10119473 -VIROMARKERS HDV Biomarkeritutkimus

Jokaiselta osallistujalta otettiin verinäyte alussa ja kolmen kuukauden välein BLV-hoidon aikana aina viikkoon 96 asti. Osalle osallistujista myös viikkoon 144 asti kerätyt verinäytteet tullaan analysoimaan. Jokaisella aikapisteellä seerumin HDV-RNA määritettiin käyttämällä viitearvona RoboGene 2.0 -testiä, jota on käytetty kliinisissä tutkimuksissa BLV:n tehon arvioimiseksi [Wedemeyer et al., 2023; Degasperi et al., J Hepatol 2025].

80 osallistujan osajoukossa, jota seurattiin Tor Vergatan yliopiston tartuntatautien ja hepatologian yksikössä Roomassa sekä Milanon yliopistosairaalassa, HDV-RNA:n määritys käyttäen Altona (AltoStar-testejä), Qiagenia ja RoboGene 2.0:ta suoritetaan retrospektiivisesti vuosina 2023–2025 varastoiduista näytteistä sekä vuosina 2025–2028 uusista näytteistä. Tämä mahdollistaa näiden testien diagnostisten ominaisuuksien vertailun ja niiden kyvyn ennustaa virologisen vastauksen tai havaitsemattoman HDV-RNA:n saavuttamista viikoilla 48 ja 96 sekä viikolla 144 osajoukossa. Siten assosiaatioanalyysissä suoritetaan erilliset analyysit käytetyn määritysmenetelmän mukaan. Erityistä huomiota kiinnitetään edellä mainittujen testien herkkyyden vertailuun arvioimalla niiden kykyä havaita jäännös-HDV-viremiaa hoidon aikana.

Lisäksi tässä noin 80 henkilön osajoukossa kolmen eri HBsAg-isoformin (L-, M- ja S-HBs) pitoisuudet määritetään käyttäen kolmea erityisesti suunniteltua ELISA-testiä seuraavina aikapisteinä: alussa, viikoilla 48 ja 96 sekä viikolla 144 valituilla potilailla. Näiden testien on osoitettu olevan erittäin herkkiä (kunkin proteiinin havaitsemisraja on 0,1 ng/ml) ja erittäin spesifisiä hyödyntämällä vastaavasti anti-PreS1-, anti-PreS2- ja anti-S-vasta-aineisiin perustuvaa sandwich-järjestelmää. Jokaiselle potilaalle ja jokaiselle aikapisteelle kokonais-HBsAg:n, L-HBs:n, M-HBs:n ja S-HBs:n pitoisuudet määritetään kahdessa kopiossa.

Analyysissä kunkin rekrytoidun osallistujan virologinen tila arvioidaan kolmen kuukauden välein Euroopan maksatutkimusseuran edistämien suositusten mukaisesti aina viikkoon 144 asti.

Varastoitujen kliinisten näytteiden käyttö tässä tutkimussuunnitelmassa tarkastetaan Protokollatiimin, VIROMARKERS-tutkimuksen tieteellisen ohjauskomitean ja EC Horizon Euroopan toimesta.

Erityisiä toissijaisia tavoitteita ovat saatavilla olevien HDV-RNA-määritystestien diagnostisten ominaisuuksien vertailu; eri HDV-RNA-testeillä saavutettujen havaitsemattoman seerumin HDV-RNA:n osuuksien vertailu viikoilla 48, 96 ja 144; HDV-RNA:n kinetiikan vertailu BLV-hoidon aikana eri HDV-RNA-määritystesteillä; arviointi, voivatko HBsAg-isoformien pitoisuudet yksinään tai yhdessä seerumin HDV-RNA:n kanssa alussa ennustaa virologisen vastauksen saavuttamista BLV:hen viikoilla 48, 96 ja 144; sekä virologisen vastauksen osuuksien vertailu BLV:hen HDV-genotyyppien/alagenotyyppien mukaan.

