Lesione pancreatica e corrispondente esito gestionale (PICO)

Il trauma pancreatico, sebbene non comune, presenta ai chirurghi traumatologici dilemmi diagnostici e terapeutici impegnativi. In effetti, le lesioni al pancreas sono state associate a tassi di morbilità riportati che si avvicinano al 45%.

La caratterizzazione della malattia ad uno specifico livello terapeutico consentirà una migliore gestione dei pazienti trattati. Per fare ciò, la strategia consiste nell'integrare precise cartelle cliniche prospettiche e ampi dati sul trattamento clinico in un'ampia coorte di pazienti.

Tutti i reparti clinici, partecipanti allo studio, includono pazienti, con una stretta collaborazione tra i reparti di Traumatologia, Terapia Intensiva e Chirurgia. Dati demografici e parametri clinici sono raccolti in un database.

Una volta confermata la diagnosi, viene eseguito l'inclusione dei pazienti, prima di una gestione ospedaliera programmata, e dopo la verifica dei criteri di ammissibilità e la firma del modulo di consenso. Durante la gestione clinica vengono raccolti diversi campioni: campioni di sangue e campioni chirurgici. Come di consueto, il trattamento post-operatorio sarà prescritto a discrezione dello sperimentatore, con l'ausilio di un algoritmo prestabilito. Durante questo esame vengono raccolti anche diversi campioni (campione di sangue e tessuto biologico).

Contestualmente a tali gestioni vengono registrati i dati clinici riguardanti l'anamnesi, la storia dei trattamenti preospedalieri, la storia chirurgica, la storia dei trattamenti, il trattamento post operatorio se prescritto, la storia dei trattamenti tra chirurgia e diagnosi per immagini. I dati clinici vengono raccolti anche 12 mesi dopo la dimissione durante una visita programmata organizzata come di consueto, per uno studio a lungo termine.

Diversi studi saranno eseguiti durante l'allestimento della coorte:

• Confronto tra trattamento operativo e non operativo del trauma pancreatico:
• Confronto tra il tempo di diagnosi e il tempo di trattamento dei pazienti con trauma pancreatico e se il trattamento è mancato o meno
• Studio del trattamento specifico di pazienti con trauma pancreatico
• Studio delle metodiche chirurgiche e delle condizioni intraoperatorie in pazienti con trauma pancreatico
• Studio del trattamento di rianimazione in terapia intensiva di pazienti con trauma pancreatico
• Studio dell'endoscopia e di altri trattamenti conservativi per pazienti con trauma pancreatico
• Studio del trattamento di supporto nutrizionale per pazienti con trauma pancreatico
• Studio dei metodi di trattamento per il controllo del danno e il controllo del non danno in pazienti con grave trauma pancreatico

Tutti i campioni biologici sono conservati in siti a -80°C, oa temperatura ambiente a seconda dei campioni: I campioni raccolti in provette, vengono inviati immediatamente, a temperatura ambiente, al dipartimento centrale di patologia del Jinling Hospital, Nanjing, Cina. Tutti gli altri campioni, conservati a -80°C, vengono inviati al Research Institute of General Surgery, Medical School of Nanjing University, China.

Le analisi dei campioni vengono eseguite da un centro di ricerca dedicato: estrazione del DNA e dell'RNA per l'analisi del trascrittoma, analisi istologiche, ecc:

Analisi istologiche: Analisi della struttura del pancreas o del tessuto intestinale asportato.

Biologia molecolare: le analisi dell'espressione dell'intero genoma vengono eseguite utilizzando microarray e seguite da analisi di Gene Ontology e clustering.

Microbiota: la composizione batterica del microbiota associato alla mucosa ileale viene analizzata al momento dell'intervento chirurgico utilizzando il sequenziamento 16S (MiSeq, Illumina). Le sequenze ottenute vengono analizzate utilizzando la pipeline Qiime per valutare la composizione, la diversità alfa e beta.

Immunologia: fenotipo delle cellule immunitarie: le cellule immunitarie vengono estratte dal sangue e dai tessuti freschi della mucosa. Il fenotipo di queste cellule viene analizzato mediante citometria.

Analisi delle trappole extracellulari dei neutrofili:

Le concentrazioni di DNA libero da cellule, nucleosomi liberi da cellule, elastasi neutrofila (NE) e mieloperossidasi (MPO) sono state misurate nel siero e nel plasma mediante Human Cell Death Detection ELISA o ELISA sandwich.

Il tessuto pancreatico è stato rimosso rapidamente e diviso in diverse parti per analisi successive. Uno è stato utilizzato per la microscopia confocale e un terzo è stato congelato a scatto in azoto liquido per la quantificazione biochimica dei livelli di mieloperossidasi pancreatica (MPO), istone 3 e istone 4, ecc. Uno è stato fissato in formalina per l'analisi istologica.