Badanie krwi na obecność autoprzeciwciał związanych z rakiem piersi

Informacje ogólne:

Ponieważ mutacje normalnej komórki, które prowadzą do nowotworu, obejmują zmiany w strukturze i funkcji komórek, można założyć, że układ odpornościowy rozpoznał niektóre z tych zmian jako determinanty antygenowe, przeciwko którym należy zareagować. Przez wiele lat badacze próbowali odróżnić chorych na raka od zdrowej populacji na podstawie różnicy w poziomie określonych autoprzeciwciał. W populacji zdrowej określono wyjściową ilość autoprzeciwciał, a populacja pacjentów musiała mieć statystycznie istotny wyższy poziom autoprzeciwciał. Wiele przykładów tej metody można znaleźć w literaturze naukowej [przykładowe odnośniki - Naora et.al. (2001); miętówka i. Glin. (2003); Kornejewa i in. Al (2000)]. Obecność autoprzeciwciał we wszystkich populacjach na różnych poziomach bardzo utrudniała znalezienie tych specyficznie rozróżniających przeciwciał. Do tej pory żadne specyficzne autoprzeciwciało nie rozróżniało wyłącznie pacjentów zdrowych i chorych na raka (w przeciwieństwie do chorób autoimmunologicznych, w których specyficzne autoprzeciwciała można znaleźć w bardzo wysokim stężeniu tylko u pacjentów).

W naszej pracy przyjęto założenie, że poziom ekspresji autoprzeciwciał w raku powinien być zmieniony, a zatem różnice te mogą wskazywać na obecność/nieobecność raka.

W tym protokole eksperymentu sprawdzamy różnice w poziomach ekspresji specyficznych autoprzeciwciał z podejrzeniem patologii piersi.

Przyszły test CAAA Przeznaczenie — Identyfikacja określonych CAAA piersi, może dostarczyć klinicyście dodatkowych informacji immunologicznych i antygenowych dotyczących stanu zdrowia pacjentki.

Główne etapy i elementy testu — Test CAAA składa się z etapu pobierania krwi i przetwarzania, po którym następuje wykrywanie swoistych autoprzeciwciał za pomocą testu ELISA i przetwarzania matematycznego, z późniejszą klasyfikacją wyników jako „dodatnie” lub „ujemne” na raka piersi.

Badana populacja:

Badana populacja obejmuje wszystkie kobiety, u których zaplanowano potwierdzenie patologiczne lub cytologiczne za pomocą dowolnego rodzaju biopsji lub cytologii przed jakimkolwiek leczeniem przeciwnowotworowym. Podejrzenie kliniczne obejmuje jedno z następujących: pozytywny wynik mammografii/USG/MRI i podejrzenie badania fizykalnego. Ostateczna weryfikacja („prawdziwie pozytywna” lub „prawdziwie negatywna”) zostanie przeprowadzona wyłącznie w odniesieniu do patologii/cytologii.

Wybór przedmiotu:

Grupa „prawdziwie pozytywna” obejmuje wszystkich kolejnych pacjentów, którzy spełniają kryteria włączenia i mają pozytywne wyniki biopsji. Grupa „prawdziwie negatywna” składa się z kolejnych pacjentów, którzy spełniają kryteria włączenia i mają negatywne wyniki biopsji.

Przed pobraniem próbki krwi od pacjenta należy uzyskać pisemną świadomą zgodę.

Badanie to będzie oparte na udziale wielu ośrodków. Minimalna liczba miejsc do badania to 2.

Wszystkie placówki będą znajdować się na terenie szpitali albo na oddziale chirurgii, albo w odpowiednim oddziale odpowiedzialnym za opiekę nad pacjentami z rakiem piersi.

We wszystkich lokalizacjach zostanie zastosowany ten sam protokół i te same procedury monitorowania. Wszystkie dane CRF będą przesyłane elektronicznie za pośrednictwem dedykowanej i zabezpieczonej strony internetowej, a wszystkie zmiany będą śledzone. Podczas wykonywania testów CAAA zespół laboratorium/sponsora nie będzie miał żadnych informacji dotyczących charakteru próbki. Te informacje patologiczne zostaną przekazane do oceny statystycznej równolegle z testem CAAA.

PROJEKT BADANIA:

Ogólny opis - Obecne badanie jest pojedynczym ślepym badaniem kliniczno-kontrolnym, obejmującym wszystkie kolejne pacjentki z rakiem piersi, które uzyskały pozytywne wyniki biopsji (prawdziwie pozytywne) i taką samą liczbę pacjentów z negatywnymi wynikami biopsji (prawdziwie negatywne). Celem pracy jest ocena skuteczności testu CAAA.

Skuteczność badania definiowana jest jako specyficzność testu CAAA dla zadanej czułości 95%.

W pracy zostanie oceniona czułość testu CAAA, aby wykazać, że nie jest ona niższa od deklarowanego poziomu 95%.

Celem pracy będzie ocena swoistości testu CAAA w nowej populacji badawczej.

Na podstawie znanych wyników PPV mammografii w różnych populacjach zakładamy, że badana populacja będzie obejmowała około 30% prawdziwie dodatnich przypadków raka.

Na dzień dzisiejszy duża część podejrzanych została zdiagnozowana dopiero na podstawie ostatecznej patologii biopsji. W tym badaniu przypadki prawdziwie dodatnie i prawdziwie ujemne (potwierdzone biopsją) zostaną porównane z wynikami testu CAAA.

Procedury Studiów

W szpitalu:

Po pierwsze, zidentyfikowany uczestnik badania musi podpisać formularz świadomej zgody i wypełnić swój formularz kwalifikacyjny, oba powinny być opatrzone kodem kreskowym.