Tässä tutkimuksessa kerätty tieto kroonista HDV-tartuntaa sairastavista osallistujista analysoidaan ja jaetaan nopeasti laajasti ohjatakseen päättäjiä BLV:n käytössä ja vastauksen seurannassa sekä suunniteltaessa tulevia tutkimuksia.

Osallistujien valinta Tutkimukseen otetaan mukaan 220 potilasta, jotka aloittivat BLV:n tammikuun 2023 ja helmikuun 2025 välisenä aikana ja joilta on saatavilla retrospektiivisiä tietoja ja näytteitä. Seuranta- ja näytteenkeruuaikaa jatketaan tälle väestölle tutkimusavustuksen ajan.

Ollakseen kelvollisia sekä tutkimuksen retrospektiiviseen että prospektiiviseen osaan, osallistujien on oltava ≥18-vuotiaita, allekirjoitettava tietoon perustuva suostumus ja täytettävä seuraavat lisäkriteerit:

Krooninen HDV-tartunta diagnosoituna ilman tai kompensoituneella kirroosilla BLV-monoterapian aloittaminen 2 mg/päivä viimeisimpien EASL:n edistämien HDV-tartunnan kliinisten käytäntösuositusten kriteerien mukaisesti Tehokkaan nukleosidianalogi-hoidon alaisena HBV-DNA <20 IU/ml BLV:n aloitushetkellä

Tutkimussuunnittelu Tämä on pääosin retrospektiivinen ja osittain prospektiivinen havainnointitutkimus, joka rekrytoi kroonista HDV-tartuntaa sairastavia potilaita, jotka aloittivat BLV:n vuosina 2023–maaliskuu 2025. Osallistujat on rekrytoitu muihin projekteihin, ja suurin osa heistä on jo seurattu jonkin aikaa osana näitä tutkimuksia, ja he rekrytoidaan tähän uuteen tutkimukseen allekirjoittaessaan suostumuksen osallistua VIROMARKERS-tutkimukseen.

Osallistujia on seurattu vähintään 96 viikkoa virologisen vastauksen saavuttamiseksi. Samanlaiset sisällytyskriteerit ja seuranta lisänäytteenoton ja -testauksen (HBsAg-isoformien pitoisuudet, HDV-genotyypit/alagenotyypit) kanssa on suunniteltu prospektiiviselle osalle, joka kattaa seurannan jatkamisen niille, jotka on jo rekrytoitu retrospektiivisessa vaiheessa. Uusia rekrytointeja ei ole suunniteltu tähän tutkimussuunnitelmaan.

Tutkimustavoitteet Ensisijaiset ja toissijaiset tavoitteet on lueteltu alla.

Ensisijaiset Kuvaillaan kroonista HDV-tartuntaa sairastavat yksilöt demografian, komorbiditeettien ja HDV-taudin tilan suhteen Kuvataan kaikkien osallistujien virologinen ja kliininen kulku BLV-hoidon alla Arvioidaan osallistujien osuus, jotka saavuttavat virologisen vastauksen (määriteltynä seerumin HDV-RNA:n laskuna >2 log tai havaitsematon HDV-RNA) ja havaitsemattoman HDV-RNA:n viikoilla 48, 96, 144 BLV:n aloituksesta Arvioidaan potilaiden prosenttiosuus, jotka saavuttavat biokemiallisen vastauksen ja yhdistetyn vastauksen (määriteltynä virologisen vastauksen saavuttaminen ja ALT:n normalisoituminen) viikoilla 48, 96, 144 BLV:n aloituksesta Tunnistetaan mahdolliset vastauksen ennustajat: HDV-RNA:n pitoisuudet alussa, HDV-RNA:n kinetiikka ensimmäisten 12 viikon aikana Osajoukossa tutkimusväestöstä mitataan HBsAg-isoformien pitoisuudet yksinään tai yhdessä seerumin HDV-RNA:n kanssa alussa ja seurannan aikana sekä HDV-genotyypit/alagenotyypit alussa.

Toissijaiset Osajoukossa tutkimusväestöstä, jolla on useita mittauksia, verrataan Robogene-, Altona (AltoStar-testit) ja Qiagen -HDV-RNA-määritystestien diagnostisia ominaisuuksia WHO:n vertailustandardia ja tunnettua seerumin HDV-RNA:ta sisältäviä kliinisiä näytteitä vastaan.

