Vaiheen I tutkimus CTL-anti-DP-infuusion jälkeisestä hematopoieettisesta kantasolusiirrosta (CTL-DP 01)

Lähtökohdat Siirrä vs. kasvain -vaikutuksesta huolimatta uusiutuminen on edelleen yksi tärkeimmistä sairastuvuuden ja kuolleisuuden syistä allo-HSCT:n vastaanottajilla. 40–50 % allo-HSCT:n jälkeisistä kuolemista johtuu taudin uusiutumisesta. Relapsin tapauksessa ennuste on erittäin huono ja sairaustaakka on edelleen haaste adoptiivisen soluterapian käytölle. 3 vuoden kokonaiseloonjäämisaika (OS) siirroksen jälkeisen uusiutumisen tapauksessa on surkea. Elinsiirron jälkeiselle ajanjaksolle on ominaista pitkittynyt immuunipuutosvaihe, joka johtaa lisääntyneeseen alttiuteen infektioille ja uusiutumisriskiin. Tästä syystä CR-potilaiden (täydellinen remissio) ylläpito- tai ennaltaehkäisevien hoitojen katsotaan nyt estävän tulevaa uusiutumista. Allo-HSCT:n jälkeen luovuttajien T-lymfosyyttien vastaanottama HLA-antigeenien tunnistaminen voi johtaa erilaisiin seurauksiin. Toisaalta T-solut voivat tunnistaa pahanlaatuisissa soluissa olevat antigeenit ja hävittää jäännössairauden tai estää kasvaimen uusiutumisen. Toisaalta valitsemattomien T-solujen injektio voi indusoida graft-versus-host-disease (GVHD) -taudin.

HLA-DPB1 on yksi MHC-luokan II molekyyleistä, joka sijaitsee sentromeerisesti muihin luokan II lokuksiin kromosomissa 6p21.3. Lisääntyneitä rekombinaatiotapahtumia löytyy HLA-DP-lokusten ja muiden luokan II lokusten väliseltä alueelta, mikä selittää HLA-DP:n (*HLA-DP: Human Leucocytes Antigen (DP-alleeli)) ja solujen välisen kytkentäepätasapainon (LD) suhteellisen puutteen. muu MHC-haplotyyppi. Tästä syystä on vaikea löytää DPB1:lle sopivaa luovuttajaa muiden klassisten HLA-molekyylien lisäksi. Sisarusluovuttajilla yhteensopimattomuusasteen on arvioitu olevan jopa 10,9 % ja riippumattomilla luovuttajilla yhteensopimattomuusaste voi olla jopa 89 %. HLA-DPB1:tä ei usein oteta huomioon luovuttajan valinnassa. HLA-DPB1-sovitustila vaikuttaa kuitenkin GVL:hen ja GVHD:hen. HSCT:n saajilla DPB1:n yhteensopivuus liittyy merkittävästi lisääntyneeseen sairauden uusiutumisen riskiin, riippumatta muiden HLA-molekyylien yhteensopivuustilasta. HLA-luokan II molekyylien ilmentyminen rajoittuu pääasiassa hematopoieettisiin soluihin. Siksi voitaisiin ennakoida, että HLA-luokan II yhteensopimattomuus voisi indusoida selektiivisen GVL-reaktiivisuuden ilman GVHD:tä. HLA-luokan II ilmentyminen voi kuitenkin lisääntyä useissa kudoksissa altistumisen jälkeen proinflammatorisille sytokiineille, mikä aiheuttaa GVHD:n riskin, kuten on tapana joidenkin hoito-ohjelmien tai infektioiden jälkeen.

Erilaisten HLA-DPB1-alleelien esiintymistiheys väestössä tunnetaan hyvin: HLA-DPB1*04:01 on yleisin (70,5 %). HLA-DPB1*02:01 ja HLA-DPB1*03:01 edustavat 32 % ja 20 % vastaavasti. 96 % leukemiasoluista voitiin mahdollisesti kohdistaa vain kolmella CTL-kloonilla, jotka on suunnattu HLA-DPB1*04:01, 03:01 ja 02:01 vastaan.

