10119473 -VIROMARKERS Badanie Biomarkerów HDV

Dla każdego uczestnika pobrano próbkę krwi na początku badania oraz co 3 miesiące podczas leczenia BLV do 96 tygodnia. Dla podgrupy uczestników próbki krwi pobrane do 144 tygodnia leczenia będą również dostępne do analizy. W każdym punkcie czasowym ilościowo oznaczono RNA HDV w surowicy za pomocą referencyjnego testu RoboGene 2.0 stosowanego w badaniach klinicznych mających na celu ocenę skuteczności BLV [Wedemeyer i in., 2023; Degasperi i in., J Hepatol 2025].

Dla podgrupy 80 uczestników obserwowanych w Klinice Chorób Zakaźnych i Hepatologii Uniwersytetu Rzymskiego Tor Vergata oraz w Policlinico w Mediolanie, ilościowe oznaczenie RNA HDV za pomocą testów Altona (AltoStar), Qiagen i RoboGene 2.0 zostanie wykonane retrospektywnie na próbkach przechowywanych w latach 2023-2025 oraz na nowo pobranych próbkach w latach 2025-2028. Umożliwi to porównanie charakterystyk diagnostycznych tych testów oraz ich zdolności do przewidywania osiągnięcia odpowiedzi wirusologicznej lub niewykrywalnego RNA HDV w 48 i 96 tygodniu oraz w 144 tygodniu w podgrupie. W związku z tym w analizie asocjacji przeprowadzone zostaną oddzielne analizy zgodnie z zastosowaną metodą ilościowego oznaczenia. Szczególną uwagę poświęci się porównaniu czułości wspomnianych testów poprzez ocenę ich zdolności do wykrywania resztkowej wiremii HDV podczas leczenia.

Ponadto, w tej podgrupie około 80 osób, poziomy trzech różnych izoform HBsAg (L-, M- i S-HBs) zostaną ilościowo oznaczone za pomocą trzech różnych testów ELISA zaprojektowanych ad-hoc w następujących punktach czasowych: początek badania, 48, 96 tygodni oraz 144 tygodnie dla wybranych pacjentów. Wykazano, że te testy charakteryzują się wysoką czułością (granica wykrywalności dla każdego białka wynosi 0,1 ng/ml) i wysoką specyficznością, wykorzystując system sandwich oparty odpowiednio na przeciwciałach anty-PreS1, anty-PreS2 i anty-S. Dla każdego pacjenta i każdego punktu czasowego, całkowite HBsAg, L-HBs, M-HBs i S-HBs zostaną oznaczone ilościowo w duplikacie.

W analizie, status wirusologiczny każdego włączonego uczestnika będzie oceniany co 3 miesiące zgodnie z wytycznymi promowanymi przez Europejskie Stowarzyszenie Badań nad Wątrobą i do 144 tygodni.

Wykorzystanie przechowywanych próbek klinicznych w ramach tego protokołu zostanie przejrzane przez Zespół Protokołu, Naukowy Komitet Sterujący VIROMARKERS oraz EC Horizon Europe.

Szczegółowe cele drugorzędowe obejmują porównanie charakterystyk diagnostycznych dostępnych testów do ilościowego oznaczenia RNA HDV; porównanie odsetków niewykrywalnego RNA HDV w surowicy w 48, 96 i 144 tygodniu za pomocą różnych testów do oznaczania RNA HDV; porównanie kinetyki RNA HDV podczas leczenia BLV za pomocą różnych testów do ilościowego oznaczenia RNA HDV; ocenę, czy poziomy izoform HBsAg, samodzielnie lub w połączeniu z RNA HDV w surowicy na początku badania, mogą przewidywać osiągnięcie odpowiedzi wirusologicznej na BLV w 48, 96 i 144 tygodniu oraz porównanie odsetka odpowiedzi wirusologicznej na BLV według genotypów/podgenotypów HDV.

Informacje z tego badania dotyczące uczestników z przewlekłym zakażeniem HDV będą szybko analizowane i szeroko udostępniane, aby kierować decydentów w zakresie stosowania i monitorowania odpowiedzi na BLV oraz projektowania przyszłych badań.

Dobór uczestników Badanie obejmie 220 pacjentów, którzy rozpoczęli leczenie BLV od stycznia 2023 do lutego 2025, dla których dostępne są retrospektywne dane i próbki. Obserwacja i pobieranie próbek będą przedłużone dla tej populacji w okresie trwania grantu badawczego.

Aby kwalifikować się do włączenia zarówno do części retrospektywnej, jak i prospektywnej badania, uczestnicy muszą mieć ≥18 lat, podpisać świadomą zgodę i spełniać następujące dodatkowe kryteria:

Rozpoznanie przewlekłego zakażenia HDV z lub bez wyrównanej marskości wątroby Rozpoczęcie monoterapii BLV 2mg/dobę zgodnie z kryteriami opisanymi w ostatnich wytycznych praktyki klinicznej dotyczących zakażenia HDV promowanych przez EASL Bycie pod skutecznym leczeniem analogami nukleozydowymi z HBV-DNA <20 IU/ml w momencie rozpoczęcia BLV

Projekt badania Jest to głównie retrospektywne i częściowo prospektywne badanie obserwacyjne, które obejmie pacjentów z przewlekłym zakażeniem HDV, którzy rozpoczęli leczenie BLV w latach 2023-marzec 2025. Uczestnicy byli włączeni do innych projektów i większość była już obserwowana przez pewien czas w ramach tych badań i zostanie włączona do tego nowego badania w momencie podpisania zgody na udział w VIROMARKERS.

