Associazione tra esposizione a PM2.5 e ferroptosi nei pazienti con crisi epilettiche

Sfondo: Nonostante l'esatto meccanismo degli effetti dell'inquinamento atmosferico (PM2.5) sul sistema nervoso centrale è ancora in discussione. Vi è una crescente evidenza che l'inquinamento atmosferico (PM2.5) influenzerà le malattie neurodegenerative, inclusa l'epilessia. È noto che l'inquinamento atmosferico (PM2.5) aumenterà il livello di citochine proinfiammatorie rilasciate dalla microglia e la ricerca avanzata ha indicato che il livello di interleuchina-6 influenzerà i sintomi dell'epilessia. Inoltre, la nostra precedente ricerca ha indicato che Nrf2 svolge un ruolo cruciale nei sintomi delle crisi e nella funzione cognitiva (NCT05269901). Tuttavia, se la citochina proinfiammatoria indotta da PM2.5 rilasciata dalla microglia cambierà la ferroptosi dipendente da Nrf2 per facilitare i sintomi convulsivi e la funzione cognitiva è ancora inesplorata. Pertanto, questo studio pilota di coorte mira a scoprire la potenziale associazione tra le esposizioni a PM2.5 e i cambiamenti nel livello di interleuchina-6 e nella via della ferroptosi dipendente da Nrf2

Metodi:

1. I ricercatori hanno arruolato per la prima volta 30 bambini epilettici con bassa esposizione a PM2,5 e bambini con elevata esposizione a PM2,5 della stessa età a cui è stata recentemente diagnosticata l'epilessia (<2 mesi) da due città (Yangzhou e Xuzhou) come gruppo di controllo e inquinamento atmosferico basato su precedenti record di PM2.5;
2. Registrato il livello di PM2.5 in due città ogni 5 giorni tra il 2022.12 e il 2023.3 per confrontare la differenza;
3. Interleukin-6 ELISA (IL6) KIT è stato utilizzato per confrontare il livello di citochine proinfiammatorie in due gruppi
4. 4 Hydroxynonenal (4HNE) ELISA KIT è stato utilizzato per confrontare il livello di specie lipidiche reattive dell'ossigeno in due gruppi
5. La PCR quantitativa in tempo reale (RT-qPCR) è stata utilizzata per confrontare l'espressione dell'RNA messaggero (mRNA) della via della ferroptosi dipendente da Nrf2 (Nrf2, SLC7A11, GPX4) Protocollo dei metodi dettagliati

1. Fonte livello PM2.5: i livelli PM2.5 sono stati registrati tramite i dati del Ministero dell'Ecologia e dell'Ambiente della Repubblica Popolare Cinese (air.cnemc.cn:18007/) 2. Raccolta del campione: alla fine di questo studio, il partecipante arruolato verrà in ospedale per raccogliere il sangue periferico (ospedale affiliato dell'Università di Jiangnan e l'ospedale pediatrico di Xuzhou, rispettivamente) e i campioni di sangue sono stati raccolti in acido etilendiamminotetraacetico ( EDTA） provette vacutainer e quindi suddivise in leucociti e plasma per ulteriori esperimenti 3. Interleuchina-6 e 4HNE: le concentrazioni plasmatiche di IL-6 e 4HNE sono state rilevate con il metodo ELISA competitivo 4. Sequenza RTqPCR: h-GPX4 avanti: 5'-GAGGCAAGACCGAAGTAAACTAC -3' h-GPX4 indietro: 5'-CCGAACTGGTTACACGGGAA-3' h-SLC7A11 avanti: 5'-TCTCCAAAGGAGGTTACCTGC-3' h-SLC7A11 indietro: 5'-AGACTCCCCTCAGTAAAGTGAC-3' h-Nrf2 avanti5'-ATAGCTGAGCCCAGTATC-3' h -Nrf2 indietro 5'- CATGCACGTGAGTGCTCT-3' h-GAPDH avanti: 5'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3' h-GAPDH indietro: 5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'