HLA-DP-spesifiset CD4+-solut (CD4+: erilaistumisklusteri 4+) voivat tunnistaa ja hajottaa HLA-DP:tä ilmentävät B-solu- ja myeloidiset pahanlaatuiset kasvaimet. Suurin osa leukemiasoluista (AML, ALL, CLL) ilmentää HLA-DP:tä. CD4+ sytotoksiset T-solut (CTL) -kloonit, jotka tunnistavat spesifisesti HLA-DPB1*04:01:n, voidaan tunnistaa, ja niiden on osoitettu pystyvän tappamaan HLA-DPB1*04:01-positiivisia leukemiasoluja.

Lisäksi on jo osoitettu, että HLA-DP-spesifiset CD4+-T-solut voivat indusoida graft-versus-leukemia-reaktiivisuutta graft-versus-host -sairauden läsnä ollessa tai ilman sitä. Tässä tutkimuksessa HLA-DP-spesifisten CD4+ T-solujen läsnäolo korreloi kliinisen vasteen kanssa DLI:lle.

Inserm-yksikön 1232 joukkue (H. Vié, B. Clemenceau, molemmat tämän projektin tutkijat) on kehittänyt itsemurhageenitransdusoidun CD4+ T-solukloonin, joka tunnistaa HLA-DPB1*401:n, joka on yleisin leukeemisten blastien ekspressoima HLA-DPB1-alleeli (70 % ). Tämä klooni on kuvattu yksityiskohtaisesti julkaisussa: "T-lymfosyyttien kaksinkertaistuva potentiaali mahdollistaa geneettisesti muunnettujen monoklonaalisten T-solupopulaatioiden pankin kliinisen laadun tuotannon" Vivien R et ai. Sytoterapia. 2018 maaliskuu;20(3):436-452.

Useat kliiniset tutkimukset ovat arvioineet mahdollisuutta injektoida allo-HSCT:n jälkeen itsemurhageenillä transdusoituja luovuttajan lymfosyyttejä joko kasvaimen uusiutumisen hoitamiseksi tai immuunijärjestelmän palautumisen nopeuttamiseksi. Akuuttia infuusioon liittyvää toksisuutta ei ole raportoitu. Gansikloviiria käytettiin joillakin potilailla GVHD:n hallintaan, mikä johti TK+-solujen (tyrosiinikinaasi+) nopeaan eliminoitumiseen.

Klooni saatiin suorittamalla sekalymfosyyttiviljelmä (MLR) kahden populaation välillä, jotka eroavat vain HLA-DP:n suhteen, ja sen jälkeen transdusoimalla reaktiivisia T-soluja korkealla tehokkuudella ja lopuksi kloonaamalla ne suoraan ennen kunkin kloonin valitsemista haluttujen ominaisuuksien mukaan. Kliinisen Herpes-simplex-virus-TK-vektorin ansiosta kloonissa on itsemurhageeni ja se voidaan tappaa gansikloviirin (GCV) läsnä ollessa.

Tällä kloonilla on useita tärkeitä ominaisuuksia tehokkuuden ja turvallisuuden kannalta. Klooni on stabiili sulatuksen jälkeen. Sitä voidaan kasvattaa ja monistaa in vitro sulatuksen jälkeen (vähintään yli miljoona kertaa), samalla kun sen sytotoksinen kapasiteetti säilyy. Se tuottaa suuria määriä TH1-tyyppisiä sytokiinejä.

Mitä tulee tutkittavana olevan CTL-antiDP:n turvallisuuteen, painotimme kahta pääkohtaa: Spesifisyys ja herkkyys gansikloviirille:

