10119473 -VIROMARKERS Studie biomarkerů HDV

U každého účastníka byl odebrán vzorek krve na začátku studie a každé 3 měsíce během léčby BLV až do 96. týdne. U podskupiny účastníků budou k dispozici pro analýzu také vzorky krve odebrané až do 144 týdnů léčby. V každém časovém bodě byl sérový HDV-RNA kvantifikován pomocí referenčního testu RoboGene 2.0 používaného v klinických studiích zaměřených na hodnocení účinnosti BLV [Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025].

U podskupiny 80 účastníků sledovaných na Klinice infekčních chorob a hepatologie Univerzity Řím Tor Vergata a v Miláně v Poliklinice bude retrospektivně provedena kvantifikace HDV RNA pomocí metod Altona (AltoStar testy), Qiagen a RoboGene 2.0 ve vzorcích uložených v letech 2023–2025 i v nově odebraných vzorcích v letech 2025–2028. To umožní srovnání diagnostických výkonů těchto testů a jejich schopnosti předpovědět dosažení virologické odpovědi nebo nedetekovatelného HDV-RNA v týdnu 48 a 96 a v týdnu 144 u podskupiny. Pro asociační analýzu budou proto provedeny samostatné analýzy podle použité metody kvantifikace. Zvláštní pozornost bude věnována srovnání citlivosti výše uvedených testů hodnocením jejich schopnosti detekovat reziduální HDV virémii během léčby.

U této podskupiny přibližně 80 jedinců budou také kvantifikovány hladiny tří různých izoforem HBsAg (L-, M- a S-HBs) pomocí tří různých speciálně navržených ELISA testů v následujících časových bodech: na začátku studie, v týdnech 48, 96 a 144 u vybraných pacientů. Tyto testy prokázaly vysokou citlivost (detekční limit pro každý protein je 0,1 ng/ml) a vysokou specificitu díky sendvičovému systému založenému na protilátkách anti-PreS1, anti-PreS2 a anti-S. U každého pacienta a v každém časovém bodě budou celkové hladiny HBsAg, L-HBs, M-HBs a S-HBs kvantifikovány duplikátně.

V analýze bude virologický stav každého zařazeného účastníka hodnocen každé 3 měsíce podle doporučení Evropské asociace pro studium jater a až do 144 týdnů.

Použití uložených klinických vzorků v rámci tohoto protokolu posoudí Tým protokolu, Vědecký řídící výbor VIROMARKERS a EC Horizon Europe.

Specifické sekundární cíle zahrnují srovnání diagnostických výkonů dostupných testů pro kvantifikaci HDV-RNA; srovnání míry nedetekovatelného sérového HDV-RNA v týdnu 48, 96 a 144 pomocí různých testů HDV-RNA; srovnání kinetiky HDV-RNA během léčby BLV pomocí různých testů pro kvantifikaci HDV-RNA; vyhodnocení, zda hladiny izoforem HBsAg, samostatně nebo v kombinaci se sérovým HDV-RNA na začátku studie, mohou předpovědět dosažení virologické odpovědi na BLV v týdnu 48, 96 a 144, a srovnání míry virologické odpovědi na BLV podle genotypů/subgenotypů HDV.

Informace z této studie o účastnících s CHD budou rychle analyzovány a široce sdíleny, aby pomohly tvůrcům politik při použití a sledování odpovědi na BLV a při návrhu budoucích studií.

Výběr účastníků Studie zahrne 220 pacientů, kteří zahájili léčbu BLV od ledna 2023 do února 2025 a pro které jsou k dispozici retrospektivní data a vzorky. Sledování a odběr vzorků budou pro tuto populaci prodlouženy po dobu trvání grantu studie.

Pro zařazení do retrospektivní i prospektivní části studie musí účastníci splňovat následující kritéria: věk ≥18 let, podepsaný informovaný souhlas a následující další kritéria:

Diagnóza chronické infekce HDV s kompenzovanou cirhózou nebo bez ní Zahájení monoterapie BLV 2 mg/denně podle kritérií uvedených v nedávných klinických doporučeních pro infekci HDV podporovaných EASL Účinná léčba nukleosidovými analogy s HBV-DNA <20 IU/ml v době zahájení BLV

Design studie Jedná se převážně o retrospektivní a částečně prospektivní observační studii, která zahrne pacienty s CHD, kteří zahájili léčbu BLV v období 2023–březen 2025. Účastníci byli zařazeni do jiných projektů a většina z nich již byla po určitou dobu sledována v rámci těchto studií a budou zařazeni do této nové studie v době podpisu souhlasu s účastí ve VIROMARKERS.

