protilátek bude odhadnut v každé skupině (s lupus nefritidou a bez ní) pomocí Chi-2 testu nebo přesného Fisherova testu (v závislosti na podmínkách platnosti testu).

Sekundární cílový parametr: klinické, sérologické a renální rysy anti-GBM pozitivních pacientů budou porovnány s negativními pomocí testů přizpůsobených distribuci každé proměnné.

9. Očekávané výsledky a vyhlídky do budoucna

• Očekáváme vyšší frekvenci pozitivních cirkulujících anti-GBM protilátek u pacientů s LN ve srovnání s kontrolní skupinou SLE a zdravou kontrolní skupinou.
• Ať už byl tento výzkum pozitivní, další větší studie by mohla ukázat zájem o anti-GBM protilátky jako prediktivní biomarker LN a jako prognostický biomarker SLE.