10119473 - Estudo de Biomarcadores HDV VIROMARKERS

Para cada participante, foi obtida uma amostra de sangue na linha de base e de 3 em 3 meses durante o tratamento com BLV até à semana 96. Para um subconjunto de participantes, as amostras de sangue recolhidas até 144 semanas de tratamento também estarão disponíveis para análise. Em cada momento, o RNA do HDV no soro foi quantificado com o ensaio de referência RoboGene 2.0 utilizado em estudos clínicos destinados a avaliar a eficácia do BLV [Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025].

Para um subconjunto de 80 participantes acompanhados na Unidade de Doenças Infeciosas e Hepatologia da Universidade de Roma Tor Vergata e no Policlínico de Milão, a quantificação do RNA do HDV utilizando Altona (ensaios AltoStar), Qiagen e RoboGene 2.0 será realizada retrospetivamente em amostras armazenadas em 2023-2025, bem como em amostras recém-recolhidas em 2025-2028. Isto permitirá uma comparação do desempenho diagnóstico destes ensaios e da sua capacidade de prever a obtenção de resposta virológica ou RNA do HDV indetetável na semana 48 e 96 e na semana 144 num subconjunto. Como tal, para a análise de associação, serão realizadas análises separadas de acordo com o método de quantificação utilizado. Será dedicada particular atenção à comparação da sensibilidade dos ensaios acima mencionados, avaliando a sua capacidade de detetar viremia residual do HDV durante o tratamento.

Além disso, neste subconjunto de aproximadamente 80 indivíduos, os níveis das três diferentes isoformas do HBsAg (L-, M- e S-HBs) serão quantificados utilizando três diferentes ensaios ELISA concebidos ad-hoc nos seguintes momentos: linha de base, 48 e 96 semanas e 144 semanas para pacientes selecionados. Estes ensaios demonstraram ter alta sensibilidade (limite de deteção para cada proteína é 0,1 ng/ml) e alta especificidade, aproveitando um sistema de sanduíche baseado em anticorpos anti-PreS1, anti-PreS2 e anti-S, respetivamente. Para cada paciente e para cada momento, os níveis totais de HBsAg, L-HBs, M-HBs e S-HBs serão quantificados em duplicado.

Na análise, o estado virológico de cada participante inscrito será avaliado de 3 em 3 meses de acordo com as diretrizes promovidas pela Associação Europeia para o Estudo do Fígado e até 144 semanas.

A utilização de espécimes clínicos armazenados dentro deste protocolo será revista pela Equipa do Protocolo, pelo Comité de Direção Científica do VIROMARKERS e pelo EC Horizon Europe.

Objetivos secundários específicos incluem comparar os desempenhos diagnósticos dos ensaios disponíveis para quantificação do RNA do HDV; comparar as taxas de RNA do HDV indetetável no soro na semana 48, 96 e 144 por diferentes ensaios de RNA do HDV; comparar a cinética do RNA do HDV durante o tratamento com BLV por diferentes ensaios para quantificação do RNA do HDV; avaliar se os níveis das isoformas do HBsAg, sozinhos ou em combinação com o RNA do HDV no soro na linha de base, podem prever a obtenção de resposta virológica ao BLV na semana 48, 96 e 144 e comparar a taxa de resposta virológica ao BLV de acordo com os genótipos/subgenótipos do HDV.

A informação utilizada deste estudo sobre participantes com CHD será rapidamente analisada e partilhada amplamente para orientar os decisores políticos para a utilização e monitorização da resposta ao BLV e para desenhar estudos futuros.

Seleção de Participantes O estudo incluirá 220 pacientes que iniciaram BLV de janeiro de 2023 a fevereiro de 2025 para os quais dados retrospetivos e amostras estão disponíveis. O acompanhamento e a recolha de amostras serão estendidos para esta população durante o período da bolsa de estudo.

Para serem elegíveis para inclusão tanto na parte retrospetiva como prospetiva do estudo, os participantes têm de ter ≥18 anos de idade, ter assinado um consentimento informado e satisfazer os seguintes critérios adicionais:

Um diagnóstico de infeção crónica por HDV com ou sem cirrose compensada Ter iniciado monoterapia com BLV 2mg/dia de acordo com os critérios reportados nas recentes diretrizes de prática clínica sobre infeção por HDV promovidas pela EASL Estar sob tratamento eficaz com análogos nucleosídeos com HBV-DNA <20 UI/ml no momento de iniciar BLV

Desenho do Estudo Este é um estudo observacional maioritariamente retrospetivo e parcialmente prospetivo que irá recrutar pacientes com CHD que iniciaram BLV durante 2023-março de 2025. Os participantes foram inscritos noutros projetos e a maioria já foi acompanhada durante algum tempo como parte desses estudos e será inscrita neste novo estudo no momento da assinatura do consentimento para participar no VIROMARKERS.

