Bluttest auf Brustkrebs-assoziierte Autoantikörper

Allgemeine Informationen:

Da Mutationen einer normalen Zelle, die zu einer bösartigen Erkrankung führen, Veränderungen in der Struktur und Funktion der Zellen mit sich bringen, könnte man davon ausgehen, dass das Immunsystem einige dieser Veränderungen als antigene Determinanten erkannt hat, gegen die reagiert werden sollte. Viele Jahre lang versuchten Forscher, anhand des Unterschieds in der Konzentration spezifischer Autoantikörper zwischen Krebspatienten und einer gesunden Bevölkerung zu unterscheiden. In der gesunden Bevölkerung wurde ein Ausgangswert für die Menge an Autoantikörpern bestimmt, und die Patientenpopulation musste einen statistisch signifikant höheren Wert an Autoantikörpern aufweisen. Viele Beispiele dieser Methode finden sich in der wissenschaftlichen Literatur [Beispielreferenzen – Naora et.al. (2001); mintz et. Al. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. Das Vorhandensein von Autoantikörpern in unterschiedlichen Konzentrationen in der gesamten Bevölkerung machte es sehr schwierig, diese spezifisch unterscheidenden Antikörper zu finden. Bisher gibt es keinen spezifischen Autoantikörper, der ausschließlich zwischen gesunden Patienten und Krebspatienten unterscheidet (im Gegensatz zu Autoimmunerkrankungen, wo spezifische Autoantikörper nur bei Patienten in sehr hohen Mengen vorkommen).

Unsere Arbeit geht davon aus, dass das Expressionsniveau spezifischer Autoantikörper bei Krebs verändert sein sollte und diese Unterschiede daher auf das Vorhandensein/Nichtvorhandensein von Krebs hinweisen können.

In diesem Versuchsprotokoll prüfen wir Unterschiede in der Expression spezifischer Autoantikörper bei Verdacht auf Brustpathologie.

Zukünftiger CAAA-Test. Verwendungszweck: Die Identifizierung spezifischer Brust-CAAAs könnte dem Arzt zusätzliche immunologische und antigenische Informationen über den Zustand oder den medizinischen Status der Patientin liefern.

Hauptschritte und Komponenten des Tests – Der CAAA-Test besteht aus einem Schritt der Blutentnahme und -verarbeitung, gefolgt vom Nachweis spezifischer Autoantikörper mit einem ELISA-basierten Test und einer mathematischen Verarbeitung, mit anschließender Klassifizierung der Ergebnisse als „positiv“ oder „negativ“. für Brustkrebs.

Studienpopulation:

Die Studienpopulation umfasst alle Frauen, bei denen vor einer Krebsbehandlung eine pathologische oder zytologische Bestätigung durch irgendeine Art von Biopsie oder Zytologie vorgesehen ist. Der klinische Verdacht umfasst eines der folgenden: positive Mammographie/US/MRT und vermutete körperliche Untersuchung. Die endgültige Überprüfung („richtig positiv“ oder „richtig negativ“) erfolgt nur in Bezug auf Pathologie/Zytologie.

Themenauswahl:

Die „richtig positive“ Gruppe besteht aus allen aufeinanderfolgenden Patienten, die die Einschlusskriterien erfüllen und positive Biopsieergebnisse aufweisen. Die „richtig negative“ Gruppe besteht aus aufeinanderfolgenden Patienten, die die Einschlusskriterien erfüllen und negative Biopsieergebnisse haben.

Vor der Entnahme einer Blutprobe vom Patienten muss eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt werden.

Diese Studie wird auf der Teilnahme mehrerer Zentren basieren. Die Mindestanzahl an Standorten für die Studie beträgt 2.

Alle Standorte befinden sich innerhalb von Krankenhäusern, entweder in der chirurgischen Abteilung oder in der entsprechenden spezifischen Einheit, die für die Versorgung der BC-Patienten verantwortlich ist.

