Exame de sangue para autoanticorpos associados ao câncer de mama

Informações gerais:

Uma vez que as mutações de uma célula normal que levam a uma malignidade envolvem alterações na estrutura e função das células, pode-se supor que o sistema imunológico reconheceu algumas dessas alterações como determinantes antigênicos contra os quais deve-se responder. Por muitos anos, os investigadores tentaram distinguir entre pacientes com câncer e população saudável pela diferença no nível de autoanticorpos específicos. Na população saudável, uma linha de base da quantidade de autoanticorpos foi determinada, e a população de pacientes teve que ter um nível mais alto estatisticamente significativo de autoanticorpos. Muitos exemplos deste método podem ser encontrados na literatura científica [referências de exemplo - Naora et.al. (2001); mintz et. al. (2003); Korneeva et. AI (2000)]. A presença de autoanticorpos em toda a população em diferentes níveis tornou muito difícil encontrar esses anticorpos especificamente discriminadores. Até o momento, nenhum autoanticorpo específico distingue apenas entre pacientes saudáveis ​​e com câncer (ao contrário de doenças autoimunes, em que autoanticorpos específicos podem ser encontrados em níveis muito altos apenas em pacientes).

Nosso trabalho assume que o nível de expressão de autoanticorpos específicos deve ser alterado no câncer e, portanto, essas diferenças podem indicar a presença/ausência de câncer.

Neste protocolo de experimento, estamos verificando diferenças nos níveis de expressão de autoanticorpos específicos de suspeita de patologia mamária.

Futuro teste CAAA Finalidade do uso - Identificação de CAAAs específicos da mama, pode fornecer ao clínico informações imunológicas e antigênicas adicionais sobre a condição ou estado médico do paciente.

Principais etapas e componentes do teste - O teste CAAA é composto por uma etapa de coleta e processamento de sangue, seguida da detecção de autoanticorpos específicos com um ensaio baseado em ELISA e um processamento matemático, com posterior classificação dos resultados como "positivo" ou "negativo" para câncer de mama.

População do estudo:

A população do estudo inclui todas as mulheres que estão agendadas para confirmação patológica ou citológica, seja por qualquer tipo de biópsia ou citologia, antes de qualquer tratamento anti-câncer. A suspeita clínica inclui um dos seguintes: mamografia/US/RM positiva e exame físico suspeito. A verificação final ("verdadeiro positivo" ou "verdadeiro negativo") será feita apenas em relação à patologia/citologia.

Seleção do assunto:

O grupo "verdadeiro positivo" consiste em todos os pacientes sequenciais que satisfazem os critérios de inclusão e apresentam resultados de biópsia positivos. O grupo "verdadeiro negativo" consiste em pacientes sequenciais que satisfazem os critérios de inclusão e apresentam resultados de biópsia negativos.

O consentimento informado por escrito deve ser obtido antes de obter uma amostra de sangue do paciente.

Este estudo será baseado na participação multicêntrica. O número mínimo de sites para o estudo é 2.

Todos os locais serão dentro de Hospitais, no departamento de cirurgia ou na unidade específica relevante responsável por fornecer atendimento aos pacientes de BC.

O mesmo protocolo e as mesmas rotinas de monitoramento serão aplicados a todos os sites. Todos os dados do CRF serão enviados eletronicamente por meio de um site de internet dedicado e seguro, todas as alterações serão rastreadas. Ao realizar os testes CAAA, a equipe do Laboratório/Patrocinador não terá informações sobre a natureza da amostra. Esta informação patológica será fornecida para avaliação estatística em paralelo ao teste CAAA.

DESIGN DE ESTUDO:

Descrição geral - O estudo atual é um estudo de validação de caso-controle único cego, envolvendo todos os indivíduos consecutivos com câncer de mama com resultados positivos de biópsia (verdadeiro positivo) e igual número de pacientes com resultados negativos de biópsia (verdadeiro negativo). O objetivo do estudo é avaliar a eficácia do teste CAAA.

A eficácia do estudo é definida como a especificidade do teste CAAA para uma sensibilidade pré-definida de 95%.

O estudo avaliará a sensibilidade do teste CAAA para mostrar que não está abaixo do nível declarado de 95%.

O estudo avaliará a especificidade do teste CAAA na nova população de estudo.

De acordo com os resultados conhecidos de PPV de mamografia em várias populações, assumimos que a população de estudo incluirá cerca de 30% dos casos de câncer verdadeiros positivos.

Até hoje, grande parte dos suspeitos só foi diagnosticada pela patologia final da biópsia. Neste estudo, os casos verdadeiros positivos e verdadeiros negativos (conforme verificado por biópsia) serão comparados com os resultados do teste CAAA.

Procedimentos de estudo

No Hospital:

Primeiro, um sujeito de estudo identificado deve assinar um formulário de consentimento informado, e seu Formulário de Elegibilidade preenchido, ambos devem ter códigos de barras.

