조혈 줄기 세포 이식 후 CTL 항-DP 주입의 I상 연구 (CTL-DP 01)

이론적 근거 이식편 대 종양 효과에도 불구하고 재발은 동종 조혈모세포이식 환자의 이환율과 사망률의 주요 원인 중 하나로 남아 있습니다. allo-HSCT 후 사망의 40~50%는 질병 재발로 인한 것입니다. 재발의 경우 예후가 매우 나쁘고 입양 세포 요법만을 사용하는 경우 질병 부담이 여전히 남아 있습니다. 이식 후 재발의 경우 3년 전체 생존(OS)은 암울합니다. 이식 후 기간은 감염에 대한 취약성 증가 및 재발 위험으로 이어지는 면역결핍의 연장된 단계를 특징으로 합니다. 이러한 이유로 향후 재발을 방지하기 위해 CR(완전 관해) 환자에 대한 유지 요법 또는 선제적 요법이 현재 고려되고 있습니다. allo-HSCT 후 기증자 T 림프구가 수혜자 HLA 항원을 인식하면 다른 결과가 나타날 수 있습니다. 한편으로 T 세포는 악성 세포에 존재하는 항원을 인식하고 잔여 질병을 근절하거나 종양 재발을 예방할 수 있습니다. 반면에 선택되지 않은 T 세포의 주입은 이식편대숙주병(GVHD)을 유발할 수 있습니다.

HLA-DPB1은 염색체 6p21.3의 다른 클래스 II 유전자좌에 중심체에 위치한 MHC 클래스 II 분자 중 하나입니다. 증가된 재조합 사건은 HLA-DP 유전자좌와 다른 클래스 II 유전자좌 사이의 영역에서 발견되며, 이는 HLA-DP(* HLA-DP: Human Leucocytes Antigen (DP allele))와 나머지 MHC 일배체형. 이러한 이유로 다른 고전적인 HLA 분자 외에 DPB1과 일치하는 기증자를 찾기가 어렵습니다. 형제자매 기증자의 경우 비호환 비율이 10.9%로 높게 추정되었으며 비혈연 기증자의 경우 불일치 비율이 최대 89%에 달할 수 있습니다. HLA-DPB1은 종종 기증자 선택에서 고려되지 않습니다. 그러나 HLA-DPB1 일치 상태는 GVL 및 GVHD에 영향을 미칩니다. HSCT 수혜자에서 DPB1에 대한 일치는 다른 HLA 분자의 일치 상태에 관계없이 질병 재발 위험이 상당히 증가하는 것과 관련이 있습니다. HLA 클래스 II 분자 발현은 주로 조혈 세포로 제한됩니다. 따라서 HLA 클래스 II의 불일치가 GVHD 없이 선택적 GVL 반응성을 유도할 수 있다고 예상할 수 있습니다. 그러나 HLA 클래스 II 발현은 일부 컨디셔닝 요법 또는 감염 이후의 경우와 같이 GVHD의 위험이 있는 전 염증성 사이토카인에 노출된 후 다양한 조직에서 상향 조절될 수 있습니다.

일반 인구에서 다른 HLA-DPB1 대립유전자의 빈도는 잘 알려져 있습니다. HLA-DPB1*04:01이 가장 빈번합니다(70.5%). HLA-DPB1*02:01 및 HLA-DPB1*03:01은 각각 32% 및 20%를 나타냅니다. 백혈병 세포의 96%는 HLA-DPB1*04:01, 03:01 및 02:01에 대한 단 3개의 CTL 클론으로 잠재적으로 표적이 될 수 있습니다.

HLA-DP-발현 B 세포 및 골수성 악성종양은 HLA-DP-특이적 CD4+ 세포에 의해 인식되고 용해될 수 있다(CD4+: 분화 클러스터 4+). 대부분의 백혈병 세포(AML, ALL, CLL)는 HLA-DP를 발현합니다. HLA-DPB1*04:01을 특이적으로 인식하는 CD4+ 세포독성 T 세포(CTL) 클론을 식별할 수 있으며 HLA-DPB1*04:01 양성 백혈병 세포를 죽일 수 있는 것으로 입증되었습니다.

또한, HLA-DP 특이 CD4+ T 세포가 이식편대숙주병의 존재 또는 부재하에서 이식편대백혈병 반응성을 유도할 수 있음이 이미 밝혀졌습니다. 이 연구에서 HLA-DP 특이 CD4+ T 세포의 존재는 DLI에 대한 임상적 반응과 상관관계가 있었습니다.

Inserm 부대 1232 팀 (H. 이 프로젝트의 공동 연구자인 Vié, B. Clemenceau)는 백혈병 돌풍(70% ). 이 클론은 Vivien R et al.에 의해 "The doubling potential of T lymphocytes allow clinical-grade production of a bank of a genetically modified monoclonal T-cell populations"에 자세히 설명되어 있습니다. 세포 요법. 2018년 3월 20(3):436-452.

