Analisi del sangue per autoanticorpi associati al cancro al seno

Informazioni generali:

Poiché le mutazioni di una cellula normale che portano a un tumore maligno comportano cambiamenti nella struttura e nella funzione delle cellule, si potrebbe presumere che il sistema immunitario abbia riconosciuto alcuni di questi cambiamenti come determinanti antigenici contro i quali si dovrebbe reagire. Per molti anni, i ricercatori hanno cercato di distinguere tra malati di cancro e popolazione sana in base alla differenza nel livello di autoanticorpi specifici. Nella popolazione sana, è stata determinata una linea di base della quantità di autoanticorpi e la popolazione di pazienti doveva avere un livello più elevato di autoanticorpi statisticamente significativo. Molti esempi di questo metodo possono essere trovati nella letteratura scientifica [riferimenti di esempio - Naora et.al. (2001); minz et. Al. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. La presenza di autoanticorpi in tutta la popolazione a diversi livelli ha reso molto difficile trovare questi anticorpi specificamente discriminanti. Ad oggi, nessun autoanticorpo specifico distingue esclusivamente tra pazienti sani e malati di cancro (al contrario delle malattie autoimmuni, dove gli autoanticorpi specifici possono essere trovati a livelli molto elevati solo nei pazienti).

Il nostro lavoro presuppone che il livello di espressione di autoanticorpi specifici dovrebbe essere alterato nel cancro, e quindi queste differenze possono indicare la presenza/assenza di cancro.

In questo protocollo sperimentale, stiamo verificando le differenze nei livelli di espressione di specifici autoanticorpi di sospetta patologia mammaria.

Futuro test CAAA Scopo dell'uso - L'identificazione di specifici CAAA mammari potrebbe fornire al medico ulteriori informazioni immunologiche e antigeniche riguardanti le condizioni o lo stato medico del paziente.

Fasi e componenti principali del test - Il test CAAA è composto da una fase di prelievo e trattamento del sangue seguita dal rilevamento di autoanticorpi specifici con un test basato su ELISA e un'elaborazione matematica, con una successiva classificazione dei risultati come "positivi" o "negativi" per il cancro al seno.

Popolazione di studio:

La popolazione in studio comprende tutte le donne per le quali è prevista una conferma patologica o citologica mediante qualsiasi tipo di biopsia o citologia, prima di qualsiasi trattamento antitumorale. Il sospetto clinico include uno dei seguenti: mammografia/ecografia/risonanza magnetica positiva e sospetto controllo fisico. La verifica finale ("vero positivo" o "vero negativo") sarà effettuata solo in relazione alla patologia/citologia.

Selezione del soggetto:

Il gruppo "vero positivo" è costituito da tutti i pazienti sequenziali che soddisfano i criteri di inclusione e hanno risultati bioptici positivi. Il gruppo "vero negativo" è costituito da pazienti sequenziali che soddisfano i criteri di inclusione e hanno risultati bioptici negativi.

Il consenso informato scritto deve essere ottenuto prima di ottenere un campione di sangue dal paziente.

Questo studio si baserà sulla partecipazione di più centri. Il numero minimo di siti per lo studio è 2.

Tutti i siti saranno all'interno degli ospedali o nel reparto di chirurgia o nell'unità specifica pertinente che è responsabile dell'assistenza ai pazienti con BC.

Lo stesso protocollo e le stesse routine di monitoraggio saranno applicate a tutti i siti. Tutti i dati CRF verranno inviati elettronicamente tramite un sito Internet dedicato e protetto, tutte le modifiche verranno monitorate. Durante l'esecuzione dei test CAAA, il team del laboratorio/sponsor non avrà informazioni sulla natura del campione. Queste informazioni patologiche saranno fornite per la valutazione statistica in parallelo al test CAAA.

PROGETTAZIONE DI STUDIO:

Descrizione generale - Il presente studio è uno studio di validazione caso-controllo in singolo cieco, che coinvolge tutti i soggetti con carcinoma mammario consecutivi con risultati bioptici positivi (veri positivi) e un numero uguale di pazienti con risultati bioptici negativi (veri negativi). Lo scopo dello studio è valutare l'efficacia del test CAAA.

L'efficacia dello studio è definita come la specificità del test CAAA per una sensibilità predefinita del 95%.

Lo studio valuterà la sensibilità del test CAAA per mostrare che non è inferiore al livello dichiarato del 95%.

Lo studio valuterà la specificità del test CAAA nella nuova popolazione in studio.

In base ai risultati noti del PPV della mammografia in varie popolazioni, assumiamo che la popolazione dello studio includa circa il 30% dei casi di cancro veramente positivi.

Ad oggi, gran parte dei soggetti sospetti è stata diagnosticata solo dalla patologia finale della biopsia. In questo studio, i veri casi positivi e veri negativi (verificati dalla biopsia) saranno confrontati con i risultati del test CAAA.

Procedure di studio

Nell'ospedale:

Innanzitutto, un soggetto di studio identificato deve firmare un modulo di consenso informato e il suo modulo di idoneità compilato, entrambi devono essere codificati a barre.