Seurataan ja verrataan HDV-RNA:n kinetiikkaa BLV-hoidon aikana käyttäen eri HDV-RNA-määritystestejä.

Verrataan eri HDV-RNA-testeillä saavutettuja havaitsemattoman seerumin HDV-RNA:n osuuksia aina viikkoon 144 asti.

Otoskoko Retrospektiivisen osan otoskoko on suljettu 220 henkilöön. Odotetaan lisärekrytointeja kolmen vuoden avustusjakson aikana. On epävarmaa, kuinka monta osallistujaa aloittaa hoidon vuosittain. Olemassa olevan infrastruktuurin ansiosta hoidon tarvitsevien potilaiden rekrytointi on nopeaa, vaikka kyse on harvinaisesta taudista, joten ennusteena on rekrytoida enintään 30 lisähenkilöä.

Aikaisemmin tutkittujen ja mahdollisesti VIROMARKERS-tutkimukseen rekrytoitavien ja seurattavien henkilöiden väestön perusteella odotetaan tutkimusväestön olevan mediaani-iältään 50-vuotias (vaihteluväli 30–70) ja sukupuolijakaumaltaan verrannollinen, 95 % eurooppalaista alkuperää. Useiden maiden eri maantieteellisillä sijainneilla olevat tutkimuspaikat ovat osallistuneet. Sitä vastoin prospektiiviset näytteet kerätään vain Italiassa hankkeen tutkimuspaikoilla Milanon yliopistosairaalassa ja Roomassa (Tor Vergatan yliopisto).

Kroonista HDV-tartuntaa sairastaville BLV:llä hoidetuille osallistujille on olemassa yhden kokeen tiedot arvioimaan osallistujien prosenttiosuutta, joka saavuttaa virologisen vastauksen viikolla 48, ja määrittämään teho vastaukseen liittyvien riskitekijöiden tutkimiseksi.

Tilastolliset näkökohdat on koottu alla. Tutkimuksessa tarkastellaan sekä binäärisiä että jatkuvia ennustetekijöitä (esim. HDV-RNA, HDV-RNA:n kaltevuus jne.). Jälkimmäisille teho arvioitiin vertaamalla tekijän ylintä ja alinta kvartiilia.

Viimeisimmässä 244 kroonista HDV-tartuntaa sairastavan henkilön analyysissä (SAVE-D-tutkimus) 48 % saavutti havaitsemattoman HDV-RNA:n ja 79 % virologisen vastauksen. Näitä tietoja käyttäen suhteelliset riskit 2,21 ja 2,50 voidaan havaita vastaavasti 80 %:n ja 90 %:n teholla olettaen, että 100 osallistujaa saavuttaa havaitsemattoman seerumin HDV-RNA:n). Virologiselle vastaukselle ja ALT:n normalisaatiolle, joilla on korkeammat vastausprosentit, teho on suurempi. Odotamme, että HBsAg-isoformien pitoisuudet mitataan 80 henkilön osajoukossa, joten tämän analyysin teho on rajoitettu OR-arvoille alueella 1,8–2,8 riippuen uusien aloittajien rekrytointiprosentista.

Osallistujien valinta Sisällytyskriteerit

Ollakseen kelvollisia rekrytointiin osallistujien on:

Oltava > 18-vuotiaita Allekirjoitettava tietoon perustuva suostumus HDV-tartunnan diagnoosi ilman tai kompensoituneella kirroosilla BLV-monoterapian aloittaminen 2 mg/päivä viimeisimpien EASL:n (EASL CPG 2023) edistämien HDV-tartunnan kliinisten käytäntösuositusten kriteerien mukaisesti Tehokkaan nukleosidianalogi-hoidon alaisena HBV-DNA <20 IU/ml BLV:n aloitushetkellä Poissulkemiskriteerit Dekompensoitunut maksasairaus BLV yhdistettynä pegIFN:iin Aikaisempi BLV-hoito