Anti-glomerulaaristen kellarikalvovasta-aineiden (Anti-GBM) havaitseminen: lupaava biomarkkeri lupus-nefriittiin (LN)? (GOODLUPUS)

Johdanto ja konteksti:

Glomerulonefriitti ja autoimmuunisairaudet liittyvät usein toisiinsa. Lupus nefriitti (LN) on yksi systeemisen lupus erythematosuksen (SLE) tärkeimmistä kliinisistä ilmenemismuodoista, jolla on vakava vaikutus ennusteeseen. Tämä komplikaatio on todellinen haaste kliinikoille, koska se alkaa salakavalasti, eikä ennustettavissa olevia pahenemisvaiheita ole. Biomarkkerien käyttö on siksi välttämätöntä, mutta tavanomaiset biomarkkerit, kuten proteinuria, glomerulusten suodatusnopeus, virtsan sedimentit, anti-dsDNA-vasta-aineet ja komplementtitasot, ovat huonosti herkkiä ja spesifisiä LN:n esiintymisen ennustamiseen, ja uudet luotettavammat biomarkkerit (kuten geneettiset, epigeneettiset tai proteiinien biomarkkereita) on vaikea käyttää päivittäisessä lääketieteellisessä käytännössä.

Anti-GBM-sairaus (anti-GBM-sairaus) on harvinainen (0,5-1/miljoonaa asukasta) ja vakava sairaus , jolle on ominaista nopeasti etenevä glomerulonefriitti, keuhkoverenvuoto ja anti-GBM-vasta-aineiden esiintyminen, jotka ovat erittäin järkevä (100 %) ja spesifinen (92-100 %) tälle tilalle .

Sisätautien osastollamme on raportoitu yksi aktiiviseen SLE:hen liittyvä Goodpasturen glomerulonefriittitapaus, ja tutkittuamme kirjallisuudesta saadut tiedot, panemme merkille seuraavat tutkimukset:

• joitakin samankaltaisia ​​tapauksia raportoitiin, kuten tapaus keuhkoverenvuoto ja positiivinen anti-GBM SLE:ssä tai tapaus anti-GBM-sairaudesta ja LN, joka esiintyi keuhko-munuaisoireyhtymänä.
• Vuonna 2006 kiinalainen kohorttitutkimus korosti anti-GBM-vasta-aineiden lisääntynyttä esiintyvyyttä SLE-potilaiden seeruminäytteissä (14 positiivista/157 potilasta (8,9 %) ELISA-menetelmällä). Lisäksi jokaisella potilaalla, jolla oli positiivisia anti-GMB-vasta-aineita, oli LN ja vakavampi SLE (jolla oli enemmän anemioita, keuhkoverenvuotoa). He kärsivät myös tärkeämmästä munuaissairaudesta. Itse asiassa histologisissa kriteereissä 10/14:llä oli nekrotisoivia puolikuun muotoisia glomerulonefriittivaurioita ja 5/14:llä oli todellinen Goodpasturen taudin diagnoosi.

• Huomaa myös, että jotkut kirjoittajat ovat jo tutkineet tämän yhdistyksen patogeneesiä (joko immunologisia selityksiä , geneettisiä linkkejä , ).

  3. Päähypoteesi: Näiden löydösten perusteella epäilemme, että positiivisten verenkierrossa olevien anti-GBM-vasta-aineiden havaitseminen saattaa olla useammin positiivista SLE-seurantapotilailla (kuin muussa populaatiossa) ja että se voisi olla mielenkiintoinen seulontabiomarkkeri LN:lle.

  4. Tavoitteet Ensimmäinen tavoite: perustuen kahteen SLE-potilasryhmään (toisella on lupus nefriitti ja toisessa ilman sitä) haluaisimme verrata positiivisten anti-GBM-vasta-aineiden suhdetta kussakin ryhmässä, odotettaessa korkeampaa määrää SLE-potilailla, joilla on LN.

