10119473 -Исследование биомаркеров HDV VIROMARKERS

Для каждого участника образец крови был получен на исходном уровне и каждые 3 месяца во время лечения BLV до 96-й недели. Для подгруппы участников образцы крови, собранные до 144 недель лечения, также будут доступны для анализа. В каждой временной точке сывороточная РНК HDV количественно определялась с помощью референтного анализа RoboGene 2.0, используемого в клинических исследованиях, направленных на оценку эффективности BLV [Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025].

Для подгруппы из 80 участников, наблюдавшихся в Отделении инфекционных болезней и гепатологии Университета Рим Тор Вергата и в Поликлинике Милана, количественное определение РНК HDV с использованием Altona (анализы AltoStar), Qiagen и RoboGene 2.0 будет выполнено ретроспективно в образцах, хранившихся в 2023-2025 гг., а также в недавно собранных образцах в 2025-2028 гг. Это позволит сравнить диагностические характеристики этих анализов и их способность прогнозировать достижение вирусологического ответа или неопределяемой РНК HDV на 48-й и 96-й неделях, а также на 144-й неделе в подгруппе. Соответственно, для анализа ассоциации будут проведены отдельные анализы в зависимости от использованного метода количественного определения. Особое внимание будет уделено сравнению чувствительности вышеупомянутых анализов путем оценки их способности обнаруживать остаточную виремию HDV во время лечения.

Кроме того, в этой подгруппе примерно из 80 человек уровни трех различных изоформ HBsAg (L-, M- и S-HBs) будут количественно определены с использованием трех различных специально разработанных ИФА-анализов в следующие временные точки: исходный уровень, 48, 96 недель и 144 недели для выбранных пациентов. Было показано, что эти анализы обладают высокой чувствительностью (предел обнаружения для каждого белка составляет 0,1 нг/мл) и высокой специфичностью, благодаря использованию сэндвич-системы на основе антител к PreS1, PreS2 и S соответственно. Для каждого пациента и каждой временной точки общий HBsAg, L-HBs, M-HBs и S-HBs будут количественно определены в дубликатах.

В анализе вирусологический статус каждого включенного участника будет оцениваться каждые 3 месяца в соответствии с рекомендациями Европейской ассоциации по изучению печени и до 144 недель.

Использование хранящихся клинических образцов в рамках этого протокола будет рассмотрено Командой протокола, Научным руководящим комитетом VIROMARKERS и EC Horizon Europe.

Конкретные вторичные цели включают сравнение диагностических характеристик доступных анализов для количественного определения РНК HDV; сравнение частот неопределяемой сывороточной РНК HDV на 48-й, 96-й и 144-й неделях с помощью различных анализов РНК HDV; сравнение кинетики РНК HDV во время лечения BLV с помощью различных анализов для количественного определения РНК HDV; оценку того, могут ли уровни изоформ HBsAg, отдельно или в комбинации с сывороточной РНК HDV на исходном уровне, прогнозировать достижение вирусологического ответа на BLV на 48-й, 96-й и 144-й неделях, и сравнение частоты вирусологического ответа на BLV в зависимости от генотипов/субгенотипов HDV.

Информация, полученная в этом исследовании от участников с ХГD, будет быстро проанализирована и широко распространена для руководства политиками в использовании и мониторинге ответа на BLV, а также для планирования будущих исследований.

Отбор участников. В исследование будут включены 220 пациентов, начавших BLV с января 2023 по февраль 2025 года, для которых доступны ретроспективные данные и образцы. Наблюдение и сбор образцов будут продлены для этой популяции в течение периода гранта на исследование.

Для соответствия критериям включения как в ретроспективную, так и в проспективную часть исследования участники должны быть в возрасте ≥18 лет, подписать информированное согласие и удовлетворять следующим дополнительным критериям:

Диагноз хронической инфекции HDV с компенсированным циррозом или без него. Начатие монотерапии BLV 2 мг/сутки в соответствии с критериями, изложенными в недавних клинических практических рекомендациях по инфекции HDV, продвигаемых EASL. Нахождение на эффективном лечении нуклеозидными аналогами с ДНК HBV <20 МЕ/мл на момент начала BLV.

Дизайн исследования. Это в основном ретроспективное и частично проспективное обсервационное исследование, в которое будут включены пациенты с ХГD, начавшие BLV в период 2023 - март 2025 года. Участники были включены в другие проекты, и большинство из них уже наблюдались в течение некоторого времени в рамках этих исследований и будут включены в это новое исследование в момент подписания согласия на участие в VIROMARKERS.