Le informazioni cliniche dei soggetti acquisite dalla cartella clinica del paziente, inclusi età, anamnesi e risultati dei test effettuati che hanno portato alla valutazione diagnostica del carcinoma mammario, saranno registrate sugli appositi moduli di segnalazione del caso pre-studio con codice a barre. I rapporti saranno elettronici tramite un sito internet dedicato e protetto, eventuali modifiche nel database saranno registrate e saranno tracciabili. Una copia cartacea degli atti sarà conservata in reparto. Lo studio è anonimo e il Dipartimento manterrà il nome del paziente senza rivelarlo agli investigatori e allo sponsor dello studio.

Il medico/infermiere/flebotomo raccoglierà una provetta sottovuoto di eparina (circa 8 ml), etichettandola (codice a barre). La provetta con il sangue sarà confezionata in un doppio contenitore sigillato.

Il sangue sarà trasportato a temperatura ambiente (18-25°C), secondo le normative vigenti, al laboratorio. Il tempo di trasporto non sarà superiore a 6 ore.

Il laboratorio di manipolazione del sangue raccoglierà il siero secondo il protocollo e il siero sarà conservato congelato a -80, in aliquote opportunamente etichettate. I campioni congelati saranno inviati al laboratorio diagnostico per i test anticorpali.

Nel laboratorio diagnostico verranno condotti su ogni campione test basati su ELISA per la rilevazione dei rapporti di espressione relativi di Auto Anticorpi, secondo il protocollo di laboratorio. I campioni saranno testati per i livelli di anticorpi per gli antigeni che sono stati identificati su un set di addestramento precedente. Tutti i dati verranno registrati permanentemente direttamente su un computer dedicato. Per ogni campione tutti i risultati degli anticorpi verranno inseriti nella cartella clinica codificata del paziente. Un algoritmo matematico determinerà se il campione è positivo o negativo.

In ospedale, dopo la biopsia:

Dopo 2-3 settimane dalla biopsia, il CRO raccoglierà dalla cartella del paziente gli esiti del laboratorio di patologia ed ogni altra informazione rilevante sulla natura della massa sospetta. Questi risultati saranno registrati sul sito internet dedicato e protetto e una CRF stampata con codice a barre sarà conservata presso il Dipartimento.

L'ospedale conserverà le fette delle masse sospette (provenienti da biopsia o intervento chirurgico) per futuri studi immunoistochimici o di altro tipo che saranno condotti dallo sponsor.

La patologia finale verrà confrontata con i risultati del test CAAA. I risultati saranno analizzati da uno statistico esperto in studi sulla popolazione oncologica.

I pazienti inclusi in questo studio sono sottoposti a esami del sangue e gli unici rischi sono quelli che comportano la raccolta del sangue. Poiché il trattamento non è influenzato dai risultati, nessun rischio è soggetto ai pazienti che partecipano allo studio.

Poiché lo studio viene condotto senza alcun collegamento con il singolo paziente, non vi è alcun beneficio immediato derivante dai test aggiuntivi eseguiti sul campione di sangue. Il vantaggio futuro può derivare dallo sviluppo del test.

L'attuale studio è uno studio di convalida prospettico cieco, che coinvolge tutti i soggetti con sospetta patologia mammaria consecutivi programmati per la biopsia durante la durata dello studio. Lo scopo dello studio è valutare la sensibilità e la specificità del test CAAA per il rilevamento del cancro al seno nelle donne in attesa di biopsia.

I soggetti saranno selezionati per la potenziale partecipazione allo studio, secondo i criteri di inclusione ed esclusione.

I dati includeranno parametri dello stato clinico e patologico dei soggetti e risultati di CAAA ELISA.

Ci sono due obiettivi dello studio.

1. Per verificare che la sensibilità del CAAA non sia inferiore al livello predefinito.
2. Valutare la specificità del test CAAA. Ipotesi statistica La condizione principale che determina la dimensione del campione è convalidare che la sensibilità del test non sia inferiore al livello predefinito. La regola di classificazione è stata stabilita in modo tale che la sensibilità nel training set fosse del 100%. Assumiamo che la reale sensibilità non sia inferiore al 99%.

Ipotesi nulla: la sensibilità del test non è superiore al 95%. Ipotesi alternativa: la sensibilità del test non è inferiore al 99%. Gestione dei dati Deve essere progettato e mantenuto un sistema di gestione del database, compresa la preparazione dello schermo e la programmazione del controllo delle modifiche. Il controllo di qualità pre-ingresso e post-ingresso dei dati clinici deve essere effettuato presso ciascun centro di inserimento dati. Tutti i risultati dei test ELISA verranno caricati nel database tramite un'interfaccia basata su Internet e saranno bloccati contro ulteriori modifiche. Per modificare i risultati del test ELISA, lo sblocco del database richiede il consenso della CRO locale, dello sponsor e del medico del sito. Lo sblocco sarà effettuato solo dal webmaster, e sarà registrato nel componente del sistema di tracciamento, e in una copia cartacea conservata sia dallo sponsor che dal CRO nel sito.