Krevní test na autoprotilátky související s rakovinou prsu

Obecná informace:

Vzhledem k tomu, že mutace normální buňky, které vedou k malignitě, zahrnují změny ve struktuře a funkci buněk, lze předpokládat, že imunitní systém některé z těchto změn rozpoznal jako antigenní determinanty, proti kterým je třeba reagovat. Po mnoho let se výzkumníci snažili rozlišovat mezi pacienty s rakovinou a zdravou populací rozdílem v hladině specifických autoprotilátek. U zdravé populace byla stanovena výchozí hodnota množství autoprotilátek a populace pacientů musela mít statisticky významně vyšší hladinu autoprotilátek. Mnoho příkladů této metody lze nalézt ve vědecké literatuře [příkladové odkazy - Naora et.al. (2001); mintz et. Al. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. Přítomnost autoprotilátek v celé populaci v různých hladinách velmi ztěžovala nalezení těchto specificky rozlišujících protilátek. Dosud žádná specifická autoprotilátka nerozlišuje pouze mezi zdravými a onkologickými pacienty (na rozdíl od autoimunitních onemocnění, kde lze specifické autoprotilátky nalézt ve velmi vysokých hladinách pouze u pacientů).

Naše práce předpokládá, že hladina exprese specifických autoprotilátek by měla být u rakoviny změněna, a tak tyto rozdíly mohou indikovat přítomnost/nepřítomnost rakoviny.

V tomto protokolu experimentu kontrolujeme rozdíly v hladinách exprese specifických autoprotilátek s podezřením na patologii prsu.

Budoucí test CAAA Účel použití – Identifikace specifických CAAA prsu by mohla poskytnout klinickému lékaři další imunologické a antigenní informace týkající se stavu pacientky nebo zdravotního stavu.

Hlavní kroky a komponenty testu – Test CAAA se skládá z kroku odběru a zpracování krve, po kterém následuje detekce specifických autoprotilátek pomocí testu založeného na ELISA a matematického zpracování s následnou klasifikací výsledků jako „pozitivní“ nebo „negativní“ pro rakovinu prsu.

Studijní populace:

Studovaná populace zahrnuje všechny ženy, u kterých je plánováno patologické nebo cytologické potvrzení buď jakýmkoli druhem biopsie nebo cytologie, před jakoukoli protirakovinnou léčbou. Klinické podezření zahrnuje jedno z následujících: pozitivní mamografie/US/MRI a podezření na fyzickou kontrolu. Finální ověření ("skutečně pozitivní" nebo "skutečně negativní") bude provedeno pouze ve vztahu k patologii/cytologii.

Výběr předmětu:

Skupina „skutečně pozitivní“ se skládá ze všech následných pacientů, kteří splňují kritéria pro zařazení a mají pozitivní výsledky biopsie. "Skutečně negativní" skupina sestává z pacientů po řadě, kteří splňují kritéria pro zařazení a mají negativní výsledky biopsie.

Před odběrem vzorku krve od pacienta je nutné získat písemný informovaný souhlas.

Tato studie bude založena na účasti více center. Minimální počet míst pro studii jsou 2.

Všechna pracoviště budou v rámci nemocnic buď na chirurgickém oddělení nebo na příslušném specifickém oddělení, které je zodpovědné za poskytování péče o pacienty s BC.

Na všechny lokality bude použit stejný protokol a stejné monitorovací rutiny. Všechna data CRF budou odeslána elektronicky prostřednictvím vyhrazené a zabezpečené internetové stránky, všechny změny budou sledovány. Při provádění testů CAAA nebude mít tým laboratoře/sponzorů žádné informace o povaze vzorku. Tyto patologické informace budou poskytnuty pro statistické vyhodnocení souběžně s testem CAAA.

STUDOVAT DESIGN:

Celkový popis - Současná studie je jedinou slepou validační studií případ-kontrola, zahrnující všechny po sobě jdoucí subjekty s rakovinou prsu, které mají pozitivní výsledky biopsie (skutečně pozitivní) a stejný počet pacientů s negativními výsledky biopsie (skutečně negativní). Účelem studie je vyhodnotit účinnost testu CAAA.

Účinnost studie je definována jako specificita testu CAAA pro předem definovanou senzitivitu 95 %.

Studie vyhodnotí citlivost testu CAAA, aby prokázala, že není pod deklarovanou úrovní 95 %.

Studie vyhodnotí specificitu testu CAAA v nové studijní populaci.

Podle známých výsledků PPV mamografie v různých populacích předpokládáme, že studovaná populace bude zahrnovat asi 30 % skutečně pozitivních případů rakoviny.

K dnešnímu dni byla velká část podezřelých subjektů diagnostikována až konečnou patologií biopsie. V této studii budou skutečně pozitivní a skutečně negativní případy (jak bylo ověřeno biopsií) porovnány s výsledky testu CAAA.

