Анализ крови на аутоантитела, связанные с раком молочной железы

Общая информация:

Поскольку мутации нормальной клетки, приводящие к злокачественному новообразованию, включают изменения в структуре и функции клеток, можно предположить, что иммунная система распознала некоторые из этих изменений как антигенные детерминанты, против которых следует реагировать. В течение многих лет исследователи пытались отличить онкологических больных от здорового населения по разнице в уровне специфических аутоантител. В здоровой популяции определяли исходный уровень количества аутоантител, а популяция пациентов должна была иметь статистически значимо более высокий уровень аутоантител. Многие примеры этого метода можно найти в научной литературе [примеры ссылок - Naora et.al. (2001 г.); Минц и др. Ал. (2003 г.); Корнеева и др. Аль (2000)]. Присутствие аутоантител во всей популяции на разных уровнях очень затрудняло поиск этих специфически дискриминирующих антител. На сегодняшний день никакие специфические аутоантитела не различают только здоровых и больных раком (в отличие от аутоиммунных заболеваний, при которых специфические аутоантитела могут быть обнаружены в очень высоких количествах только у пациентов).

В нашей работе предполагается, что уровень экспрессии специфических аутоантител должен изменяться при раке, и, таким образом, эти различия могут свидетельствовать о наличии/отсутствии рака.

В этом протоколе эксперимента мы проверяем различия в уровнях экспрессии специфических аутоантител при подозрении на патологию молочной железы.

Будущий тест на СААА Цель использования: идентификация специфических СААА молочной железы может предоставить клиницисту дополнительную иммунологическую и антигенную информацию о состоянии пациента или медицинском статусе.

Основные этапы и компоненты теста. Тест CAAA состоит из этапа сбора и обработки крови с последующим обнаружением специфических аутоантител с помощью анализа на основе ELISA и математической обработки с последующей классификацией результатов как «положительных» или «отрицательных». для рака молочной железы.

Исследуемая популяция:

Исследуемая популяция включает всех женщин, которым запланировано патологическое или цитологическое подтверждение любым видом биопсии или цитологии до любого противоракового лечения. Клиническое подозрение включает одно из следующего: положительный результат маммографии/УЗИ/МРТ и подозрение на медосмотр. Окончательная проверка («истинно положительный» или «истинно отрицательный») будет проводиться только в отношении патологии/цитологии.

Выбор предмета:

«Истинно положительная» группа состоит из всех последовательных пациентов, которые удовлетворяют критериям включения и имеют положительные результаты биопсии. Группа «истинно отрицательных» состоит из последовательных пациентов, которые удовлетворяют критериям включения и имеют отрицательные результаты биопсии.

Письменное информированное согласие должно быть получено до получения образца крови у пациента.

Это исследование будет основано на участии нескольких центров. Минимальное количество сайтов для исследования – 2.

Все объекты будут находиться в больницах либо в хирургическом отделении, либо в соответствующем конкретном подразделении, которое отвечает за оказание помощи пациентам с BC.

Один и тот же протокол и одни и те же процедуры мониторинга будут применяться ко всем сайтам. Все данные CRF будут представлены в электронном виде через специальный и защищенный интернет-сайт, все изменения будут отслеживаться. При выполнении тестов CAAA команда лаборатории/спонсора не будет иметь информации о характере образца. Эта патологическая информация будет предоставляться для статистической оценки параллельно с тестом CAAA.

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ:

Общее описание. Текущее исследование представляет собой одиночное слепое проверочное исследование методом случай-контроль, в котором участвуют все последовательные пациенты с раком молочной железы, имеющие положительные результаты биопсии (истинно положительные) и равное количество пациентов с отрицательными результатами биопсии (истинно отрицательные). Цель исследования – оценить эффективность теста СААА.

Эффективность исследования определяется как специфичность теста СААА при заданной чувствительности 95%.

В исследовании будет оцениваться чувствительность теста CAAA, чтобы показать, что она не ниже заявленного уровня 95%.

В исследовании будет оцениваться специфичность теста CAAA в новой исследуемой популяции.

По известным результатам PPV маммографии в различных популяциях мы предполагаем, что исследуемая популяция будет включать около 30% истинно положительных случаев рака.

На сегодняшний день большая часть подозреваемых субъектов была диагностирована только по окончательной патологии биопсии. В этом исследовании истинно положительные и истинно отрицательные случаи (подтвержденные биопсией) будут сравниваться с результатами теста CAAA.

Процедуры исследования

В больнице:

Во-первых, идентифицированный субъект исследования должен подписать форму информированного согласия, и ее форма приемлемости должна быть заполнена, обе должны быть штрих-кодированы.