Toinen tavoite: tutkia positiivisia anti-GBM-potilaita heidän kliinisissä piirteissään, serologisissa piirteissään ja munuaisominaisuuksissaan tässä SLE-populaatiossa.

5. Materiaalit ja menetelmät Suosittelemme retrospektiivistä analyyttistä transversaalista kontrolloitua tutkimusta, joka perustuu seeruminäytteisiin Ylä-Reinin Lupus Biobankista (LBBR-projekti) ja seeruminäytteisiin terveiltä vapaaehtoisilta verenluovuttajilta (kontrolliryhmä).

Mitä tulee LBBR Lupus Biobankin käyttöön, projektimme on jo hyväksynyt tiedekomitean.

Ryhmäsatunnaistamisen jälkeen kryokonservoidut SLE-seeruminäytteet siirretään Strasbourgin biopankista erikoistuneella kuljetuspalvelulla Reimsin yliopistollisen sairaalan keskuksen immunologian laboratorioosastolle suorittamaan anti-GBM-testejä.

Terveiden seeruminäytteiden rekrytoinnin osalta Reimsin alueellinen verikeskus ehdottaa järjestelmällisesti vapaaehtoisille verenluovuttajille osallistumista. Jos he suostuvat, he saavat laajennettua tietoa tutkimuksesta ja kirjallisen suostumuksen jälkeen otetaan putkinäyte.

6. Populaatio Tilastolaskelma johti 200 SLE-seerumin tarpeeseen (100 potilasta kussakin ryhmässä). Siten käytämme: 100 seeruminäytettä lupus biopankin LBBR-potilailta, joilla ei ole lupus nefriittiä, ja 100 seeruminäytettä potilailta, joilla on systeeminen lupus erythematosus ja lupus nefriitti.

Käytämme myös 100 vapaaehtoisten verenluovuttajien seeruminäytettä.

7. Kokeellinen projekti Anti-GBM-vasta-aineiden havaitseminen seerumeista suoritetaan automatisoidulla kemiluminesenssimenetelmällä käyttäen kaupallista testisarjaa. Jos positiivisuus on positiivinen, sama seerumi testataan toisen kerran tuloksen vahvistamiseksi, ja sitten kontrolloidaan toisella menetelmällä käyttämällä epäsuoraa immunofluoresenssia (IIF) kädellisen munuaisen jäädytetyissä osissa, jotka kattavat BIOCHIP-levyn reaktioalueet (vertailumenetelmä).

Immunologian laboratorioosastomme mukaan tarvitsemme 600 μl seerumia potilasta kohti voidaksemme suorittaa kaikki testit. Valmistajan ohjeen mukaan positiivisuuden optimaalinen raja-arvo kemiluminesenssimenetelmässä asetetaan arvoon 20CU/ml.

8. Tietojen analyysi Ensisijainen päätepiste: positiivisten anti-MBG-vasta-aineiden osuus arvioidaan kussakin ryhmässä (lupus nefriittiä tai ilman) Chi-2-testillä tai tarkalla Fisher-testillä (riippuen testin kelpoisuusolosuhteista).

Toissijainen päätepiste: anti-GBM-positiivisten potilaiden kliinisiä, serologisia ja munuaisominaisuuksia verrataan negatiivisiin testeihin, jotka on mukautettu kunkin muuttujan jakautumiseen.

9. Odotetut tulokset ja tulevaisuuden näkymät

• Odotamme positiivisten verenkierrossa olevien anti-GBM-vasta-aineiden lisääntyvän LN-potilailla verrattuna SLE-kontrolliryhmään ja terveisiin kontrolliryhmään.
• Olipa tämä tutkimus positiivinen, toinen suurempi tutkimus voisi osoittaa anti-GBM-vasta-aineiden kiinnostuksen LN: n ennustavana biomarkkerina ja SLE:n prognostisena biomarkkerina.