Účastníci byli sledováni minimálně 96 týdnů pro dosažení virologické odpovědi. Podobná kritéria pro zařazení a sledování s dodatečným odběrem vzorků a testováním (hladiny izoforem HBsAg, genotypy/subgenotypy HDV) jsou plánována pro prospektivní část, která zahrnuje prodloužení sledování pro ty, kteří již byli zařazeni v retrospektivní fázi. Pro tento protokol nejsou plánována nová zařazení.

Cíle studie Primární a sekundární cíle jsou uvedeny níže.

Primární Charakterizace jedinců s CHD z hlediska demografie, komorbidit a stavu onemocnění HDV Popis virologického a klinického průběhu během léčby BLV pro všechny účastníky Odhad podílu účastníků dosahujících virologické odpovědi (definované jako pokles sérového HDV RNA o >2 log nebo nedetekovatelné HDV-RNA) a nedetekovatelného HDV-RNA do 48, 96, 144 týdnů od zahájení BLV Odhad procenta pacientů, kteří dosáhnou biochemické odpovědi a kombinované odpovědi (definované jako dosažení virologické odpovědi a normalizace ALT) v 48, 96, 144 týdnech od zahájení BLV Identifikace potenciálních prediktorů odpovědi: hladiny HDV-RNA na začátku, kinetika HDV-RNA během prvních 12 týdnů U podskupiny studované populace měření hladin izoforem HBsAg, samostatně nebo v kombinaci se sérovým HDV-RNA na začátku a během sledování, a genotypů/subgenotypů HDV na začátku.

Sekundární U podskupiny studované populace s více měřeními srovnání diagnostických výkonů testů pro kvantifikaci HDV-RNA pomocí Robogene, Altona (AltoStar testy) a Qiagen ve srovnání s referenčním standardem WHO a klinickými vzorky se známým sérovým HDV RNA.

Sledování a srovnání kinetiky HDV-RNA během léčby BLV pomocí různých testů pro kvantifikaci HDV-RNA.

Srovnání míry nedetekovatelného sérového HDV-RNA až do 144 týdnů pomocí různých testů pro kvantifikaci HDV-RNA.

Velikost vzorku Velikost vzorku pro retrospektivní část byla uzavřena na 220 jedincích. Očekává se další nábor během 3 let grantu. Není jisté, kolik účastníků zahájí léčbu každý rok. S existující infrastrukturou bude nábor pacientů potřebujících léčbu rychlý, i když se jedná o vzácné onemocnění, takže předpověď je další zařazení maximálně 30 dalších jedinců.

Na základě populace dříve studovaných jedinců, kteří mohou být potenciálně zařazeni a sledováni ve VIROMARKERS, se očekává studovaná populace s mediánem věku 50 let (rozsah 30–70) s porovnatelným rozdělením pohlaví, 95 % evropského původu. Zúčastnila se pracoviště v různých geografických lokalitách v několika zemích. Naopak prospektivní vzorky budou odebírány pouze v Itálii na projektových pracovištích v Poliklinice Univerzity v Miláně a Římě (Univerzita Tor Vergata).

Pro účastníky s CHD léčené BLV existují data z jedné studie pro odhad procenta účastníků, kteří dosáhnou virologické odpovědi do 48. týdne, a pro stanovení síly studie faktorů souvisejících s odpovědí.

Statistické úvahy jsou shrnuty níže. Ve studii jsou uvažovány binární i spojité prediktory, např. HDV RNA, sklon HDV RNA atd.). Pro druhé byla síla odhadnuta porovnáním horního versus nejnižšího kvartilu faktoru.

V nedávné analýze 244 osob s CHD (studie SAVE-D) dosáhlo 48 % nedetekovatelného HDV-RNA a 79 % virologické odpovědi. Použitím těchto dat lze detekovat relativní rizika 2,21 a 2,50 s 80% a 90% silou, za předpokladu, že 100 účastníků dosáhne nedetekovatelného sérového HDV-RNA. Pro virologickou odpověď a normalizaci ALT, které mají vyšší míry odpovědi, bude síla větší. Očekáváme, že hladiny izoforem HBsAg budou měřeny u podskupiny 80 jedinců, takže síla bude pro tuto analýzu omezená pro OR v rozsahu 1,8–2,8, v závislosti na míře zařazení nově zahajujících léčbu.

Výběr účastníků Kritéria pro zařazení

Pro zařazení musí účastníci:

Být starší 18 let Podepsat informovaný souhlas Mít diagnózu infekce HDV s kompenzovanou cirhózou nebo bez ní Zahájit monoterapii BLV 2 mg/denně podle kritérií uvedených v nedávných klinických doporučeních pro infekci HDV podporovaných EASL (EASL CPG 2023) Být pod účinnou léčbou nukleosidovými analogy s HBV-DNA <20 IU/ml v době zahájení BLV Kritéria vyloučení Dekompenzované jaterní onemocnění BLV v kombinaci s pegIFN Předchozí léčba BLV