Клиническая информация о субъектах, полученная из медицинской карты пациента, включая возраст, историю болезни и результаты анализов, проведенных для диагностической оценки рака молочной железы, будет записана в соответствующих формах отчетов о случаях до начала исследования со штрих-кодом. Отчеты будут передаваться в электронном виде через специальный защищенный интернет-сайт, любые изменения в базе данных будут регистрироваться и отслеживаться. Бумажная копия протокола будет храниться в отделе. Исследование является анонимным, и Департамент сохранит имя пациента, не раскрывая его исследователям и спонсору исследования.

Врач/медсестра/флеботомист возьмет вакуумную пробирку с гепарином (около 8 мл), нанесет на нее этикетку (штрих-код). Пробирка с кровью будет упакована в двойную герметичную тару.

Кровь будет транспортироваться в лабораторию при комнатной температуре (18-25°C) согласно соответствующим правилам. Время в пути составит не более 6 часов.

Лаборатория по работе с кровью будет собирать сыворотку в соответствии с протоколом, и сыворотка будет храниться в замороженном виде при температуре -80°С в аликвотах с соответствующей маркировкой. Замороженные образцы будут отправлены в диагностическую лабораторию для анализа на антитела.

В диагностической лаборатории тесты на основе ELISA для определения соотношений относительной экспрессии аутоантител будут проводиться на каждом образце в соответствии с лабораторным протоколом. Образцы будут проверены на уровни антител к антигенам, которые были идентифицированы на предыдущем обучающем наборе. Все данные будут постоянно записываться непосредственно на специальный компьютер. Для каждого образца все результаты антител будут помещены в закодированную карту пациента. Математический алгоритм определит, является ли образец положительным или отрицательным.

В больнице после биопсии:

Через 2-3 недели после биопсии ССЗ собирает из карты пациента результаты патологоанатомической лаборатории и любую другую соответствующую информацию о характере предполагаемого новообразования. Эти результаты будут зарегистрированы на специальном и защищенном интернет-сайте, а распечатанная CRF со штрих-кодом будет храниться в Департаменте.

Больница сохранит срезы подозрительных новообразований (полученных при биопсии или хирургическом вмешательстве) для будущих иммуногистохимических или других исследований, проводимых спонсором.

Окончательная патология будет сравниваться с результатами теста CAAA. Результаты будут проанализированы статистиком, имеющим опыт изучения онкологических заболеваний.

Пациенты, включенные в это исследование, проходят анализ крови, и только риски связаны с забором крови. Поскольку лечение не зависит от результатов, пациенты, участвующие в исследовании, не подвергаются никакому риску.

Поскольку исследование проводится без привязки к конкретному пациенту, дополнительные тесты, проведенные на образце крови, не приносят немедленной пользы. Будущая выгода может быть получена от разработки анализа.

Текущее исследование является слепым проспективным проверочным исследованием, в котором участвуют все последовательные пациенты с подозрением на патологию молочной железы, которым запланирована биопсия в течение всего периода исследования. Цель исследования — оценить чувствительность и специфичность теста СААА для выявления рака молочной железы у женщин, которым предстоит биопсия.

Субъекты будут проверены на предмет потенциального участия в исследовании в соответствии с критериями включения и исключения.

Данные будут включать параметры клинического и патологического состояния субъектов и результаты ИФА СААА.

Есть две цели исследования.

1. Проверить, что чувствительность CAAA не ниже заданного уровня.
2. Оценить специфичность теста СААА. Статистическая гипотеза Основным условием, определяющим размер выборки, является подтверждение того, что чувствительность теста не ниже заданного уровня. Правило классификации устанавливалось таким образом, чтобы чувствительность в обучающей выборке составляла 100 %. Мы предполагаем, что реальная чувствительность не ниже 99%.

Нулевая гипотеза: чувствительность теста не выше 95%. Альтернативная гипотеза: Чувствительность теста не менее 99%. Управление данными Должна быть разработана и поддерживаться система управления базой данных, включая подготовку экрана и программирование проверки редактирования. Предварительный и послевходовой контроль качества клинических данных должен осуществляться в каждом центре ввода данных. Все результаты тестов ELISA будут загружены в базу данных через интернет-интерфейс и будут заблокированы от дальнейших изменений. Чтобы изменить результаты теста ELISA, для разблокировки базы данных требуется согласие местного CRO, спонсора и врача участка. Разблокировка будет производиться только веб-мастером и будет записываться в компоненте системы отслеживания, а также в печатной копии, хранящейся как у спонсора, так и у CRO на сайте.