Os participantes foram acompanhados por um mínimo de 96 semanas para obtenção de resposta virológica. Critérios de inclusão semelhantes e acompanhamento com recolha e teste adicionais de amostras (níveis das isoformas do HBsAg, genótipos/subgenótipos do HDV) estão planeados para a parte prospetiva que engloba uma extensão do acompanhamento para aqueles já recrutados na fase retrospetiva. Não estão planeados novos recrutamentos para este protocolo.

Objetivos do Estudo Os objetivos primários e secundários estão listados abaixo.

Primário Caracterizar indivíduos com CHD em termos de demografia, comorbilidades e estado da doença por HDV Descrever o curso virológico e clínico sob tratamento com BLV para todos os participantes Estimar a proporção de participantes que alcançam uma resposta virológica (definida como um declínio no RNA do HDV no soro >2 log ou RNA do HDV indetetável) e RNA do HDV indetetável até 48, 96, 144 semanas após o início do BLV Estimar a percentagem de pacientes que alcançam resposta bioquímica e resposta combinada (definida como obtenção de resposta virológica e normalização da ALT) às 48, 96, 144 semanas após o início do BLV Identificar potenciais preditores de resposta: níveis de RNA do HDV na linha de base, cinética do RNA do HDV durante as primeiras 12 semanas Num subconjunto da população do estudo, medir os níveis das isoformas do HBsAg, sozinhos ou em combinação com o RNA do HDV no soro na linha de base e durante o acompanhamento e os genótipos/subgenótipos do HDV na linha de base.

Secundário Num subconjunto da população do estudo com múltiplas medições, comparar os desempenhos diagnósticos dos ensaios para quantificação do RNA do HDV por Robogene, Altona (ensaios AltoStar) e Qiagen, contra o padrão de referência da OMS e amostras clínicas com RNA do HDV no soro conhecido.

Traçar e comparar a cinética do RNA do HDV durante o tratamento com BLV utilizando diferentes ensaios para quantificação do RNA do HDV.

Comparar a taxa de RNA do HDV indetetável no soro até 144 semanas por diferentes ensaios para quantificação do RNA do HDV.

Tamanho da Amostra O tamanho da amostra para a parte retrospetiva foi fechado em 220 indivíduos. São esperados mais recrutamentos ao longo dos 3 anos da bolsa. É incerto quantos participantes iniciarão tratamento cada ano. Com a infraestrutura que está em vigor, o recrutamento de doentes que necessitam de tratamento será rápido, embora seja uma doença rara, portanto a previsão é recrutar no máximo mais 30 indivíduos.

Com base na população de indivíduos previamente estudados e que podem ser potencialmente inscritos e acompanhados no VIROMARKERS, a expectativa é ter uma população de estudo com uma idade mediana de 50 anos (intervalo 30-70) com uma distribuição de género comparável, 95% de origem europeia. Locais em diversas localizações geográficas em vários países participaram. Em contraste, as amostras prospetivas serão recolhidas apenas em Itália nos locais do projeto no Policlínico da Universidade de Milão e Roma (Universidade de Tor Vergata).

Para participantes com CHD em BLV, existem dados de um único ensaio para estimar a percentagem de participantes que alcançarão resposta virológica até à semana 48 e para determinar o poder para estudar fatores de risco relacionados com a resposta.

Considerações estatísticas são resumidas abaixo. No estudo são considerados preditores binários bem como contínuos, por exemplo, RNA do HDV, declive do RNA do HDV, etc.). Para estes últimos, o poder foi estimado a partir da comparação do quartil superior versus o quartil mais baixo do fator.

Numa análise recente de 244 pessoas com CHD (o estudo SAVE-D), 48% alcançaram RNA do HDV indetetável e 79% resposta virológica. Utilizando estes dados, riscos relativos de 2,21 e 2,50 podem ser detetados com 80% e 90% de poder, respetivamente, assumindo que 100 participantes alcançarão RNA do HDV no soro indetetável). Para resposta virológica e normalização da ALT que têm taxas de resposta mais altas, o poder será maior. Esperamos ter isoformas do HBsAg medidas num subconjunto de 80 indivíduos, portanto o poder será limitado para esta análise para ORs na gama de 1,8-2,8, dependendo da taxa de recrutamento de novos iniciantes.

Seleção de Participantes Critérios de Inclusão

Para serem elegíveis para inscrição os participantes devem:

Ter > 18 anos de idade Assinar um consentimento informado Ter um diagnóstico de infeção por HDV com ou sem cirrose compensada Ter iniciado monoterapia com BLV 2mg/dia de acordo com os critérios reportados nas recentes diretrizes de prática clínica sobre infeção por HDV promovidas pela EASL (EASL CPG 2023) Estar sob tratamento eficaz com análogos nucleosídeos com HBV-DNA <20 UI/ml no momento de iniciar BLV Critérios de Exclusão Doença hepática descompensada BLV combinado com pegIFN Tratamento anterior com BLV