Bloedtest voor aan borstkanker gerelateerde auto-antilichamen

Algemene informatie:

Aangezien de mutaties van een normale cel die tot een maligniteit leiden, veranderingen in de structuur en functie van de cellen met zich meebrengen, kan worden aangenomen dat het immuunsysteem sommige van deze veranderingen heeft herkend als antigene determinanten waartegen moet worden gereageerd. Jarenlang probeerden onderzoekers onderscheid te maken tussen kankerpatiënten en een gezonde bevolking door het verschil in specifieke auto-antilichamenniveau. In de gezonde populatie werd een baseline van de hoeveelheid auto-antilichamen bepaald en de patiëntenpopulatie moest een statistisch significant hoger niveau van auto-antilichamen hebben. Veel voorbeelden van deze methode zijn te vinden in de wetenschappelijke literatuur [voorbeeldreferenties - Naora et.al. (2001); muntz et. Al. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. De aanwezigheid van auto-antilichamen in alle populaties in verschillende niveaus maakte het erg moeilijk om deze specifiek onderscheidende antilichamen te vinden. Tot op heden maakt geen specifiek auto-antilichaam alleen onderscheid tussen gezonde en kankerpatiënten (in tegenstelling tot auto-immuunziekten, waar specifieke auto-antilichamen alleen in zeer hoge niveaus bij patiënten kunnen worden gevonden).

Ons werk gaat ervan uit dat het expressieniveau van specifieke auto-antilichamen moet worden gewijzigd bij kanker, en dus kunnen deze verschillen wijzen op de aanwezigheid / afwezigheid van kanker.

In dit experimentprotocol controleren we op verschillen in expressieniveaus van specifieke auto-antilichamen van vermoedelijke borstpathologie.

Toekomstige CAAA-test Gebruiksdoel - Identificatie van specifieke borst-CAAA's kan de clinicus aanvullende immunologische en antigene informatie geven over de toestand of medische status van de patiënt.

Belangrijkste stappen en componenten testen - De CAAA-test bestaat uit een bloedafname en verwerkingsstap gevolgd door detectie van specifieke auto-antilichamen met een op ELISA gebaseerde test en een wiskundige verwerking, met een daaropvolgende classificatie van de resultaten als "positief" of "negatief" voor borstkanker.

Studiepopulatie:

De onderzoekspopulatie omvat alle vrouwen bij wie een pathologische of cytologische bevestiging is gepland, hetzij door middel van een biopsie of cytologie, voorafgaand aan een antikankerbehandeling. De klinische verdenking omvat een van de volgende: positieve mammografie/US/MRI en vermoedelijke fysieke controle. De definitieve verificatie ("echt positief" of "echt negatief") wordt alleen gedaan met betrekking tot pathologie/cytologie.

Onderwerp selectie:

De "echte positieve" groep bestaat uit alle sequentiële patiënten die voldoen aan de inclusiecriteria en positieve biopsieresultaten hebben. De "echte negatieve" groep bestaat uit sequentiële patiënten die voldoen aan de inclusiecriteria en negatieve biopsieresultaten hebben.

Schriftelijke geïnformeerde toestemming moet worden verkregen voordat een bloedmonster van de patiënt wordt afgenomen.

Deze studie zal gebaseerd zijn op deelname van meerdere centra. Het minimum aantal locaties voor het onderzoek is 2.

Alle locaties bevinden zich binnen ziekenhuizen, hetzij op de afdeling chirurgie, hetzij op de relevante specifieke afdeling die verantwoordelijk is voor de zorg voor de BC-patiënten.

Op alle sites zullen hetzelfde protocol en dezelfde monitoringroutines worden toegepast. Alle CRF-gegevens worden elektronisch ingediend via een speciale en beveiligde internetsite, alle wijzigingen worden bijgehouden. Bij het uitvoeren van de CAAA-tests heeft het Lab/sponsorteam geen informatie over de aard van het monster. Deze pathologische informatie wordt parallel aan de CAAA-test verstrekt voor statistische evaluatie.

STUDIE ONTWERP:

Algemene beschrijving - De huidige studie is een enkelblind case-control validatieonderzoek, waarbij alle opeenvolgende proefpersonen met borstkanker betrokken waren met positieve biopsieresultaten (echt positief) en een gelijk aantal patiënten met negatieve biopsieresultaten (echt negatief). Het doel van de studie is om de effectiviteit van de CAAA-test te evalueren.

De effectiviteit van de studie wordt gedefinieerd als de specificiteit van de CAAA-test voor een vooraf gedefinieerde gevoeligheid van 95%.

De studie zal de gevoeligheid van de CAAA-test evalueren om aan te tonen dat deze niet onder het aangegeven niveau van 95% ligt.

De studie zal de specificiteit van de CAAA-test in de nieuwe studiepopulatie evalueren.

Volgens bekende resultaten van PPV van mammografie in verschillende populaties gaan we ervan uit dat de onderzoekspopulatie ongeveer 30% van de echt positieve kankergevallen zal omvatten.

Vanaf vandaag werd een groot deel van de verdachte proefpersonen alleen gediagnosticeerd door de uiteindelijke pathologie van de biopsie. In deze studie zullen de echt positieve en echt negatieve gevallen (zoals geverifieerd door biopsie) worden vergeleken met de CAAA-testresultaten.

Studie Procedures

In het ziekenhuis:

Eerst moet een geïdentificeerde proefpersoon een formulier voor geïnformeerde toestemming ondertekenen en haar geschiktheidsformulier invullen, beide moeten voorzien zijn van een streepjescode.

