放射線療法後の救援可能な早期再発上咽頭癌の分子検出に関する前向き研究

1. 背景: 治療の失敗は、まだ有効な治療法がない遠隔地で発生する可能性があります。 初期の局所残留または再発 NPC は、5 年生存率 50% 以上で救助可能です。 しかし、重度の鼻咽頭炎および炎症性腫脹および痂皮の変化を伴う重度に照射された鼻咽頭における経鼻内視鏡検査による放射線療法後の早期残存または再発NPCの臨床的検出は困難です。 放射線画像と鼻咽頭生検にはそれぞれの役割がありますが、侵襲的で費用がかかり、通常のフォローアップ スクリーニング方法として頻繁に繰り返すことはできません。 残念ながら、50% の局所再発は進行した rT3-4 段階にあり、28% の局所再発は救済できません。 したがって、サルベージ治療を成功させるには、従来の臨床フォローアップでは見逃された早期の残存/再発NPCの検出が重要です。 NPCの分子検出のための血液および鼻咽頭ブラシ/スワブの非侵襲的で安価で反復可能なサンプリングは、局所障害の治療結果の将来の改善のための研究の焦点です.

最小残存/再発性 NPC の検出には 2 つの潜在的な分子マーカーがあります。

1. EBV DNA は NPC の分子マーカーです。 鼻咽頭摘出術を受けた局所再発患者の61％のみが陽性の血漿EBV DNAを持っていたと報告しています。 局所再発の感度は、治療前の NPC の同じ病期と比較して低く、86% T1 対 38% rT1 でした。 鼻咽頭ブラシの EBV DNA は、治療前の NPC に対して 96% の感度と 96% の特異性があると報告されています。 鼻咽頭スワブ中の EBV DNA は、放射線療法後に消失し、局所再発患者 11 人の小規模なケーススタディで 100% の感度と 98% の特異度で粘膜の局所再発とともに再出現することが報告されました。従来のフォローアップでは見逃していました。 ただし、検証のためにさらに前向きな縦断的研究が必要です。
2. 多くの腫瘍抑制遺伝子の CG リッチ プロモーター領域のメチル化は、NPC では一般的な遺伝子異常であることがわかっていますが、正常な鼻咽頭ではそうではありません。 メチル化されたプロモーター DNA は、NPC 患者の末梢血および鼻咽頭スワブで検出できますが、正常なコントロールではめったに検出できないことを示しました。 血漿中の 3 つのメチル化遺伝子の組み合わせを使用することにより、局所再発の検出に 38% の感度があることがわかりました。

2. 研究の目的 従来の臨床フォローアッププロトコルでは見逃された早期の救済可能な局所残留および再発 NPC のスクリーニングのために、血漿および鼻咽頭ブラシの両方の体液中の EBV およびメチル化マーカー遺伝子の組み合わせの感度および特異性を評価すること。

3. テストされた仮説:

1. 治療後に残存腫瘍または再発腫瘍がなく寛解状態にある患者は、フォローアップ時に鼻咽頭ブラシと血漿の両方のマーカーが持続的に陰性または非常に低いバックグラウンドレベルである必要があります。
2. 局所腫瘍またはリンパ節腫瘍が残存または再発している患者は、8週目以降もマーカーレベルが持続的に高いか、初期の消失/非常に低いバックグラウンドレベルへの低下に続いて、フォローアップ時に再びマーカーレベルが再発/増加します。 マーカーの量の時間的変化は、臨床症状の前に残存および再発 NPC の腫瘍負荷を反映するために重要です。 これらのパターンは、臨床症状の前の初期の救助可能な段階で残存/再発性 NPC を有する患者で観察されると仮定します。

4.研究の方法論：

1. 治療前

   1. 腫瘍の鼻咽頭ブラシは、内視鏡ガイド下で収集されます。
   2. 次に、NPC生検標本を組織切片用に収集し、液体窒素で新たに凍結し、その後の研究のために-80℃の冷凍庫に保存します。
   3. 20mlのEDTA血液も研究のために収集されます。
   4. EBV DNAおよびメチル化マーカーは、メチル化特異的定量PCR法を使用して、腫瘍、鼻咽頭ブラシ、および血液でスクリーニングされます。 研究室のプロトコルは、EBV DNA およびメチル化研究に関する以前の出版物から報告されています。

