10119473 -VIROMARKERS Studio sui Biomarcatori HDV

Per ogni partecipante, è stato prelevato un campione di sangue al basale e ogni 3 mesi durante il trattamento con BLV fino alla settimana 96. Per un sottogruppo di partecipanti, saranno disponibili per l'analisi anche campioni di sangue raccolti fino a 144 settimane di trattamento. Ad ogni punto temporale, l'HDV-RNA sierico è stato quantificato con il test di riferimento RoboGene 2.0 utilizzato negli studi clinici mirati a valutare l'efficacia del BLV [Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025].

Per un sottogruppo di 80 partecipanti seguiti presso l'Unità di Malattie Infettive ed Epatologia dell'Università di Roma Tor Vergata e presso il Policlinico di Milano, la quantificazione dell'RNA dell'HDV utilizzando Altona (saggi AltoStar), Qiagen e RoboGene 2.0 sarà eseguita retrospettivamente su campioni conservati nel periodo 2023-2025, nonché su campioni di nuova raccolta nel periodo 2025-2028. Ciò consentirà un confronto delle prestazioni diagnostiche di questi saggi e della loro capacità di predire il raggiungimento della risposta virologica o dell'HDV-RNA non rilevabile alla settimana 48 e 96 e alla settimana 144 in un sottogruppo. Di conseguenza, per l'analisi di associazione saranno condotte analisi separate in base al metodo di quantificazione utilizzato. Particolare attenzione sarà dedicata al confronto della sensibilità dei suddetti saggi valutando la loro capacità di rilevare la viremia residua da HDV durante il trattamento.

Inoltre, su questo sottogruppo di circa 80 individui, i livelli delle tre diverse isoforme dell'HBsAg (L-, M- e S-HBs) saranno quantificati utilizzando tre diversi saggi ELISA appositamente progettati nei seguenti punti temporali: basale, 48 e 96 settimane e 144 settimane per i pazienti selezionati. Questi saggi hanno dimostrato di avere un'elevata sensibilità (limite di rilevamento per ciascuna proteina è 0,1 ng/ml) e un'elevata specificità, sfruttando rispettivamente un sistema sandwich basato su anticorpi anti-PreS1, anti-PreS2 e anti-S. Per ogni paziente e per ogni punto temporale, i livelli di HBsAg totale, L-HBs, M-HBs e S-HBs saranno quantificati in duplicato.

Nell'analisi, lo stato virologico di ciascun partecipante arruolato sarà valutato ogni 3 mesi secondo le linee guida promosse dall'Associazione Europea per lo Studio del Fegato e fino a 144 settimane.

L'uso di campioni clinici conservati nell'ambito di questo protocollo sarà esaminato dal Team del Protocollo, dal Comitato Scientifico di VIROMARKERS e da EC Horizon Europe.

Obiettivi secondari specifici includono il confronto delle prestazioni diagnostiche dei saggi disponibili per la quantificazione dell'HDV-RNA; confrontare i tassi di HDV-RNA sierico non rilevabile alla settimana 48, 96 e 144 con diversi saggi per l'HDV-RNA; confrontare la cinetica dell'HDV-RNA durante il trattamento con BLV con diversi saggi per la quantificazione dell'HDV-RNA; valutare se i livelli delle isoforme dell'HBsAg, da soli o in combinazione con l'HDV-RNA sierico al basale, possano predire il raggiungimento della risposta virologica al BLV alla settimana 48, 96 e 144 e confrontare il tasso di risposta virologica al BLV in base ai genotipi/sottogenotipi dell'HDV.

Le informazioni utilizzate da questo studio sui partecipanti con CHD saranno rapidamente analizzate e condivise ampiamente per guidare i decisori politici nell'uso e nel monitoraggio della risposta al BLV e per progettare studi futuri.

Selezione dei Partecipanti Lo studio includerà 220 pazienti che hanno iniziato il BLV da gennaio 2023 a febbraio 2025 per i quali sono disponibili dati e campioni retrospettivi. Il follow-up e la raccolta dei campioni saranno estesi per questa popolazione durante il periodo del finanziamento dello studio.

Per essere eleggibili per l'inclusione sia nella parte retrospettiva che in quella prospettica dello studio, i partecipanti devono avere ≥18 anni di età, aver firmato un consenso informato e soddisfare i seguenti criteri aggiuntivi:

Una diagnosi di infezione cronica da HDV con o senza cirrosi compensata Aver iniziato la monoterapia con BLV 2mg/giorno secondo i criteri riportati nelle recenti linee guida di pratica clinica sull'infezione da HDV promosse dall'EASL Essere sotto trattamento efficace con analoghi nucleosidici con HBV-DNA <20 IU/ml al momento dell'inizio del BLV

Disegno dello Studio Si tratta di uno studio osservazionale principalmente retrospettivo e in parte prospettico che arruolerà pazienti con CHD che hanno iniziato il BLV nel periodo 2023-marzo 2025. I partecipanti sono stati arruolati in altri progetti e la maggior parte è già stata seguita per un certo periodo nell'ambito di questi studi e sarà arruolata in questo nuovo studio al momento della firma del consenso a partecipare a VIROMARKERS.

