Wykrywanie przeciwciał przeciwko błonie podstawnej kłębuszków nerkowych (anty-GBM): obiecujący biomarker toczniowego zapalenia nerek (LN)? (GOODLUPUS)

Wprowadzenie i kontekst:

Kłębuszkowe zapalenie nerek i choroby autoimmunologiczne są często powiązane. Toczniowe zapalenie nerek (LN) jest jednym z głównych objawów klinicznych tocznia rumieniowatego układowego (SLE), który ma poważny wpływ na rokowanie. To powikłanie jest prawdziwym wyzwaniem dla klinicystów ze względu na podstępny początek i brak przewidywalnych nawrotów. Stosowanie biomarkerów jest zatem niezbędne, ale konwencjonalne biomarkery, takie jak białkomocz, wskaźnik przesączania kłębuszkowego, osad moczu, przeciwciała anty-dsDNA i poziomy dopełniacza, mają słabą czułość i niską specyficzność w przewidywaniu występowania LN, a nowe, bardziej wiarygodne biomarkery (takie jak genetyczne, epigenetyczne lub biomarkery białkowe) są trudne do wykorzystania w codziennej praktyce lekarskiej.

Choroba podstawna błony kłębuszkowej (choroba anty-GBM) jest rzadką (0,5 do 1/milion mieszkańców) i ciężką chorobą, charakteryzującą się szybko postępującym zapaleniem kłębuszków nerkowych, krwotokiem płucnym i obecnością przeciwciał anty-GBM, które są wysoce sensowna (100%) i specyficzna (92-100%) tego stanu.

W naszym oddziale chorób wewnętrznych zgłoszono jeden przypadek kłębuszkowego zapalenia nerek Goodpasture związanego z aktywnym SLE, a po przeszukaniu danych w literaturze odnotowujemy następujące badania:

• zgłoszono kilka podobnych przypadków, takich jak przypadek krwotoku płucnego i obecności przeciwciał anty-GBM w SLE lub przypadek choroby anty-GBM i LN objawiającej się zespołem płucno-nerkowym.
• W 2006 roku chińskie badanie kohortowe wykazało podwyższoną częstość występowania przeciwciał anty-GBM w próbkach surowicy od pacjentów z SLE (14 pozytywnych/157 pacjentów (8,9%) metodą ELISA). Ponadto każdy pacjent z dodatnimi przeciwciałami anty-GMB miał LN i cięższy SLE (z większą liczbą niedokrwistości, krwotoku płucnego). Cierpieli także na poważniejszą chorobę nerek. W rzeczywistości, według kryteriów histologicznych, 10/14 miało martwicze zmiany półksiężycowego zapalenia kłębuszków nerkowych, a 5/14 miało prawdziwą diagnozę choroby Goodpasture.

• Zauważamy również, że niektórzy autorzy badali już patogenezę tego związku (czy wyjaśnienia immunologiczne, powiązania genetyczne,).

  3. Hipoteza główna: Na podstawie tych ustaleń podejrzewamy, że wykrywanie dodatnich krążących przeciwciał anty-GBM może być częściej dodatnie u pacjentów z obserwowanym SLE (niż w populacji ogólnej) i że może to być interesujący biomarker przesiewowy dla LN.

  4. Cele Pierwszy cel: w oparciu o 2 grupy pacjentów z SLE (jedna z toczniowym zapaleniem nerek i druga bez niego) chcielibyśmy porównać stosunek pozytywnych przeciwciał anty-GBM w każdej grupie, spodziewając się wyższego wskaźnika u pacjentów z SLE z LN.

Drugi cel: studiowanie pacjentów z pozytywnym wynikiem anty-GBM w ich aspektach klinicznych, cechach serologicznych i cechach nerek w tej populacji SLE.

5. Materiały i metody Sugerujemy retrospektywne, analityczne, przekrojowe badanie kontrolowane, oparte na próbkach surowicy z Lupus Biobank of Upper Rhine (projekt LBBR) oraz na próbkach surowicy od zdrowych dobrowolnych dawców krwi (grupa kontrolna).

Jeśli chodzi o wykorzystanie LBBR Lupus Biobank, nasz projekt został już zaakceptowany przez komitet naukowy.

Po randomizacji grup, kriokonserwowane próbki surowicy SLE zostaną przetransportowane specjalistycznym transporterem z biobanku w Strasburgu do laboratorium immunologicznego w ośrodku szpitala uniwersyteckiego w Reims w celu wykonania testów anty-GBM.

Jeśli chodzi o rekrutację próbek zdrowej surowicy, Regionalne Centrum Krwiodawstwa w Reims będzie systematycznie sugerować udział dobrowolnym dawcom krwi. Jeśli wyrażą zgodę, otrzymają rozszerzoną informację o badaniu, a po wyrażeniu pisemnej zgody zostanie pobrana próbka do probówki.

6. Populacja Obliczenia statystyczne doprowadziły do ​​zapotrzebowania na 200 surowic SLE (po 100 pacjentów w każdej grupie). W związku z tym wykorzystamy: 100 próbek surowicy pochodzących od pacjentów LBBR biobanku tocznia bez toczniowego zapalenia nerek oraz 100 próbek surowicy pacjentów z toczniem rumieniowatym układowym i toczniowym zapaleniem nerek.

Wykorzystamy również 100 próbek surowicy od krwiodawców.

7. Projekt eksperymentalny Wykrywanie przeciwciał anty-GBM w surowicach zostanie przeprowadzone zautomatyzowaną metodą chemiluminescencyjną z wykorzystaniem komercyjnego zestawu testowego. W przypadku pozytywnego wyniku ta sama surowica zostanie przebadana po raz drugi w celu potwierdzenia wyniku, a następnie kontrolowana inną metodą z wykorzystaniem immunofluorescencji pośredniej (IIF) w zamrożonych skrawkach nerki naczelnych, pokrywając obszary reakcji szkiełka BIOCHIP (metoda referencyjna).

Według naszego działu laboratorium immunologicznego potrzebujemy 600 μl surowicy na pacjenta, aby móc wykonać wszystkie testy. Zgodnie z zaleceniami producenta optymalna wartość odcięcia dla dodatniego wyniku w metodzie chemiluminescencyjnej zostanie ustalona na poziomie 20CU/mL.

8. Analiza danych Pierwszorzędowy punkt końcowy: odsetek dodatnich przeciwciał anty-MBG, zostanie oszacowany w każdej grupie (z toczniowym zapaleniem nerek i bez) za pomocą testu Chi-2 lub dokładnego testu Fishera (w zależności od warunków ważności testu).

Drugorzędowy punkt końcowy: cechy kliniczne, serologiczne i nerkowe pacjentów z dodatnim wynikiem anty-GBM zostaną porównane z ujemnymi, przy użyciu testów dostosowanych do rozkładu każdej zmiennej.

9. Oczekiwane wyniki i perspektywy na przyszłość

• Spodziewamy się wyższej częstości dodatnich krążących przeciwciał anty-GBM u pacjentów z LN w porównaniu z grupą kontrolną SLE i grupą kontrolną osób zdrowych.
• Czy te badania były pozytywne, inne większe badanie mogłoby wykazać zainteresowanie przeciwciał anty-GBM jako predykcyjnego biomarkera LN i jako prognostycznego biomarkera SLE.