여러 임상 시험에서 동종 조혈모세포이식 후 종양 재발을 치료하거나 면역 재구성을 가속화하기 위해 자살 유전자로 형질도입된 기증자 림프구를 주입할 가능성을 평가했습니다. 급성 주입 관련 독성은 보고되지 않았습니다. Ganciclovir는 일부 환자에서 GVHD를 조절하여 TK+ 세포(티로신 키나아제 +)를 빠르게 제거하는 데 사용되었습니다.

클론은 HLA-DP만 다른 두 개체군 사이에서 혼합 림프구 배양(MLR)을 수행한 후 반응성 T 세포를 고효율로 형질도입하고 최종적으로 원하는 특성에 대해 각 클론을 선택하기 전에 직접 클로닝하여 얻은 것입니다. 임상 등급의 Herpes-simplex-virus-TK 벡터 덕분에 클론은 자살 유전자를 품고 있으며 ganciclovir(GCV)가 있으면 죽일 수 있습니다.

이 클론은 효율성과 안전성 측면에서 몇 가지 중요한 특성을 나타냅니다. 클론은 해동 후 안정적입니다. 해동 후(적어도 백만 번 이상) 시험관 내에서 세포독성 능력을 유지하면서 성장 및 증폭될 수 있습니다. TH1형 사이토카인을 대량으로 생산합니다.

연구 중인 CTL antiDP의 안전성과 관련하여 간시클로비르에 대한 특이성과 민감성의 두 가지 주요 사항을 강조했습니다.

특성. 클론은 HLA-DPB1*04:01에 특정합니다. HLA-DPB1*04:01(HLA-A, B, C, DQ, DR에 대해 동일함)에 대해 동형접합인 기증자에 대해 클론을 선택했습니다. 특이성 테스트는 HLA-DPB1*:04:01의 인식을 확인했습니다. 그러나 기술된 HLA-DPB1 대립유전자는 다양하며(현재까지 447개의 단백질 IMGT(ImMunoGeneTics 데이터베이스)/HLA 릴리스, www.ebi.ac.uk/ipd/index.html), 교차 반응을 철저하게 예측하는 것은 불가능합니다. 특정 세포주에 대해 관찰된 HLA-DPB1*04:02 및 HLA-DPB1*05:01에 대해 일부 이상). 우리가 allo-HSCT의 맥락에 있기 때문에 위험은 기증자 세포의 인식과 그에 따른 이식편 거부의 가능성입니다. 이러한 이유로 우리는 기증자 세포가 클론의 표적으로 사용되는 사전 포함 테스트를 수행할 것입니다.

ganciclovir (GCV)에 대한 민감성 : GCV 존재 하에서의 증식 시험은 기존 치료 동안 도달한 GCV 혈중 농도에 따라 충분한 마진으로 GCV의 효능을 확인합니다.

우리 동료들의 데이터는 이식 후 첫 달 동안 검출할 수 있는 T 세포의 수가 적고, Treg 세포의 상대적 증가는 클론이 기증자 T 세포에 의해 빠르게 제거되지 않을 수 있음을 의미합니다.

동종 이식 후 HLA-DPB1*04:01을 인식하는 자살 유전자 형질도입 CD4+ T 세포 클론을 투여하는 이유는 다음과 같이 요약할 수 있습니다.

1. 혈액 악성 종양의 재발은 이러한 유형의 이식에서 여전히 심각한 문제입니다.

3. 면역 재구성이 매우 지연되어 타사 T 세포 클론의 주입이 가능합니다.

4. CTL 주입 후 GVHD의 경우 ganciclovir를 사용하여 CTL 클론을 신속하게 제거할 수 있습니다.

가설 우리는 동종이계 이식 후 HLA-DPB1*04:01에 대한 제3자 자살 유전자 형질도입 T 세포 클론의 주입이 안전할 수 있고 혈액 악성 종양의 재발 가능성을 예방할 수 있다고 가정합니다.

방법론에 대한 자세한 설명(필요 피험자 수) HLA-DPB1*04:01 및 aHLA-DPB1*04:01을 모두 나타내는 동종 이식 후보 환자(거의 100% 사례) -DPB1*04:01 음성, 일단 사이클로스포린 및/또는 마이코페놀레이트 모페틸에 의한 면역 억제가 중단되면 이식 후 4-5개월에 T 세포 클론의 단일 주입을 받도록 제안될 것입니다. 종양 세포에 의한 HLA-DPB1*의 발현은 세포측정법 또는 면역조직화학법에 의해 확인될 것이다. 공여자 세포에 대한 클론의 가능한 모든 교차 반응도 배제됩니다.

표준 3 + 3상 1 용량 증량 연구가 사용될 것입니다:

1단계: 1 x 104 cells/kg, 2단계: 5 x 104 cells/kg, 3단계: 25 x 104 cells/kg, 4단계: 50 x 104 cells/kg, 5단계: 100 x 104 cells/kg 킬로그램.

컨디셔닝 요법: 제한 없음

혼합 키메라증 또는 재발의 경우 DLI 사용은 필요한 경우 클론 주입 후 허용됩니다. CTL 클론 주입 후 급성 GVHD의 경우, 간시클로비르가 14일 동안 투여될 것이다(5mg/kg의 용량으로 1일 2회).