I partecipanti sono stati seguiti per un minimo di 96 settimane per il raggiungimento della risposta virologica. Criteri di inclusione simili e follow-up con raccolta e test aggiuntivi di campioni (livelli delle isoforme dell'HBsAg, genotipi/sottogenotipi dell'HDV) sono previsti per la parte prospettica che comprende un'estensione del follow-up per coloro già reclutati nella fase retrospettiva. Non sono previste nuove iscrizioni per questo protocollo.

Obiettivi dello Studio Gli obiettivi primari e secondari sono elencati di seguito.

Primari Caratterizzare gli individui con CHD in termini di demografia, comorbidità e stato della malattia da HDV Descrivere il decorso virologico e clinico sotto trattamento con BLV per tutti i partecipanti Stimare la proporzione di partecipanti che raggiungono una risposta virologica (definita come un calo dell'HDV RNA sierico >2 log o HDV-RNA non rilevabile) e HDV-RNA non rilevabile entro 48, 96, 144 settimane dall'inizio del BLV Stimare la percentuale di pazienti che raggiungono risposta biochimica e risposta combinata (definita come raggiungimento della risposta virologica e normalizzazione dell'ALT) a 48, 96, 144 settimane dall'inizio del BLV Identificare potenziali predittori di risposta: livelli di HDV-RNA al basale, cinetica dell'HDV-RNA durante le prime 12 settimane In un sottogruppo della popolazione dello studio, misurare i livelli delle isoforme dell'HBsAg, da soli o in combinazione con l'HDV-RNA sierico al basale e durante il follow-up e i genotipi/sottogenotipi dell'HDV al basale.

Secondari In un sottogruppo della popolazione dello studio con misurazioni multiple, confrontare le prestazioni diagnostiche dei saggi per la quantificazione dell'HDV-RNA di Robogene, Altona (saggi AltoStar) e Qiagen, rispetto allo standard di riferimento dell'OMS e a campioni clinici con HDV RNA sierico noto.

Tracciare e confrontare la cinetica dell'HDV-RNA durante il trattamento con BLV utilizzando diversi saggi per la quantificazione dell'HDV-RNA.

Confrontare il tasso di HDV-RNA sierico non rilevabile fino a 144 settimane con diversi saggi per la quantificazione dell'HDV-RNA.

Dimensione del Campione La dimensione del campione per la parte retrospettiva è stata fissata a 220 individui. Sono previsti ulteriori arruolamenti nei 3 anni del finanziamento. Non è certo quanti partecipanti inizieranno il trattamento ogni anno. Con l'infrastruttura presente, il reclutamento di pazienti bisognosi di trattamento sarà rapido nonostante si tratti di una malattia rara, quindi la previsione è di arruolare ulteriormente un massimo di 30 individui aggiuntivi.

Sulla base della popolazione di individui precedentemente studiati e che possono essere potenzialmente arruolati e seguiti in VIROMARKERS, ci si aspetta di avere una popolazione di studio con un'età mediana di 50 anni (range 30-70) con una distribuzione di genere comparabile, 95% di origine europea. Sedi in diverse località geografiche in diversi paesi hanno partecipato. Al contrario, i campioni prospettici saranno raccolti solo in Italia presso i siti del progetto al Policlinico Università di Milano e Roma (Università di Tor Vergata).

Per i partecipanti con CHD in trattamento con BLV, esistono dati di un singolo studio per stimare la percentuale di partecipanti che raggiungerà la risposta virologica entro la settimana 48 e per determinare la potenza per studiare i fattori di rischio correlati alla risposta.

Le considerazioni statistiche sono riassunte di seguito. Nello studio sono considerati predittori sia binari che continui, ad es., HDV RNA, pendenza dell'HDV RNA, ecc.). Per questi ultimi, la potenza è stata stimata confrontando il quartile superiore con quello inferiore del fattore.

In un'analisi recente di 244 persone con CHD (lo studio SAVE-D), il 48% ha raggiunto HDV-RNA non rilevabile e il 79% risposta virologica. Utilizzando questi dati, rischi relativi di 2,21 e 2,50 possono essere rilevati con una potenza rispettivamente dell'80% e del 90%, assumendo che 100 partecipanti raggiungeranno HDV-RNA sierico non rilevabile). Per la risposta virologica e la normalizzazione dell'ALT che hanno tassi di risposta più elevati, la potenza sarà maggiore. Ci aspettiamo di avere le isoforme dell'HBsAg misurate in un sottogruppo di 80 individui, quindi la potenza sarà limitata per questa analisi per OR nell'intervallo di 1,8-2,8, dipendentemente dal tasso di arruolamento dei nuovi iniziatori.

Selezione dei Partecipanti Criteri di Inclusione

Per essere eleggibili per l'arruolamento i partecipanti devono:

Avere > 18 anni di età Firmare un consenso informato Avere una diagnosi di infezione da HDV con o senza cirrosi compensata Aver iniziato la monoterapia con BLV 2mg/giorno secondo i criteri riportati nelle recenti linee guida di pratica clinica sull'infezione da HDV promosse dall'EASL (EASL CPG 2023) Essere sotto trattamento efficace con analoghi nucleosidici con HBV-DNA <20 IU/ml al momento dell'inizio del BLV Criteri di Esclusione Malattia epatica scompensata BLV combinato con pegIFN Trattamento precedente con BLV