Обнаружение антител к базальной мембране клубочков (анти-GBM): многообещающий биомаркер волчаночного нефрита (LN)? (GOODLUPUS)

Введение и контекст:

Часто сочетаются гломерулонефрит и аутоиммунные заболевания. Волчаночный нефрит (ВН) является одним из основных клинических проявлений системной красной волчанки (СКВ), оказывающим серьезное влияние на прогноз. Это осложнение представляет собой настоящую проблему для клиницистов из-за коварного начала и отсутствия предсказуемых рецидивов. Поэтому использование биомаркеров необходимо, но традиционные биомаркеры, такие как протеинурия, скорость клубочковой фильтрации, осадки мочи, антитела к дцДНК и уровни комплемента, имеют низкую чувствительность и низкую специфичность для прогнозирования возникновения ВН, а новые, более надежные биомаркеры (такие как генетические, эпигенетические или белковые биомаркеры) трудно использовать в повседневной медицинской практике.

Заболевание базальной мембраны клубочков (анти-ГБМ) является редким (от 0,5 до 1/млн жителей) и тяжелым заболеванием, характеризующимся быстропрогрессирующим гломерулонефритом, легочными кровотечениями и наличием анти-ГБМ-антител, которые сильно чувствительное (100%) и конкретное (92-100%) этого состояния.

В нашем отделении внутренних болезней был зарегистрирован один случай гломерулонефрита Гудпасчера, связанного с активной СКВ, и после поиска данных в литературе мы отмечаем следующие исследования:

• сообщалось о некоторых подобных случаях, таких как случай легочного кровотечения и положительный анти-ГБМ при СКВ или случай анти-ГБМ заболевания и ВН, проявляющийся в виде легочно-почечного синдрома.
• В 2006 году китайское когортное исследование выявило повышенную распространенность антител против ГБМ в образцах сыворотки пациентов с СКВ (14 положительных результатов на 157 пациентов (8,9%) с помощью метода ИФА). Более того, каждый пациент с положительными антителами к GMB имел ВН и более тяжелую форму СКВ (с большим количеством анемий, легочных кровотечений). Они также страдали от более серьезного заболевания почек. Фактически, по гистологическим критериям у 10 из 14 были очаги некротизирующего серповидного гломерулонефрита, а у 5 из 14 был реальный диагноз болезни Гудпасчера.

• Отметим также, что некоторые авторы уже изучали патогенез этой ассоциации (будь то иммунологические объяснения, генетические связи и т. д.).

  3. Основная гипотеза. Основываясь на этих данных, мы подозреваем, что обнаружение положительных циркулирующих антител против ГБМ может быть более частым положительным результатом у пациентов с СКВ (чем в общей популяции) и что это может быть интересным скрининговым биомаркером для ВН.

  4. Цели Первая цель: на основе 2 групп пациентов с СКВ (одна с волчаночным нефритом и другая без него) мы хотели бы сравнить соотношение положительных анти-GBM антител в каждой группе, ожидая более высокую частоту у пациентов с СКВ и ВН.

Вторая цель: изучить пациентов с положительной анти-GBM в их клинических аспектах, серологических особенностях и почечных характеристиках в этой популяции SLE.

5. Материалы и методы Мы предлагаем ретроспективное аналитическое трансверсальное контролируемое исследование, основанное на образцах сыворотки из биобанка волчанки Верхнего Рейна (проект LBBR) и на образцах сыворотки от здоровых добровольных доноров крови (контрольная группа).

Что касается использования LBBR Lupus Biobank, наш проект уже одобрен научным комитетом.

После групповой рандомизации образцы сыворотки криоконсервированных больных СКВ будут доставлены специализированной транспортной службой из Страсбургского биобанка в лабораторию иммунологии в университетском госпитале Реймса для проведения тестов против ГБМ.

Что касается набора здоровых образцов сыворотки, Региональный центр крови Реймса будет систематически предлагать добровольным донорам крови принять участие. Если они согласятся, они получат расширенную информацию об исследовании, и после письменного согласия будет взят образец из пробирки.

6. Популяция Статистические расчеты привели к потребности в 200 сыворотках от СКВ (по 100 пациентов в каждой группе). Таким образом, мы будем использовать: 100 образцов сыворотки, поступающих из биобанка волчанки пациентов LBBR без волчаночного нефрита, и 100 образцов сыворотки пациентов с системной красной волчанкой и волчаночным нефритом.

Мы также будем использовать 100 образцов сыворотки добровольных доноров крови.

7. Экспериментальный проект Выявление антител к ГБМ в сыворотке крови будет осуществляться автоматизированным хемилюминесцентным методом с использованием коммерческого набора для тестирования. В случае положительного результата та же сыворотка будет протестирована второй раз для подтверждения результата, а затем будет проверена другим методом с использованием непрямой иммунофлуоресценции (IIF) в замороженных срезах почек приматов, покрывающих реакционные области предметного стекла BIOCHIP (эталонный метод).

По данным нашего отдела иммунологической лаборатории, нам нужно 600 мкл сыворотки на пациента, чтобы провести все тесты. Согласно инструкции производителя, оптимальное пороговое значение для положительного результата в методе хемилюминесценции будет установлено на уровне 20 CU/мл.

8. Анализ данных Первичная конечная точка: доля положительных анти-MBG-антител будет оцениваться в каждой группе (с люпус-нефритом и без него) с помощью теста Хи-2 или точного теста Фишера (в зависимости от условий достоверности теста).

Вторичная конечная точка: клинические, серологические и почечные особенности анти-GBM-положительных пациентов будут сравниваться с отрицательными с использованием тестов, адаптированных к распределению каждой переменной.

9. Ожидаемые результаты и перспективы на будущее

• Мы ожидаем более высокую частоту положительных циркулирующих анти-GBM антител у пациентов с ВН по сравнению с контрольной группой СКВ и контрольной группой здоровых людей.
• Независимо от того, было ли это исследование положительным, другое более крупное исследование могло бы показать интерес к антителам против GBM в качестве прогностического биомаркера ВН и в качестве прогностического биомаркера СКВ.