De klinische informatie van de proefpersonen die is verkregen uit het medisch dossier van de patiënt, inclusief leeftijd, medische geschiedenis en resultaten van uitgevoerde tests die hebben geleid tot de diagnostische evaluatie van borstkanker, zal worden vastgelegd op de juiste, met streepjescodes, pre-studie casusrapportformulieren. De rapportages zullen elektronisch plaatsvinden via een speciale en beveiligde internetsite, eventuele wijzigingen in de database worden geregistreerd en zijn traceerbaar. Op de afdeling wordt een papieren exemplaar bewaard. De studie is anoniem en de afdeling zal de naam van de patiënt behouden zonder deze bekend te maken aan onderzoekers en aan de studiesponsor.

De arts/verpleegkundige/flebotomist zal een heparine-vacuümbuis (ongeveer 8 ml) verzamelen en labelen (streepjescode). De buis met het bloed wordt verpakt in een dubbel gesealde container.

Het bloed wordt volgens de geldende voorschriften op kamertemperatuur (18-25°C) vervoerd naar het laboratorium. De transporttijd is niet meer dan 6 uur.

Het bloedbehandelingslaboratorium verzamelt serum volgens het protocol en het serum wordt ingevroren bij -80°C, in correct geëtiketteerde aliquots. De ingevroren monsters worden naar het diagnostisch laboratorium gestuurd voor antilichaamtesten.

In het diagnostisch laboratorium zullen op ELISA gebaseerde tests voor de detectie van auto-antilichamen relatieve expressieverhoudingen worden uitgevoerd op elk monster volgens het laboratoriumprotocol. De monsters worden getest op antilichaamniveaus voor de antigenen die zijn geïdentificeerd op een eerdere trainingsset. Alle gegevens worden permanent rechtstreeks op een speciale computer geregistreerd. Voor elk monster worden alle antilichaamresultaten in het gecodeerde patiëntendossier gezet. Een wiskundig algoritme bepaalt of het monster positief of negatief is.

In het ziekenhuis, na biopsie:

2-3 weken na de biopsie verzamelt de CRO uit het dossier van de patiënt de resultaten van het pathologielaboratorium en alle andere relevante informatie over de aard van de vermoedelijke massa. Deze resultaten worden geregistreerd op de speciale en beveiligde internetsite en er wordt een geprinte CRF met barcode op de afdeling bewaard.

Het ziekenhuis bewaart plakjes van de vermoedelijke massa's (van biopsie of chirurgie) voor toekomstig immunohistochemisch of ander onderzoek dat door de sponsor moet worden uitgevoerd.

De uiteindelijke pathologie wordt vergeleken met de CAAA-testresultaten. De resultaten zullen worden geanalyseerd door een statisticus met expertise in kankerpopulatiestudies.

De patiënten die in deze studie zijn opgenomen, ondergaan een bloedtest en de enige risico's zijn degenen die betrokken zijn bij bloedafname. Aangezien de behandeling niet wordt beïnvloed door de resultaten, zijn er geen risico's voor de patiënten die aan het onderzoek deelnemen.

Aangezien het onderzoek wordt uitgevoerd zonder verband met de individuele patiënt, is er geen direct voordeel van de aanvullende tests die op het bloedmonster worden uitgevoerd. Toekomstig voordeel kan worden verkregen uit de ontwikkeling van de test.

De huidige studie is een blinde, prospectieve validatiestudie, waarbij alle achtereenvolgende proefpersonen met vermoedelijke borstpathologie worden ingepland voor biopsie tijdens de duur van de studie. Het doel van de studie is het beoordelen van de gevoeligheid en specificiteit van de CAAA-test voor de detectie van borstkanker bij vrouwen die een biopsie moeten ondergaan.

Proefpersonen zullen worden gescreend op mogelijke deelname aan het onderzoek, volgens de inclusie- en exclusiecriteria.

De gegevens omvatten parameters van de klinische en pathologische toestand van de proefpersonen en resultaten van CAAA ELISA.

Er zijn twee doelen van de studie.

1. Om te testen of de gevoeligheid van CAAA niet onder het vooraf gedefinieerde niveau ligt.
2. Om de specificiteit van de CAAA-test te evalueren. Statistische hypothese De belangrijkste voorwaarde voor het bepalen van de steekproefomvang is te valideren dat de gevoeligheid van de test niet lager is dan het vooraf gedefinieerde niveau. De classificatieregel is zo opgesteld dat de sensitiviteit in de trainingsset 100% was. We gaan ervan uit dat de werkelijke gevoeligheid niet lager is dan 99%.

Nulhypothese: De sensitiviteit van de test is niet hoger dan 95%. Alternatieve hypothese: De sensitiviteit van de test is niet minder dan 99%. Gegevensbeheer Er moet een databasebeheersysteem worden ontworpen en onderhouden, inclusief schermvoorbereiding en bewerkingscontroleprogrammering. In elk gegevensinvoercentrum wordt een kwaliteitscontrole vóór en na binnenkomst van de klinische gegevens uitgevoerd. Alle ELISA-testresultaten worden geüpload naar de database via een op internet gebaseerde interface en worden vergrendeld tegen verdere wijzigingen. Om de resultaten van de ELISA-test te wijzigen, is voor het ontgrendelen van de database toestemming nodig van de lokale CRO, de sponsor en de locatiearts. Ontgrendelen wordt alleen gedaan door de webmaster en wordt opgenomen in het traceringssysteem en in een papieren versie die zowel door de sponsor als de CRO op de site wordt bewaard.