2. 残存NPCの治療後の再評価

   1. 治療後の残留NPCの寛解時間の研究に関する発表された結果に基づいて、残留NPCの評価のために、治療後8週目に内視鏡的評価と鼻咽頭の無作為生検を実行するための定期的なフォローアッププロトコルがあります。
   2. 8週目の内視鏡検査時に、バイオマーカーの研究のために鼻咽頭ブラシと20mlの血液を採取します。 患者の腫瘍生検所見から選択された患者の EBV および特定のメチル化マーカーは、個々の患者ごとに使用され、残りの NPC をスクリーニングします。
   3. 8週目に生検が陽性の患者のうち、10週目に再生検が行われます。 生検が 10 週目にまだ陽性である場合は、必要に応じて再照射または鼻咽頭摘出術のいずれかのサルベージ治療が手配されます。 10 週目の再生検が陰性になった場合、患者は 4 週間後に再評価されます。
   4. 8週目にバイオマーカーと生検の両方で陰性の所見を示した患者のうち、患者はスケジュールに従って毎月フォローアップされます。
   5. 8週目にバイオマーカーが陽性であるが生検が陰性である患者のうち、10週目にさらに鼻咽頭生検を実施して、8週目の前の生検からの局所残留NPCの欠落がないことを確認します。 同時に放射線画像検査も行います。 経時変化を追跡するために、鼻咽頭ブラシと血液検査も繰り返されます。 10週目に生検で陽性となった患者には、放射線療法または手術による適切な救援処置が施され、これらの患者は分子スクリーニングの恩恵を受けます。 10週目の生検が持続的に陰性である患者は、スケジュールに従ってフォローアップされ、フォローアップ時に再発がない場合、これらの患者は分子サーベイランスが偽陽性です。

3. 再発NPCの検出のためのその後のフォローアップ

   1. 8/10 週目に治療後の鼻咽頭生検が陰性であった患者は、1 年目は毎月、2 年目は 2 か月ごと、3 ～ 5 年目は 3 か月ごとに合計 5 年間フォローアップされます。 実際、そのうちの 11% がその後局所再発を起こすと予想されます。 各フォローアップ中に鼻咽頭を検査するために鼻内視鏡検査を実行するのは、私たちの日常的なプロトコルです。 鼻咽頭に疑わしい病変が見られない場合、生検は行われず、患者はフォローアップのために再スケジュールされます。
   2. フォローアップの内視鏡検査中に疑わしい病変が見られた場合、鼻咽頭生検が行われます。 生検で再発が証明された場合、患者はそれに応じて管理されます。 生検が陰性の場合、患者は定期的なフォローアップのために再スケジュールされます。

   3. 1年目と2年目は2か月ごと、3年目から5年目は3か月ごとにフォローアップ時に鼻咽頭ブラシと20mlの血液を採取して研究します。

      患者の腫瘍生検所見から選択された患者のEBVおよび特定のメチル化マーカーは、局所再発をスクリーニングするために、個々の患者ごとに再評価されます。

   4. 患者の鼻内視鏡所見が陰性であり、血漿と鼻咽頭ブラシの両方で分子バイオマーカーの所見が陰性である場合、患者は予定どおり定期的にフォローアップされます。
   5. 患者の経鼻内視鏡所見が陰性であるが、体液またはマーカーの少なくとも 1 つに陽性の分子マーカーの結果が見つかった場合、患者は定期的な臨床フォローアップ中に見逃された再発について徹底的に再評価されます。 患者は、局所再発の可能性を評価するために、PET / CT / MRIイメージングとランダムな複数の鼻咽頭生検を受けます。 陽性の血漿所見は結節または遠隔転移による可能性があるため、臨床的に必要と判断された場合は、再発または新しいがんの他の部位が調査されます。 鼻咽頭生検が陽性であるか、他の再発部位が見つかった場合、患者はそれに応じて救援治療によって適切に管理されます。 これらの患者は、分子サーベイランスの恩恵を受け、真の陽性結果が得られます。 再発の検索がすべて陰性である場合、患者は定期的なフォローアップのために再スケジュールされ、患者がさらなるフォローアップで再発していないことが証明された場合、分子サーベイランスは偽陽性と見なされます.
4. フォローアップのエンドポイント 治療後 5 年間のフォローアップ状態が、各患者の研究のエンドポイントになります。
5. 募集された患者数と募集基準：

クイーン メリー病院には、毎年 130 ～ 150 人の新しい NPC 患者がいます。 2006 年 1 月からの縦断研究では、350 人の患者を募集する予定です。 採用された患者は、治療前に遠隔転移がなく、根治的放射線療法に医学的に適している必要があります。 2008 年には合計 350 人の患者が募集される予定です。 これらの 350 人の患者のうち、約 35 人の患者は、従来のフォローアップによる放射線療法後 8 週目に画像検査および生検評価により局所腫瘍が残存していないことが判明したが、その後 5 年以内に孤立した局所再発を発症すると予想される。 . これらの局所再発のうち、分子サーベイランスによる早期発見、再発の段階、および治療結果によってどれだけの再発が恩恵を受けるかを知ることができます。 これらの 350 人の患者のうち、約 20 人の患者にリンパ節再発が見込まれます。