Studijní postupy

V nemocnici:

Nejprve musí identifikovaný subjekt studie podepsat formulář informovaného souhlasu a vyplnit formulář o způsobilosti, oba by měly být označeny čárovým kódem.

Klinické informace o subjektech získané ze zdravotní dokumentace pacienta, včetně věku, anamnézy a výsledků provedených testů vedoucích k diagnostickému vyhodnocení rakoviny prsu, budou zaznamenány na příslušných formulářích kazuistiky s čárovým kódem před zahájením studie. Zprávy budou elektronické prostřednictvím vyhrazené a zabezpečené internetové stránky, veškeré změny v databázi budou zaznamenány a budou dohledatelné. Tištěná kopie záznamů bude uložena na oddělení. Studie je anonymní a oddělení si ponechá jméno pacienta, aniž by je sdělilo zkoušejícím a zadavateli studie.

Lékař/sestra/flebotomista odebere heparinovou vakuovou zkumavku (asi 8ml), označí je (čárovým kódem). Zkumavka s krví bude zabalena ve dvojitě uzavřené nádobě.

Krev bude transportována při pokojové teplotě (18-25°C) dle příslušných předpisů do laboratoře. Doba přepravy nebude delší než 6 hodin.

Laboratoř pro manipulaci s krví odebere sérum podle protokolu a sérum bude uchováváno zmrazené na -80 °C v řádně označených alikvotech. Zmrazené vzorky budou odeslány do diagnostické laboratoře na testy na protilátky.

V diagnostické laboratoři budou na každém vzorku prováděny testy založené na ELISA pro detekci poměrů relativní exprese autoprotilátek podle laboratorního protokolu. Vzorky budou testovány na hladiny protilátek pro antigeny, které byly identifikovány v předchozím tréninkovém setu. Všechna data budou trvale zaznamenávána přímo do vyhrazeného počítače. Pro každý vzorek budou všechny výsledky protilátek vloženy do kódovaného souboru pacienta. Matematický algoritmus určí, zda je vzorek pozitivní nebo negativní.

V nemocnici po biopsii:

2-3 týdny po biopsii CRO shromáždí ze souboru pacienta výsledky z patologické laboratoře a jakékoli další relevantní informace o povaze suspektního útvaru. Tyto výsledky budou zaznamenány na vyhrazené a zabezpečené internetové stránce a vytištěný CRF s čárovým kódem bude uložen na katedře.

Nemocnice uchová řezy z podezřelých mas (buď z biopsie nebo chirurgického zákroku) pro budoucí imunohistochemické nebo jiné studie, které provede zadavatel.

Konečná patologie bude porovnána s výsledky testu CAAA. Výsledky budou analyzovány statistikem se zkušenostmi v populačních studiích rakoviny.

Pacienti zahrnutí do této studie podstupují krevní testy a pouze rizika jsou ta, která se týkají odběru krve. Vzhledem k tomu, že léčba není ovlivněna výsledky, nejsou pacienti účastnící se studie vystaveni žádnému riziku.

Vzhledem k tomu, že studie je prováděna bez vazby na jednotlivého pacienta, další testy provedené na vzorku krve nemají žádný okamžitý přínos. Budoucí přínos může být odvozen z vývoje testu.

Současná studie je slepá prospektivní validační studie zahrnující všechny po sobě jdoucí subjekty s podezřením na patologii prsu, u kterých je během trvání studie plánována biopsie. Účelem studie je posoudit senzitivitu a specificitu testu CAAA pro detekci karcinomu prsu u žen, u kterých je plánována biopsie.

Subjekty budou testovány na potenciální účast ve studii podle kritérií pro zařazení a vyloučení.

Data budou zahrnovat parametry klinického a patologického stavu subjektů a výsledky CAAA ELISA.

Studie má dva cíle.

1. Otestovat, že citlivost CAAA není pod předem definovanou úrovní.
2. Vyhodnotit specifičnost testu CAAA. Statistická hypotéza Hlavní podmínkou pro určení velikosti vzorku je ověření, že citlivost testu není nižší než předem definovaná úroveň. Klasifikační pravidlo bylo stanoveno tak, že citlivost v tréninkové sadě byla 100 %. Předpokládáme, že skutečná citlivost není nižší než 99 %.

Nulová hypotéza: Senzitivita testu není vyšší než 95 %. Alternativní hypotéza: Senzitivita testu není menší než 99 %. Správa dat Musí být navržen a udržován systém správy databáze, včetně přípravy obrazovky a programování kontroly úprav. Předvstupní a povstupní kontrola kvality klinických údajů se provádí v každém vstupním středisku. Všechny výsledky testů ELISA budou nahrány do databáze přes internetové rozhraní a budou uzamčeny proti dalším změnám. Aby bylo možné změnit výsledky testu ELISA, odblokování databáze vyžaduje souhlas místního CRO, sponzora a lékaře na místě. Odemknutí bude provedeno pouze webmasterem a bude záznamem v komponentě systému sledování a v tištěné podobě, kterou bude mít sponzor i CRO na webu.