Uczestnicy byli obserwowani przez co najmniej 96 tygodni w celu osiągnięcia odpowiedzi wirusologicznej. Podobne kryteria włączenia i obserwacja z dodatkowym pobieraniem i testowaniem próbek (poziomy izoform HBsAg, genotypy/podgenotypy HDV) są planowane dla części prospektywnej, która obejmuje przedłużenie obserwacji dla tych już zrekrutowanych w fazie retrospektywnej. Nie planuje się nowych rekrutacji w ramach tego protokołu.

Cele badania Cele pierwszorzędowe i drugorzędowe są wymienione poniżej.

Pierwszorzędowe Scharakteryzowanie osób z przewlekłym zakażeniem HDV pod względem danych demograficznych, chorób współistniejących i statusu choroby HDV Opis przebiegu wirusologicznego i klinicznego podczas leczenia BLV dla wszystkich uczestników Oszacowanie odsetka uczestników osiągających odpowiedź wirusologiczną (zdefiniowaną jako spadek RNA HDV w surowicy >2 log lub niewykrywalne RNA HDV) i niewykrywalne RNA HDV do 48, 96, 144 tygodni od rozpoczęcia BLV Oszacowanie odsetka pacjentów, którzy osiągają odpowiedź biochemiczną i odpowiedź łączoną (zdefiniowaną jako osiągnięcie odpowiedzi wirusologicznej i normalizacja ALT) w 48, 96, 144 tygodniach od rozpoczęcia BLV Identyfikacja potencjalnych predyktorów odpowiedzi: poziomy RNA HDV na początku, kinetyka RNA HDV w ciągu pierwszych 12 tygodni W podgrupie populacji badanej, zmierzenie poziomów izoform HBsAg, samodzielnie lub w połączeniu z RNA HDV w surowicy na początku i podczas obserwacji oraz genotypów/podgenotypów HDV na początku.

Drugorzędowe W podgrupie populacji badanej z wieloma pomiarami, porównanie charakterystyk diagnostycznych testów do ilościowego oznaczenia RNA HDV firmy Robogene, Altona (testy AltoStar) i Qiagen, w porównaniu ze standardem referencyjnym WHO i próbkami klinicznymi o znanym RNA HDV w surowicy.

Śledzenie i porównanie kinetyki RNA HDV podczas leczenia BLV za pomocą różnych testów do ilościowego oznaczenia RNA HDV.

Porównanie odsetka niewykrywalnego RNA HDV w surowicy do 144 tygodni za pomocą różnych testów do ilościowego oznaczenia RNA HDV.

Wielkość próby Wielkość próby dla części retrospektywnej została zamknięta na 220 osobach. Oczekuje się dalszych rekrutacji w ciągu 3 lat grantu. Nie jest pewne, ilu uczestników rozpocznie leczenie każdego roku. Dzięki istniejącej infrastrukturze, rekrutacja pacjentów wymagających leczenia będzie szybka, mimo że jest to rzadka choroba, więc prognoza to dalsze włączenie maksymalnie 30 dodatkowych osób.

Na podstawie populacji osób wcześniej badanych, które mogą być potencjalnie włączone i obserwowane w VIROMARKERS, oczekuje się, że populacja badana będzie miała medianę wieku 50 lat (zakres 30-70) z porównywalnym rozkładem płci, 95% pochodzenia europejskiego. Wzięły udział ośrodki w różnych lokalizacjach geograficznych w kilku krajach. W przeciwieństwie do tego, próbki prospektywne będą zbierane tylko we Włoszech w ośrodkach projektu w Policlinico Uniwersytetu w Mediolanie i Rzymie (Uniwersytet Tor Vergata).

Dla uczestników z przewlekłym zakażeniem HDV na BLV, istnieją dane z jednego badania, aby oszacować odsetek uczestników, którzy osiągną odpowiedź wirusologiczną do 48 tygodnia i określić moc do badania czynników ryzyka związanych z odpowiedzią.

Zagadnienia statystyczne są podsumowane poniżej. W badaniu rozważa się predyktory binarne oraz ciągłe, np. RNA HDV, nachylenie RNA HDV itp.). Dla tych ostatnich, moc oszacowano z porównania górnego kwartyla czynnika z najniższym kwartylem.

W ostatniej analizie 244 osób z przewlekłym zakażeniem HDV (badanie SAVE-D), 48% osiągnęło niewykrywalne RNA HDV, a 79% odpowiedź wirusologiczną. Korzystając z tych danych, względne ryzyka 2,21 i 2,50 można wykryć z mocą odpowiednio 80% i 90%, zakładając, że 100 uczestników osiągnie niewykrywalne RNA HDV w surowicy). Dla odpowiedzi wirusologicznej i normalizacji ALT, które mają wyższe wskaźniki odpowiedzi, moc będzie większa. Oczekuje się, że izoformy HBsAg zostaną zmierzone w podgrupie 80 osób, więc moc będzie ograniczona dla tej analizy dla ilorazów szans w zakresie 1,8-2,8, w zależności od tempa rekrutacji nowych osób rozpoczynających leczenie.

Dobór uczestników Kryteria włączenia

Aby kwalifikować się do włączenia, uczestnicy muszą:

Mieć > 18 lat Podpisać świadomą zgodę Mieć rozpoznanie zakażenia HDV z lub bez wyrównanej marskości wątroby Rozpocząć monoterapię BLV 2mg/dobę zgodnie z kryteriami opisanymi w ostatnich wytycznych praktyki klinicznej dotyczących zakażenia HDV promowanych przez EASL (EASL CPG 2023) Być pod skutecznym leczeniem analogami nukleozydowymi z HBV-DNA <20 IU/ml w momencie rozpoczęcia BLV Kryteria wykluczenia Niewyrównana choroba wątroby BLV w połączeniu z pegIFN Poprzednie leczenie BLV