10119473 -VIROMARKERS HDVバイオマーカー研究

各参加者について、ベースライン時およびBLV治療中の96週まで3か月ごとに血液サンプルを採取しました。 参加者の一部については、治療開始から144週までに採取された血液サンプルも分析に利用可能となります。 各時点において、血清HDV-RNAは、BLVの有効性評価を目的とした臨床研究で使用されている基準測定法であるRoboGene 2.0アッセイを用いて定量されました[Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025]。

ローマ・トル・ヴェルガータ大学感染症・肝臓病ユニットおよびミラノ・ポリクリニコでフォローアップされた80名の参加者のサブセットにおいて、2023-2025年に保存されたサンプルおよび2025-2028年に新たに採取されたサンプルについて、Altona（AltoStarアッセイ）、Qiagen、RoboGene 2.0を用いたHDV RNA定量を遡及的に実施します。 これにより、これらのアッセイの診断性能と、48週、96週、およびサブセットにおける144週時のウイルス学的反応達成または検出不能HDV-RNAの予測能力を比較することが可能となります。 したがって、関連解析については、使用された定量法に応じて別々の分析が実施されます。 治療中の残存HDVウイルス血症を検出する能力を評価することにより、上記アッセイの感度を比較することに特に重点が置かれます。

また、この約80名のサブセットにおいて、3種類の異なるHBsAgアイソフォーム（L-、M-、S-HBs）のレベルを、ベースライン時、48週、96週、および選択された患者については144週時に、3種類の特別に設計されたELISAアッセイを用いて定量します。 これらのアッセイは、それぞれ抗PreS1、抗PreS2、抗S抗体に基づくサンドイッチシステムを利用することで、高い感度（各タンパク質の検出限界は0.1 ng/ml）と高い特異性を有することが実証されています。 各患者および各時点について、総HBsAg、L-HBs、M-HBs、S-HBsレベルを複製して定量します。

分析において、各参加者のウイルス学的状態は、欧州肝臓研究学会が推奨するガイドラインに従い、144週まで3か月ごとに評価されます。

本プロトコル内での保存臨床検体の使用は、プロトコルチーム、VIROMARKERS科学運営委員会、およびEC Horizon Europeによって審査されます。

具体的な副次目的には、HDV-RNA定量のための利用可能なアッセイの診断性能を比較すること；異なるHDV-RNAアッセイによる48週、96週、144週時の検出不能血清HDV-RNAの割合を比較すること；異なるHDV-RNA定量アッセイによるBLV治療中のHDV-RNA動態を比較すること；HBsAgアイソフォームのレベルが、単独またはベースライン時の血清HDV-RNAと組み合わせて、48週、96週、144週時のBLVに対するウイルス学的反応達成を予測できるか評価すること；およびHDV遺伝子型/サブタイプに応じたBLVに対するウイルス学的反応率を比較することが含まれます。

CHD参加者に関する本研究からの情報は迅速に分析され、BLVの使用と反応モニタリングのための政策立案者を導き、将来の研究を設計するために広く共有されます。

参加者選択 本研究には、遡及的数据とサンプルが利用可能な、2023年1月から2025年2月までにBLVを開始した220名の患者が含まれます。 この集団に対するフォローアップとサンプル収集は、研究助成期間中に延長されます。

研究の遡及的および前向き部分の両方に含まれるための適格条件として、参加者は18歳以上であること、インフォームドコンセントに署名していること、および以下の追加基準を満たしている必要があります：

代償性肝硬変の有無にかかわらず慢性HDV感染の診断 EASLが推進する最近のHDV感染に関する臨床診療ガイドラインに記載された基準に従い、BLV単剤療法2mg/日を開始していること BLV開始時にヌクレオシドアナログによる有効治療下にあり、HBV-DNA <20 IU/mlであること

研究デザイン これは主に遡及的で一部前向きの観察研究であり、2023年から2025年3月までにBLVを開始したCHD患者を登録します。 参加者は他のプロジェクトに登録されており、大半は既にこれらの研究の一部としてある期間フォローアップされており、VIROMARKERSへの参加同意書に署名する時点でこの新たな研究に登録されます。