Spesifisyys. Klooni on spesifinen HLA-DPB1*04:01:lle. Klooni valittiin luovuttajaa vastaan, joka oli homotsygoottinen HLA-DPB1*04:01:lle (ja identtinen HLA-A:lle, B:lle, C:lle, DQ:lle, DR:lle). Spesifisyystestaus vahvisti HLA-DPB1*:04:01:n tunnistamisen. Kuvattuja HLA-DPB1-alleeleja on kuitenkin lukuisia (447 proteiinia tähän mennessä IMGT (ImMunoGeneTics-tietokanta)/HLA-julkaisu, www.ebi.ac.uk/ipd/index.html), ja ristireaktioita on yksinkertaisesti mahdotonta ennakoida tyhjentävästi ( joidenkin lisäksi HLA-DPB1*04:02 ja HLA-DPB1*05:01, joita on havaittu tiettyjä solulinjoja vastaan). Koska olemme allo-HSCT:n yhteydessä, riskinä olisi luovuttajasolujen tunnistaminen ja siten siirteen hylkimisen mahdollisuus. Tästä syystä teemme inkluusiotestauksen, jossa luovuttajasoluja käytetään kloonin kohteina.

Herkkyys gansikloviirille (GCV): Proliferaatiotestit GCV:n läsnä ollessa vahvistavat GCV:n tehokkuuden riittävällä marginaalilla tavanomaisen hoidon aikana saavutettujen GCV-veren tasojen mukaan.

Kollegojemme tiedot osoittavat, että T-soluja on havaittavissa alhainen ensimmäisten kuukausien aikana transplantaation jälkeen, ja Treg-solujen suhteellinen lisääntyminen tarkoittaa, että luovuttaja-T-solut eivät välttämättä eliminoi kloonia nopeasti.

Syyt itsemurhageenitransdusoidun CD4+ T-solukloonin antamiseen, joka tunnistaa HLA-DPB1*04:01:n allogeenisen transplantaation jälkeen, voidaan tiivistää seuraaviin kohtiin:

1. Hematologisen pahanlaatuisen kasvaimen uusiutuminen on edelleen vakava huolenaihe tämäntyyppisissä siirroissa.

3. Immuunimuodostus on hyvin viivästynyt, mikä mahdollistaa kolmannen osapuolen T-solukloonin injektion.

4. GVHD:n tapauksessa CTL-infuusion jälkeen CTL-klooni voidaan eliminoida nopeasti käyttämällä gansikloviiria.

Hypoteesi Oletamme, että HLA-DPB1*04:01:tä vastaan ​​suunnatun kolmannen osapuolen itsemurhageenin transdusoiman T-solukloonin infuusio allogeenisen transplantaation jälkeen voi olla turvallista ja saattaa suojata hematologisten pahanlaatuisten kasvainten mahdolliselta uusiutumiselta.

Yksityiskohtainen kuvaus menetelmästä (tarvittavien koehenkilöiden määrä) Potilaat, jotka ovat ehdokkaita allogeeniseen siirtoon ja joilla on sekä HLA-DPB1*04:01 että aHLA-DPB1*04:01:tä ilmentävä hematologinen pahanlaatuisuus (melkein 100 % tapauksista) luovuttajan HLA:lla -DPB1*04:01 negatiivinen, ehdotetaan yhden T-solukloonin infuusion saamista 4-5 kuukautta transplantaation jälkeen, kun syklosporiinin ja/tai mykofenolaattimofetiilin aiheuttama immunosuppressio on lopetettu. Kasvainsolujen HLA-DPB1*:n ilmentyminen tarkistetaan sytometrialla tai immunohistokemialla. Kaikki mahdollinen kloonin ristireaktiivisuus luovuttajasoluja vastaan ​​suljetaan myös pois

Käytetään tavanomaista 3 + 3 vaiheen 1 annoskorotustutkimusta:

Taso 1: 1 x 104 solua/kg vastaanottajaa, taso 2: 5 x 104 solua/kg, taso 3: 25 x 104 solua/kg, taso 4: 50 x 104 solua/kg, taso 5: 100 x 104 solua/ kg.

Hoito-ohjelmat: ei rajoituksia

DLI:n käyttö sekakimerismin tai uusiutumisen yhteydessä on sallittu klooniinfuusion jälkeen tarvittaessa. CTL-klooniinfuusion jälkeisen akuutin GVHD:n tapauksessa gansikloviiria annetaan (annoksella 5 mg/kg kahdesti vuorokaudessa) 14 päivän ajan.