An allen Standorten werden das gleiche Protokoll und die gleichen Überwachungsroutinen angewendet. Alle CRF-Daten werden elektronisch über eine spezielle und gesicherte Internetseite übermittelt, alle Änderungen werden nachverfolgt. Bei der Durchführung der CAAA-Tests verfügt das Labor/Sponsor-Team über keine Informationen über die Art der Probe. Diese pathologischen Informationen werden zur statistischen Auswertung parallel zum CAAA-Test bereitgestellt.

STUDIENDESIGN:

Gesamtbeschreibung – Bei der aktuellen Studie handelt es sich um eine Einzelblind-Fall-Kontroll-Validierungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Brustkrebspatientinnen mit positiven Biopsieergebnissen (richtig positiv) und die gleiche Anzahl von Patienten mit negativen Biopsieergebnissen (richtig negativ) beteiligt sind. Der Zweck der Studie besteht darin, die Wirksamkeit des CAAA-Tests zu bewerten.

Die Wirksamkeit der Studie wird als Spezifität des CAAA-Tests bei einer vordefinierten Sensitivität von 95 % definiert.

Die Studie wird die Sensitivität des CAAA-Tests bewerten, um zu zeigen, dass sie nicht unter dem angegebenen Wert von 95 % liegt.

Die Studie wird die Spezifität des CAAA-Tests in der neuen Studienpopulation bewerten.

Aufgrund der bekannten PPV-Ergebnisse der Mammographie in verschiedenen Populationen gehen wir davon aus, dass die Studienpopulation etwa 30 % tatsächlich positive Krebsfälle umfassen wird.

Bis heute wurde bei einem großen Teil der verdächtigen Personen die Diagnose nur durch die endgültige Pathologie der Biopsie gestellt. In dieser Studie werden die wirklich positiven und wirklich negativen Fälle (wie durch Biopsie bestätigt) mit den CAAA-Testergebnissen verglichen.

Studienabläufe

Im Krankenhaus:

Zunächst muss eine identifizierte Studienteilnehmerin eine Einverständniserklärung unterzeichnen und ihr Teilnahmeberechtigungsformular ausfüllen, beides sollte mit einem Strichcode versehen sein.

Die aus der Krankenakte der Patientin gewonnenen klinischen Informationen der Probanden, einschließlich Alter, Krankengeschichte und Ergebnisse durchgeführter Tests, die zur diagnostischen Beurteilung von Brustkrebs führen, werden auf den entsprechenden, mit Strichcode versehenen Fallberichtsformularen vor der Studie aufgezeichnet. Die Berichte werden elektronisch über eine spezielle und gesicherte Internetseite übermittelt, alle Änderungen in der Datenbank werden aufgezeichnet und sind nachvollziehbar. Eine gedruckte Kopie der Aufzeichnungen wird in der Abteilung aufbewahrt. Die Studie ist anonym und die Abteilung behält den Namen des Patienten, ohne ihn den Prüfärzten und dem Studiensponsor preiszugeben.

Der Arzt/die Krankenschwester/der Phlebotomiker nimmt ein Heparin-Vakuumröhrchen (ca. 8 ml) und beschriftet es (Strichcode). Das Röhrchen mit dem Blut wird in einem doppelt versiegelten Behälter verpackt.

Das Blut wird bei Raumtemperatur (18-25°C) entsprechend den einschlägigen Vorschriften zum Labor transportiert. Die Transportzeit beträgt nicht mehr als 6 Stunden.

Das Blutverarbeitungslabor entnimmt das Serum gemäß dem Protokoll und das Serum wird in ordnungsgemäß gekennzeichneten Aliquots bei -80 °C eingefroren. Die gefrorenen Proben werden für Antikörpertests an das Diagnoselabor geschickt.

Im diagnostischen Labor werden ELISA-basierte Tests zum Nachweis der relativen Expressionsverhältnisse von Autoantikörpern an jeder Probe gemäß dem Laborprotokoll durchgeführt. Die Proben werden auf Antikörperspiegel für die Antigene getestet, die in einem vorherigen Trainingssatz identifiziert wurden. Alle Daten werden dauerhaft direkt in einem speziellen Computer aufgezeichnet. Für jede Probe werden alle Antikörperergebnisse in die kodierte Patientenakte eingetragen. Ein mathematischer Algorithmus bestimmt, ob die Probe positiv oder negativ ist.