参加者は、ウイルス学的反応達成のために最低96週間フォローアップされています。 同様の包含基準と、追加サンプル収集および検査（HBsAgアイソフォームレベル、HDV遺伝子型/サブタイプ）を伴うフォローアップが、遡及的フェーズですでに募集された者に対するフォローアップ延長を含む前向き部分について計画されています。 本プロトコルにおける新規登録は計画されていません。

研究目的 一次および二次目的は以下の通りです。

一次 CHD患者を人口統計学的特徴、併存疾患、HDV疾患状態の観点から特徴づける 全参加者におけるBLV治療下のウイルス学的および臨床的経過を記述する BLV開始から48週、96週、144週までにウイルス学的反応（血清HDV RNAの2 log以上減少または検出不能HDV-RNAと定義）および検出不能HDV-RNAを達成した参加者の割合を推定する BLV開始から48週、96週、144週までに生化学的反応および複合反応（ウイルス学的反応達成とALT正常化の達成と定義）を達成した患者の割合を推定する 反応の潜在的予測因子を特定する：ベースライン時のHDV-RNAレベル、最初の12週間のHDV-RNA動態 研究集団のサブセットにおいて、HBsAgアイソフォームのレベルを、単独またはベースライン時およびフォローアップ中の血清HDV-RNAおよびベースライン時のHDV遺伝子型/サブタイプと組み合わせて測定する

二次 複数回測定のある研究集団のサブセットにおいて、Robogene、Altona（AltoStarアッセイ）、QiagenによるHDV-RNA定量アッセイの診断性能を、WHO参照基準および既知の血清HDV RNAを有する臨床サンプルに対して比較する。

異なるHDV-RNA定量アッセイを使用して、BLV治療中のHDV-RNA動態を追跡および比較する。

異なるHDV-RNA定量アッセイによる、144週までの検出不能血清HDV-RNAの割合を比較する。

サンプルサイズ 遡的部分のサンプルサイズは220名で確定しました。 助成金の3年間でさらなる募集が見込まれます。 毎年何名の参加者が治療を開始するかは不確かです。 整備されたインフラにより、稀な疾患であるにもかかわらず、治療を必要とする患者の募集は迅速に行われるため、最大でさらに30名を追加登録することが予測されます。

以前に研究され、VIROMARKERSに登録およびフォローアップされる可能性のある個人の集団に基づき、中央値50歳（範囲30-70歳）、性別分布が同等、95%がヨーロッパ系の研究集団が得られると期待されます。 複数国の様々な地理的位置の施設が参加しています。 対照的に、前向きサンプルは、ミラノ・ポリクリニコ大学およびローマ（トル・ヴェルガータ大学）のプロジェクト施設において、イタリアのみで収集されます。

BLV投与中のCHD参加者については、48週までにウイルス学的反応を達成する参加者の割合を推定し、反応に関連する危険因子を研究するための検出力を決定するための単一試験からのデータが存在します。

統計的考察は以下に要約されます。 本研究では、二値および連続予測因子（例：HDV RNA、HDV RNA傾斜など）が考慮されます。 後者については、因子の上位四分位と下位四分位を比較することから検出力が推定されました。

CHD患者244名（SAVE-D研究）の最近の分析では、48%が検出不能HDV-RNAを達成し、79%がウイルス学的反応を達成しました。 これらのデータを用い、100名の参加者が検出不能血清HDV-RNAを達成すると仮定すると、相対リスク2.21および2.50をそれぞれ80%および90%の検出力で検出できます。 より高い反応率を示すウイルス学的反応およびALT正常化については、検出力はより高くなります。 80名のサブセットでHBsAgアイソフォームが測定されると期待されるため、この分析におけるオッズ比1.8-2.8の範囲での検出力は限定的となるでしょう。 新規開始者の登録率に依存します。

参加者選択 包含基準

登録の適格条件として、参加者は以下を満たさなければなりません：

18歳以上であること インフォームドコンセントに署名していること 代償性肝硬変の有無にかかわらずHDV感染の診断があること EASL（EASL CPG 2023）が推進する最近のHDV感染に関する臨床診療ガイドラインに記載された基準に従い、BLV単剤療法2mg/日を開始していること BLV開始時にヌクレオシドアナログによる有効治療下にあり、HBV-DNA <20 IU/mlであること 除外基準 非代償性肝疾患 BLVとpegIFNの併用療法 過去のBLV治療歴