As informações clínicas dos participantes adquiridas do arquivo médico do paciente, incluindo idade, histórico médico e resultados dos testes realizados para a avaliação diagnóstica do câncer de mama, serão registradas nos formulários de relatório de caso pré-estudo apropriados, com código de barras. Os relatórios serão eletrônicos através de um site de internet dedicado e seguro, quaisquer alterações no banco de dados serão registradas e serão rastreáveis. Uma cópia impressa dos registros será mantida no departamento. O estudo é anônimo e o Departamento manterá o nome do paciente sem revelá-lo aos investigadores e ao patrocinador do estudo.

O médico/enfermeiro/flebotomista coletará um tubo de vácuo de heparina (cerca de 8ml), rotulará (código de barras). O tubo com o sangue será acondicionado em recipiente duplamente vedado.

O sangue será transportado à temperatura ambiente (18-25°C), de acordo com os regulamentos relevantes, para o laboratório. O tempo de transporte não será superior a 6 horas.

O laboratório de manipulação do sangue coletará o soro de acordo com o protocolo, e o soro será mantido congelado a -80, em alíquotas devidamente rotuladas. As amostras congeladas serão enviadas ao laboratório de diagnóstico para testes de anticorpos.

No laboratório de diagnóstico, testes baseados em ELISA para a detecção de taxas de expressão relativa de autoanticorpos serão realizados em cada amostra de acordo com o protocolo do laboratório. As amostras serão testadas quanto aos níveis de anticorpos para os antígenos que foram identificados em um conjunto de treinamento anterior. Todos os dados serão permanentemente gravados diretamente em um computador dedicado. Para cada amostra, todos os resultados de anticorpos serão colocados no arquivo codificado do paciente. Um algoritmo matemático determinará se a amostra é positiva ou negativa.

No Hospital, após a biópsia:

2-3 semanas após a biópsia, o CRO coletará do arquivo do paciente os resultados do laboratório de patologia e qualquer outra informação relevante quanto à natureza da massa suspeita. Esses resultados serão registrados no site da Internet dedicado e seguro e um CRF impresso com código de barras será mantido no Departamento.

O hospital preservará as fatias das massas suspeitas (de biópsia ou cirurgia) para futuros estudos imuno-histoquímicos ou outros estudos a serem conduzidos pelo patrocinador.

A patologia final será comparada com os resultados do teste CAAA. Os resultados serão analisados ​​por um estatístico com experiência em estudos populacionais de câncer.

Os pacientes incluídos neste estudo estão realizando exame de sangue, e os únicos riscos são aqueles que envolvem a coleta de sangue. Como o tratamento não é afetado pelos resultados, não há riscos para os pacientes participantes do estudo.

Como o estudo está sendo conduzido sem vínculo com o paciente individual, não há benefício imediato derivado dos testes adicionais executados na amostra de sangue. O benefício futuro pode ser derivado do desenvolvimento do ensaio.

O estudo atual é um estudo de validação prospectivo cego, envolvendo todos os indivíduos consecutivos com suspeita de patologia da mama sendo agendados para biópsia durante a duração do estudo. O objetivo do estudo é avaliar a sensibilidade e especificidade do teste CAAA para detecção de câncer de mama em mulheres agendadas para biópsia.

Os sujeitos serão triados para possível participação no estudo, de acordo com os critérios de inclusão e exclusão.

Os dados incluirão parâmetros do estado clínico e patológico dos sujeitos e resultados de CAAA ELISA.

Há dois objetivos do estudo.

1. Para testar se a sensibilidade do CAAA não está abaixo do nível pré-definido.
2. Avaliar a especificidade do teste CAAA. Hipótese Estatística A principal condição que determina o tamanho da amostra é validar que a sensibilidade do teste não seja inferior ao nível predefinido. A regra de classificação foi estabelecida de forma que a sensibilidade no conjunto de treinamento fosse de 100%. Assumimos que a sensibilidade real não é inferior a 99%.

Hipótese Nula: A sensibilidade do teste não é superior a 95%. Hipótese alternativa: A sensibilidade do teste não é inferior a 99%. Gerenciamento de dados Um sistema de gerenciamento de banco de dados deve ser projetado e mantido, incluindo preparação de tela e programação de verificação de edição. O controle de qualidade pré-entrada e pós-entrada dos dados clínicos deve ser realizado em cada centro de entrada de dados. Todos os resultados do teste ELISA serão carregados no banco de dados por meio de uma interface baseada na Internet e serão bloqueados contra alterações posteriores. Para alterar os resultados do teste ELISA, o desbloqueio do banco de dados requer o consentimento do CRO local, do patrocinador e do médico do local. O desbloqueio será feito apenas pelo webmaster e será registrado no componente do sistema de rastreamento e em uma cópia impressa mantida pelo patrocinador e pelo CRO no site.