Påvisning af anti-glomerulære kældermembranantistoffer (Anti-GBM): en lovende biomarkør for lupus nefritis (LN)? (GOODLUPUS)

Introduktion og kontekst:

Glomerulonefritis og autoimmune sygdomme er ofte forbundet. Lupus nefritis (LN) er en af ​​de vigtigste kliniske manifestationer af systemisk lupus erythematosus (SLE), som har en alvorlig indvirkning på prognosen. Denne komplikation er en reel udfordring for klinikere på grund af snigende begyndelse og ingen forudsigelige tilbagefald. Brug af biomarkører er derfor essentiel, men konventionelle biomarkører såsom proteinuri, glomerulær filtrationshastighed, urinsedimenter, anti-dsDNA-antistoffer og komplementniveauer har dårlig følsomhed og lav specificitet til at forudsige LN-forekomst og nye mere pålidelige biomarkører (såsom genetiske, epigenetiske). eller proteinbiomarkører) er vanskelige at bruge til daglig medicinsk praksis.

Anti-glomerulære membranbasal sygdom (anti-GBM sygdom) er en sjælden (0,5 til 1/millioner af indbyggere) og alvorlig sygdom, karakteriseret ved hurtigt fremadskridende glomerulonefritis, lungeblødning og tilstedeværelsen af ​​anti-GBM antistoffer, som er meget fornuftig (100%) og specifik (92-100%) af denne tilstand.

I vores afdeling for intern medicin er der rapporteret ét tilfælde af Goodpasture glomerulonephritis forbundet med en aktiv SLE, og efter at have søgt data i litteraturen bemærker vi følgende undersøgelser:

• nogle lignende tilfælde blev rapporteret, såsom et tilfælde af pulmonal blødning og positiv anti-GBM i SLE, eller et tilfælde af anti-GBM sygdom og LN, der viser sig som pulmonal-renal syndrom.
• I 2006 fremhævede en kinesisk kohorteundersøgelse en forhøjet prævalens af anti-GBM-antistoffer i serumprøver fra patienter med SLE (14 positive/157 patienter (8,9%) med ELISA-metoden). Desuden havde hver patient med positive anti-GMB-antistoffer LN og en sværere SLE (med mere anæmi, lungeblødning). De led også af vigtigere nyresygdomme. Faktisk havde 10/14 i histologiske kriterier nekrotiserende halvmåneglomerulonefritis læsioner og 5/14 havde en reel diagnose af Goodpasture sygdom.

• Vi bemærker også, at nogle forfattere allerede har undersøgt patogenesen af ​​denne forening (uanset om immunologiske forklaringer, genetikforbindelser, ).

  3. Hovedhypotese: Baseret på disse fund har vi mistanke om, at påvisning af positive cirkulerende anti-GBM-antistoffer kan være hyppigere positiv hos SLE-efterfulgte patienter (end i den almindelige befolkning), og at det kunne være en interessant screeningsbiomarkør for LN.

  4. Mål Første målsætning: baseret på 2 SLE patientgrupper (en med lupus nefritis og en anden uden) vil vi gerne sammenligne forholdet mellem positive anti-GBM antistoffer i hver gruppe, idet vi forventer en højere rate hos SLE patienter med LN.

Andet mål: at studere positive anti-GBM-patienter i deres kliniske aspekter, serologiske egenskaber og nyrekarakteristika i denne SLE-population.

5. Materialer og metoder Vi foreslår en retrospektiv analytisk transversal kontrolleret undersøgelse, baseret på serumprøver fra Lupus Biobank of Upper Rhine (LBBR-projektet), og på serumprøver fra raske frivillige bloddonorer (kontrolgruppe).

Med hensyn til brugen af ​​LBBR Lupus Biobank er vores projekt allerede blevet accepteret af den videnskabelige komité.

Efter grupperandomisering vil Cryo-konserverede SLE-serumprøver blive overført af specialiseret transportørtjeneste, fra Strasbourg biobank, til immunologisk laboratorieafdeling i Reims Universitetshospitalcenter for at udføre anti-GBM-tests.

Hvad angår rekruttering af sunde serumprøver, vil det regionale blodcenter i Reims systematisk foreslå frivillige bloddonorer at deltage. Hvis de er enige, vil de modtage en udvidet information om undersøgelsen, og efter skriftligt samtykke vil der blive indsamlet en rørprøve.

6. Population Den statistiske beregning førte til behovet for 200 SLE-sera (100 patienter i hver gruppe). Vi vil således bruge: 100 serumprøver fra lupus biobank LBBR patienter uden lupus nefritis og 100 serumprøver fra patienter med systemisk lupus erythematosus og lupus nefritis.

Vi vil også bruge 100 serumprøver af frivillige bloddonorer.

7. Eksperimentelt projekt Påvisning af anti-GBM-antistoffer i serum vil blive udført ved hjælp af en automatiseret kemiluminescerende metode ved brug af et kommercielt testkit. I tilfælde af positivitet vil det samme serum blive testet anden gang for at bekræfte resultatet og derefter kontrolleret med en anden metode ved hjælp af indirekte immunfluorescens (IIF) i frosne sektioner af primatenyre, der dækker reaktionsområderne på et BIOCHIP-objektglas (referencemetode).

Ifølge vores immunologiske laboratorieafdeling skal vi bruge 600μl serum per patient for at kunne udføre alle testene. Ifølge producentens instruktion vil den optimale afskæringsværdi for positivitet i kemiluminescensmetoden blive sat til 20CU/mL.

8. Dataanalyse Primært endepunkt: andel af positive anti-MBG-antistoffer vil blive estimeret i hver gruppe (med og uden lupus nefritis) ved en Chi-2-test eller en nøjagtig test af Fisher (afhængigt af testvaliditetsbetingelserne).

Sekundært endepunkt: kliniske, serologiske og renale træk hos anti-GBM-positive patienter, vil blive sammenlignet med negative, ved hjælp af tests tilpasset fordelingen af ​​hver variabel.

9. Forventede resultater og fremtidsudsigter

• Vi forventer en højere frekvens af positive cirkulerende anti-GBM-antistoffer hos patienter med LN sammenlignet med SLE-kontrolgruppen og til rask kontrolgruppe.
• Hvorvidt denne forskning var positiv, kunne en anden større undersøgelse vise interessen for anti-GBM-antistoffer som en forudsigelig biomarkør for LN og som en prognostisk biomarkør for SLE.