Im Krankenhaus, nach der Biopsie:

2-3 Wochen nach der Biopsie sammelt der CRO aus der Patientenakte die Ergebnisse des Pathologielabors und alle anderen relevanten Informationen zur Art der vermuteten Raumforderung. Diese Ergebnisse werden auf der speziellen und gesicherten Internetseite aufgezeichnet und ein gedruckter CRF mit Barcode wird in der Abteilung aufbewahrt.

Das Krankenhaus wird Schnitte der vermuteten Raumforderungen (entweder aus einer Biopsie oder einer Operation) für zukünftige immunhistochemische oder andere vom Sponsor durchzuführende Studien aufbewahren.

Die endgültige Pathologie wird mit den CAAA-Testergebnissen verglichen. Die Ergebnisse werden von einem Statistiker mit Erfahrung in Krebspopulationsstudien analysiert.

Bei den in diese Studie einbezogenen Patienten werden Blutuntersuchungen durchgeführt, und die einzigen Risiken bestehen bei der Blutentnahme. Da die Behandlung durch die Ergebnisse nicht beeinflusst wird, sind die an der Studie teilnehmenden Patienten keinem Risiko ausgesetzt.

Da die Studie ohne Bezug zum einzelnen Patienten durchgeführt wird, ergeben sich aus den zusätzlichen Tests der Blutprobe keine unmittelbaren Vorteile. Zukünftiger Nutzen könnte aus der Entwicklung des Assays gezogen werden.

Bei der aktuellen Studie handelt es sich um eine blinde prospektive Validierungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Probanden mit Verdacht auf Brustpathologie beteiligt sind, bei denen während der Studiendauer eine Biopsie geplant ist. Ziel der Studie ist die Beurteilung der Sensitivität und Spezifität des CAAA-Tests zur Erkennung von Brustkrebs bei Frauen, bei denen eine Biopsie geplant ist.

Die Probanden werden gemäß den Einschluss- und Ausschlusskriterien auf eine mögliche Teilnahme an der Studie überprüft.

Die Daten umfassen Parameter des klinischen und pathologischen Zustands der Probanden sowie Ergebnisse des CAAA ELISA.

Es gibt zwei Ziele der Studie.

1. Um zu testen, ob die Empfindlichkeit von CAAA nicht unter dem vordefinierten Wert liegt.
2. Zur Bewertung der Spezifität des CAAA-Tests. Statistische Hypothese Die Hauptbedingung für die Bestimmung der Stichprobengröße ist die Validierung, dass die Sensitivität des Tests nicht unter dem vordefinierten Wert liegt. Die Klassifizierungsregel wurde so festgelegt, dass die Sensitivität im Trainingssatz 100 % betrug. Wir gehen davon aus, dass die tatsächliche Empfindlichkeit nicht unter 99 % liegt.

Nullhypothese: Die Sensitivität des Tests liegt nicht über 95 %. Alternativhypothese: Die Sensitivität des Tests beträgt nicht weniger als 99 %. Datenverwaltung Es muss ein Datenbankverwaltungssystem entworfen und gepflegt werden, einschließlich Bildschirmvorbereitung und Bearbeitungsprüfungsprogrammierung. In jedem Dateneingabezentrum wird eine Qualitätskontrolle der klinischen Daten vor und nach der Eingabe durchgeführt. Alle ELISA-Testergebnisse werden über eine internetbasierte Schnittstelle in die Datenbank hochgeladen und für weitere Änderungen gesperrt. Um ELISA-Testergebnisse zu ändern, ist zum Entsperren der Datenbank die Zustimmung des örtlichen CRO, des Sponsors und des Arztes vor Ort erforderlich. Die Freischaltung erfolgt ausschließlich durch den Webmaster und wird in der Komponente des Rückverfolgungssystems sowie in einer gedruckten Kopie aufgezeichnet, die sowohl vom Sponsor als auch vom CRO auf der Website aufbewahrt wird.