Участники наблюдались не менее 96 недель для достижения вирусологического ответа. Аналогичные критерии включения и наблюдение с дополнительным сбором образцов и тестированием (уровни изоформ HBsAg, генотипы/субгенотипы HDV) планируются для проспективной части, которая включает продление наблюдения для тех, кто уже был набран в ретроспективной фазе. Новых включений для этого протокола не планируется.

Цели исследования. Первичные и вторичные цели перечислены ниже.

Первичные. Охарактеризовать лиц с ХГD с точки зрения демографии, сопутствующих заболеваний и статуса болезни HDV. Описать вирусологическое и клиническое течение на фоне лечения BLV для всех участников. Оценить долю участников, достигших вирусологического ответа (определяемого как снижение сывороточной РНК HDV >2 log или неопределяемая РНК HDV) и неопределяемой РНК HDV к 48, 96, 144 неделям от начала BLV. Оценить процент пациентов, достигших биохимического ответа и комбинированного ответа (определяемого как достижение вирусологического ответа и нормализация АЛТ) на 48, 96, 144 неделях от начала BLV. Выявить потенциальные предикторы ответа: уровни РНК HDV на исходном уровне, кинетика РНК HDV в течение первых 12 недель. В подгруппе исследуемой популяции измерить уровни изоформ HBsAg, отдельно или в комбинации с сывороточной РНК HDV на исходном уровне и в ходе наблюдения, а также генотипы/субгенотипы HDV на исходном уровне.

Вторичные. В подгруппе исследуемой популяции с множественными измерениями сравнить диагностические характеристики анализов для количественного определения РНК HDV с помощью Robogene, Altona (анализы AltoStar) и Qiagen, по сравнению со стандартом ВОЗ и клиническими образцами с известной сывороточной РНК HDV.

Проследить и сравнить кинетику РНК HDV во время лечения BLV с использованием различных анализов для количественного определения РНК HDV.

Сравнить частоту неопределяемой сывороточной РНК HDV до 144 недель с помощью различных анализов для количественного определения РНК HDV.

Размер выборки. Размер выборки для ретроспективной части был закрыт на 220 человек. Ожидаются дальнейшие наборы в течение 3 лет гранта. Неизвестно, сколько участников начнут лечение каждый год. При имеющейся инфраструктуре набор пациентов, нуждающихся в лечении, будет быстрым, хотя это редкое заболевание, поэтому прогноз — дальнейшее включение максимум 30 дополнительных человек.

Основываясь на популяции лиц, ранее изученных и которые потенциально могут быть включены и наблюдаемы в VIROMARKERS, ожидается, что исследуемая популяция будет иметь медианный возраст 50 лет (диапазон 30-70) с сопоставимым распределением по полу, 95% европейского происхождения. В исследовании участвовали центры в различных географических локациях в нескольких странах. В отличие от этого, проспективные образцы будут собираться только в Италии в проектных центрах в Поликлинике Университета Милана и Рима (Университет Тор Вергата).

Для участников с ХГD на BLV существуют данные одного исследования для оценки процента участников, которые достигнут вирусологического ответа к 48-й неделе, и определения мощности для изучения факторов риска, связанных с ответом.

Статистические соображения суммированы ниже. В исследовании рассматриваются как бинарные, так и непрерывные предикторы, например, РНК HDV, наклон РНК HDV и т.д.). Для последних мощность оценивалась путем сравнения верхнего и нижнего квартилей фактора.

В недавнем анализе 244 человек с ХГD (исследование SAVE-D) 48% достигли неопределяемой РНК HDV и 79% — вирусологического ответа. Используя эти данные, относительные риски 2,21 и 2,50 могут быть обнаружены с мощностью 80% и 90% соответственно, при условии, что 100 участников достигнут неопределяемой сывороточной РНК HDV). Для вирусологического ответа и нормализации АЛТ, которые имеют более высокие частоты ответа, мощность будет выше. Мы ожидаем, что изоформы HBsAg будут измерены в подгруппе из 80 человек, поэтому мощность для этого анализа будет ограничена для OR в диапазоне 1,8-2,8, в зависимости от скорости включения новых начинающих лечение.

Отбор участников. Критерии включения.

Для соответствия критериям включения участники должны:

Быть старше 18 лет. Подписать информированное согласие. Иметь диагноз инфекции HDV с компенсированным циррозом или без него. Начать монотерапию BLV 2 мг/сутки в соответствии с критериями, изложенными в недавних клинических практических рекомендациях по инфекции HDV, продвигаемых EASL (EASL CPG 2023). Находиться на эффективном лечении нуклеозидными аналогами с ДНК HBV <20 МЕ/мл на момент начала BLV. Критерии исключения. Декомпенсированное заболевание печени. BLV в комбинации с пегИФН. Предыдущее лечение BLV.