Informacje kliniczne pacjentów uzyskane z dokumentacji medycznej pacjenta, w tym wiek, historia choroby i wyniki badań przeprowadzonych prowadzących do oceny diagnostycznej raka piersi, zostaną zapisane na odpowiednich, opatrzonych kodami kreskowymi, formularzach opisów przypadków poprzedzających badanie. Sprawozdania będą elektroniczne za pośrednictwem dedykowanej i zabezpieczonej strony internetowej, a wszelkie zmiany w bazie danych będą rejestrowane i możliwe do prześledzenia. Wydrukowana kopia akt będzie przechowywana w oddziale. Badanie jest anonimowe, a Departament zachowa nazwisko pacjenta bez ujawniania go badaczom i sponsorowi badania.

Lekarz / pielęgniarka / flebotomista pobierze rurkę próżniową z heparyną (około 8 ml), oznaczy ją (kod kreskowy). Probówka z krwią zostanie zapakowana w podwójnie uszczelniony pojemnik.

Krew będzie transportowana do laboratorium w temperaturze pokojowej (18-25°C), zgodnie z obowiązującymi przepisami. Czas transportu nie będzie dłuższy niż 6 godzin.

Laboratorium zajmujące się krwią pobierze surowicę zgodnie z protokołem, a surowica będzie zamrożona w temperaturze -80°C w odpowiednio oznakowanych porcjach. Zamrożone próbki zostaną przesłane do laboratorium diagnostycznego w celu wykonania badań na obecność przeciwciał.

W laboratorium diagnostycznym testy ELISA do wykrywania względnych współczynników ekspresji autoprzeciwciał będą przeprowadzane na każdej próbce zgodnie z protokołem laboratoryjnym. Próbki zostaną przetestowane pod kątem poziomów przeciwciał dla antygenów, które zostały zidentyfikowane na poprzednim zestawie treningowym. Wszystkie dane będą trwale zapisywane bezpośrednio na dedykowanym komputerze. Dla każdej próbki wszystkie wyniki przeciwciał zostaną umieszczone w zakodowanej teczce pacjenta. Algorytm matematyczny określi, czy próbka jest dodatnia, czy ujemna.

W szpitalu, po biopsji:

2-3 tygodnie po biopsji CRO zbierze z dokumentacji pacjenta wyniki z laboratorium patologicznego i wszelkie inne istotne informacje dotyczące charakteru podejrzanej zmiany. Wyniki te zostaną zapisane na specjalnej i zabezpieczonej stronie internetowej, a wydrukowany CRF z kodem kreskowym będzie przechowywany w Departamencie.

Szpital zachowa wycinki z podejrzanych guzów (z biopsji lub zabiegu chirurgicznego) do przyszłych badań immunohistochemicznych lub innych, które zostaną przeprowadzone przez sponsora.

Ostateczna patologia zostanie porównana z wynikami testu CAAA. Wyniki zostaną przeanalizowane przez statystyka posiadającego doświadczenie w badaniach populacji nowotworów.

Pacjenci objęci tym badaniem przechodzą badanie krwi, a jedynym ryzykiem jest ryzyko związane z pobieraniem krwi. Ponieważ wyniki nie mają wpływu na leczenie, pacjenci biorący udział w badaniu nie są narażeni na żadne ryzyko.

Ponieważ badanie jest prowadzone bez powiązania z indywidualnym pacjentem, dodatkowe testy przeprowadzane na próbce krwi nie przynoszą natychmiastowych korzyści. Przyszłe korzyści mogą wynikać z rozwoju testu.

Obecne badanie jest ślepym prospektywnym badaniem walidacyjnym, w którym wszystkie kolejne pacjentki z podejrzeniem patologii piersi są zaplanowane na biopsję w czasie trwania badania. Celem pracy jest ocena czułości i swoistości testu CAAA w wykrywaniu raka piersi u kobiet planowanych do biopsji.

Pacjenci zostaną poddani badaniu przesiewowemu pod kątem potencjalnego udziału w badaniu, zgodnie z kryteriami włączenia i wyłączenia.

Dane będą zawierać parametry stanu klinicznego i patologicznego badanych oraz wyniki testu CAAA ELISA.

Istnieją dwa cele badania.

1. Aby sprawdzić, czy czułość CAAA nie jest niższa od wcześniej określonego poziomu.
2. Ocena swoistości testu CAAA. Hipoteza statystyczna Głównym warunkiem określającym liczebność próby jest walidacja, czy czułość testu nie jest niższa od zadanego poziomu. Regułę klasyfikacji ustalono w taki sposób, aby czułość w zbiorze uczącym wynosiła 100%. Zakładamy, że rzeczywista czułość nie jest mniejsza niż 99%.

Hipoteza zerowa: Czułość testu nie przekracza 95%. Hipoteza alternatywna: Czułość testu jest nie mniejsza niż 99%. Zarządzanie danymi Należy zaprojektować i utrzymywać system zarządzania bazą danych, w tym przygotowanie ekranu i programowanie kontroli edycji. W każdym centrum wprowadzania danych przeprowadza się kontrolę jakości danych klinicznych przed wprowadzeniem i po wprowadzeniu. Wszystkie wyniki testu ELISA zostaną przesłane do bazy danych za pośrednictwem interfejsu internetowego i zostaną zablokowane przed dalszymi zmianami. Aby zmienić wyniki testu ELISA, odblokowanie bazy danych wymaga zgody lokalnego CRO, sponsora i lekarza ośrodka. Odblokowanie zostanie dokonane tylko przez webmastera i zostanie zapisane w komponencie systemu śledzenia oraz w formie papierowej posiadanej zarówno przez sponsora, jak i CRO na stronie.